本文關(guān)鍵詞：電離輻射誘導(dǎo)人鼻咽癌細(xì)胞系CNE-2細(xì)胞自噬及自噬抑制與CNE-2細(xì)胞放射敏感性關(guān)系的研究

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【摘要】：研究目的：鼻咽癌是我國華南各省高發(fā)的惡性腫瘤之一,放射治療被公認(rèn)為鼻咽癌首選的治療方法,近年來隨著放射治療技術(shù)的革新及各種治療手段的綜合應(yīng)用,鼻咽癌治療的療效及預(yù)后有所改善,但鼻咽癌細(xì)胞的放射抵抗仍然是制約其療效及預(yù)后的主要因素之一。本文通過探討自噬現(xiàn)象在射線照射致人鼻咽低分化鱗癌細(xì)胞系(CNE-2)細(xì)胞死亡過程中的作用及PARP-1在射線照射所誘導(dǎo)CNE-2細(xì)胞自噬調(diào)控中的作用,以期尋找人鼻咽癌低分化細(xì)胞放射抗拒的可能機(jī)制,為提高鼻咽癌放射治療敏感性提供理論依據(jù)。 方法：采用Western blotting技術(shù)檢測人鼻咽低分化癌細(xì)胞系CNE-2細(xì)胞經(jīng)射線照射后PARP-1、PAR、LC3-Ⅱ的變化。采用透射電子顯微鏡檢測經(jīng)不同處理后CNE-2細(xì)胞自噬小體及自噬空泡的數(shù)量；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CNE-2細(xì)胞經(jīng)不同處理后不同時(shí)間點(diǎn)的凋亡率；應(yīng)用MTT法檢測經(jīng)不同處理的CNE-2細(xì)胞經(jīng)射線照射后不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞增殖能力并計(jì)算細(xì)胞存活率；應(yīng)用細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測射線單純照射組、自噬抑制劑磷酸氯喹(CDP)聯(lián)合射線照射組、自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素(RAPA)聯(lián)合射線照射組、PARP-1抑制劑3-氨基苯甲酰胺(3-AB)聯(lián)合照射組不同因素處理下CNE-2細(xì)胞的存活能力及放射敏感性并擬合劑量存活曲線、計(jì)算放射生物學(xué)參數(shù)α、β、α／β和SF2值,比較各組放射敏感性。 結(jié)果：透射電鏡檢測結(jié)果顯示電離輻射可致CNE-2細(xì)胞發(fā)生明顯的自噬現(xiàn)象,鏡下見較多自噬體及自噬空泡形成,而自噬抑制劑磷酸氯喹(CDP)抑制射線照射所致自噬體及自噬空泡的形成,自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素(RAPA)增加照射致自噬體及自噬空泡的數(shù)量(F=105.15,P0.01)。電離輻射促使自噬標(biāo)志物L(fēng)C3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的轉(zhuǎn)化,而自噬抑制劑CDP可抑制射線引起的LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的轉(zhuǎn)化,相反自噬誘導(dǎo)劑RAPA促進(jìn)LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的轉(zhuǎn)化(F=231.68,P0.01)。射線引起的PARP-1的激活,并伴隨著大量PAR多聚體的形成以及LC3-Ⅱ的表達(dá)水平的升高,但PAR多聚體的形成明顯早于LC3-Ⅱ的表達(dá)水平的升高,而且PAR多聚體水平在射線照射后2小時(shí)即恢復(fù)到正常水平。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：與單純射線照射組相比,自噬抑制劑CDP、自噬誘導(dǎo)劑RAPA或PARP-1抑制劑3-AB聯(lián)合射線照射顯著增加射線照射后48小時(shí)CNE-2細(xì)胞凋亡率(F=109.69,P0.01)；MTT檢測結(jié)果顯示：與單純射線照射組相比CDP、RAPA或3-AB聯(lián)合射線照射降低射線照射后72小時(shí)CNE-2細(xì)胞的存活率(F=50.40,P0.01)；二次線性模型擬合劑量存活曲線示自噬抑制劑CDP、自噬誘導(dǎo)劑RAPA、PARP-1抑制劑3-AB增加CNE-2細(xì)胞株的放射敏感性。 結(jié)論：PARP-1通過mTOR調(diào)控射線所致的自噬,自噬在射線致細(xì)胞死亡的過程中起到保護(hù)作用。射線照射聯(lián)合自噬抑制劑CDP、自噬誘導(dǎo)劑RAPA、PARP-1抑制劑3-AB顯著增加了CNE-2細(xì)胞株對射線的敏感性,提示CDP、RAPA、3-AB或可用于鼻咽癌的輔助治療,但尚需進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床試驗(yàn)的驗(yàn)證。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1292195