本文關(guān)鍵詞： 組織工程角膜 細菌纖維素 角膜基質(zhì)細胞　出處：《吉林大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 以細菌纖維素為支架構(gòu)建組織工程角膜基質(zhì),研究其在體內(nèi)外的生物相容性和降解性。 方法： 將大耳白兔角膜基質(zhì)細胞進行體外分離、培養(yǎng)和擴增后,種植到BC膜上繼續(xù)培養(yǎng),細胞爬滿后移植到同種同體基質(zhì)囊袋中。術(shù)后定期應(yīng)用裂隙燈、前節(jié)OCT和Cs-4檢查移植后兔眼的組織形態(tài)學改變和復合膜的降解情況,同時觀察兔眼有無炎癥反應(yīng)和新生血管的發(fā)生。分別于術(shù)后2、5、7個月,用角膜剪無菌摘除右眼角膜,置于4%戊二醛固定,進行HE染色、免疫組化和掃描電鏡觀察。 結(jié)果： 兔角膜基質(zhì)細胞在BC上生長良好。術(shù)后1周兔眼無刺激癥狀,植片處無新生血管。術(shù)后1個月可見較深長的新生血管貫穿植片,但角膜未水腫,植片周圍的角膜組織透明性有所好轉(zhuǎn)。2個月時,角膜呈半透明,復合膜片大小有所縮減,新生血管較1個月時好轉(zhuǎn)。7個月時角膜新生血管變少變細,其透明性好轉(zhuǎn)。 前節(jié)OCT和共焦顯微鏡檢查：移植術(shù)后1周角膜基質(zhì)細胞-BC復合膜密度明顯高于正常角膜組織,術(shù)后5月時復合膜邊界模糊,密度接近正常角膜組織,說明復合膜發(fā)生降解。術(shù)后2月共焦顯微鏡顯示植片周圍的內(nèi)皮細胞數(shù)量和形態(tài)大致正常。術(shù)后7月基質(zhì)細胞密度下降,偶見神經(jīng)纖維。 病理檢查：術(shù)后5月時,角膜上皮細胞增生,排列紊亂,基質(zhì)細胞—BC復合膜的纖維結(jié)構(gòu)與正常角膜基質(zhì)有區(qū)別,兩者粘連不緊密,有炎細胞浸潤,角膜組織無壞死和溶解。術(shù)后7月時,角膜上皮細胞仍增生,但排列規(guī)整,復合膜內(nèi)未見空泡,有細胞結(jié)構(gòu),說明BC沒有發(fā)生劇烈降解,BC兩側(cè)和內(nèi)部可見與角膜基質(zhì)細胞相同的細胞結(jié)構(gòu),周圍有少量炎癥細胞浸潤,角膜組織未見溶解壞死。 免疫組化檢查：移植術(shù)后2、5、7月,三只大耳白兔的復合膜均呈現(xiàn)α-SMA染色陽性,說明在體內(nèi)基質(zhì)細胞被活化為肌成纖維細胞,但隨移植時間的推移,基質(zhì)細胞的活化數(shù)量逐漸減少。掃描電鏡顯示復合膜與正常角膜組織結(jié)構(gòu)界限清晰,術(shù)后7個月時仍能見到復合膜。 結(jié)論： BC的細胞相容性良好,構(gòu)建角膜基質(zhì)細胞-BC復合膜成功。BC具有可降解性,但BC膜在體內(nèi)降解速度較慢。角膜新生血管、肌成纖維細胞的增殖與角膜透明性相關(guān)。
[Abstract]:Objective: Tissue engineered corneal stroma was constructed with bacterial cellulose as scaffold to study its biocompatibility and biodegradability in vitro and in vivo. Methods: Rabbit corneal stromal cells were isolated in vitro, cultured and expanded, then cultured on BC membrane, then transplanted into homologous matrix bag after seeding. Slit lamp was used regularly after operation. Anterior segment OCT and Cs-4 were used to examine the histomorphologic changes and the degradation of composite membrane in rabbit eyes after transplantation, and to observe whether there were inflammatory reaction and angiogenesis in rabbit eyes at 2 and 7 months postoperatively. The cornea of right eye was removed with corneal scissors and fixed with 4% glutaraldehyde for HE staining, immunohistochemistry and scanning electron microscopy. Results: Rabbit corneal stromal cells grew well on BC. There were no irritating symptoms in rabbit eyes and no neovascularization in the grafts 1 week after operation. A longer neovascularization was observed 1 month after operation, but corneal edema was not observed. The transparency of corneal tissue around the grafts was improved. At 2 months, the cornea was translucent, the size of composite membrane was reduced, the neovascularization was better than that at 1 month, and the corneal neovascularization became smaller and thinner at 7 months. Its transparency has improved. Anterior segment OCT and confocal microscopy: the density of corneal stromal cell-BC composite membrane was significantly higher than that of normal corneal tissue at 1 week after transplantation. On May, the boundary of composite membrane was blurred and the density was close to normal corneal tissue. The results showed that the number and morphology of endothelial cells around the grafts were normal on February, and the density of stromal cells decreased in July, and the nerve fibers were occasionally seen. Pathological examination: on May, corneal epithelial cells proliferated and arranged in disorder. The fibrous structure of stromal cell-BC composite membrane was different from that of normal corneal stroma, the adhesion between them was not close and inflammatory cells infiltrated. On July, corneal epithelial cells were still proliferated, but arranged regularly. There were no vacuoles and cellular structure in the composite membrane, indicating that BC did not degrade violently. The same cellular structure was observed in both sides and inside of BC with a small amount of inflammatory cells infiltrating around it and no necrosis in corneal tissue. Immunohistochemical examination: on July, the composite membrane of three rabbits showed 偽 -SMA staining, indicating that stromal cells were activated into myofibroblasts in vivo. However, the activation of stromal cells decreased gradually with the development of transplantation time, and the boundary between the composite membrane and the normal corneal tissue structure was clear by scanning electron microscope, and the composite membrane could still be seen 7 months after transplantation. Conclusion: The cytocompatibility of BC was good. The successfully constructed corneal stromal cell-BC composite membrane was biodegradable, but the degradation rate of BC membrane in vivo was slow and corneal neovascularization. Proliferation of myofibroblasts is related to corneal transparency.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R779.6

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