發(fā)布時間：2017-08-24 12:33

  本文關(guān)鍵詞：以iTRAQ技術(shù)研究大鼠肝纖維化發(fā)展為肝癌過程中的關(guān)鍵蛋白

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【摘要】：目的：分析肝纖維化-肝癌動物模型中四個時間點肝組織差異表達(dá)的蛋白,尋找肝纖維化發(fā)展為肝癌過程中的關(guān)鍵蛋白。方法：利用二乙基亞硝胺建立大鼠肝纖維化-肝癌模型,提取模型大鼠中第4周,第10周,第12周,第18周四個時間點的肝組織蛋白,以正常喂養(yǎng)的大鼠肝組織作為對照組,采用iTRAQ結(jié)合2D-LC-MS/MS定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析肝組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。從生物過程、細(xì)胞成分注釋、分子功能、信號通路富集、蛋白之間相互作用五大方面對篩選出的差異蛋白進(jìn)行深層次分析。結(jié)果：質(zhì)譜分析共鑒定到2085個蛋白,各個時間點篩選到的差異表達(dá)蛋白為：第4周148個,上調(diào)蛋白61個,下調(diào)蛋白87個；第10周233個,上調(diào)蛋白87個,下調(diào)蛋白146個；第12周72個,上調(diào)蛋白38個,下調(diào)蛋白34個；第18周573個,上調(diào)蛋白210個,下調(diào)蛋白363個。在四個時間點均重復(fù)鑒定到的蛋白有23個,含上調(diào)蛋白有10個,下調(diào)蛋白有13個。GO分析表明,差異表達(dá)的蛋白在細(xì)胞生物過程功能中主要參與代謝過程、細(xì)胞過程、生物學(xué)調(diào)節(jié)和細(xì)胞信號傳導(dǎo)等過程；在細(xì)胞位置中主要附著于細(xì)胞器、細(xì)胞膜上、細(xì)胞外基質(zhì)、突觸、細(xì)胞結(jié)合等位置；在分子功能中主要參與催化活性、綁定功能、轉(zhuǎn)運、酶活性調(diào)節(jié)、抗氧化等功能。信號通路富集分析發(fā)現(xiàn),差異表達(dá)的蛋白主要參與氨基酸降解、化學(xué)致癌、二羧酸代謝、色氨酸代謝、甾類激素的生物合成、糖酵解等相關(guān)通路。蛋白相互作用分析顯示,處在蛋白互作關(guān)鍵節(jié)點的蛋白有細(xì)胞色素P450系3A1、細(xì)胞色素P450系2C55、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶a5、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶α2、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶P、增殖細(xì)胞核抗原、絲裂原活化蛋白激酶3、α2-HS-糖蛋白、細(xì)胞周期依賴性激酶4、α1巨球蛋白、醛糖還原酶和纖維蛋白原等蛋白。結(jié)論：(1)成功構(gòu)建二乙基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化-肝癌模型,并在造模的四個時間點,從組織病理學(xué)上揭示了肝纖維化發(fā)展成為肝癌過程(2)細(xì)胞周期依賴性激酶4、α1巨球蛋白、a2-HS-糖蛋白、絲裂原活化蛋白激酶3、羧酸酯酶2c等參與多種生物信號途徑,并處在蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的節(jié)點上,與肝纖維化或肝癌密切相關(guān),可能為肝纖維化發(fā)展為肝癌的關(guān)鍵蛋白。(3) PI3K-Akt信號通路與細(xì)胞色素P450信號通路中的絲裂原活化蛋白激酶3、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4,層粘連蛋白家族、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶家族蛋白、細(xì)胞色素P4501A2家族蛋白等30個蛋白在肝纖維化-肝癌大鼠模型中的表達(dá)量發(fā)生了顯著變化,提示這兩條生物信號通路可能是肝纖維化發(fā)展為肝癌的兩個重要的調(diào)控通路。
【關(guān)鍵詞】：肝纖維化-肝癌模型 肝組織 iTRAQ 關(guān)鍵蛋白
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2;R735.7
【目錄】：

• 個人簡歷3-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 主要英文縮寫列表12-13
• 前言13-16
• 一、材料與方法16-29
• 1. 材料16-20
• (1) 主要儀器16
• (2) 主要試劑16-18
• (3) 主要溶液配制18-20
• 2. 方法20-29
• (1) 大鼠肝纖維化-肝癌模型建立20-21
• (2) 肝組織蛋白質(zhì)的提取與定量21-23
• (3) 雙向電泳實驗分析蛋白質(zhì)量23-26
• (4) 蛋白質(zhì)樣品處理及iTRAQ標(biāo)記26-27
• (5) 蛋白2D-LC-MS/MS分析27-28
• (6) 蛋白定性和定量28
• (7) 生物信息學(xué)處理28-29
• 二、結(jié)果29-42
• 1. 大鼠生理狀態(tài)和病理學(xué)觀察29-30
• 2. 蛋白質(zhì)濃度及SDS-PAGE結(jié)果30-32
• 3. 雙向電泳結(jié)果分析32-33
• 4. 質(zhì)譜的統(tǒng)計分析結(jié)果33-37
• (1) 質(zhì)譜鑒定分析的總蛋白結(jié)果33-34
• (2) 差異表達(dá)蛋白篩選34-37
• 5. 差異表達(dá)蛋白的生物學(xué)分析37-42
• (1) 差異表達(dá)蛋白的GO分析37-40
• (2) 差異表達(dá)蛋白的pathway分析40-41
• (3) 差異表達(dá)蛋白相互作用分析41-42
• 三、討論42-49
• 四、結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 附錄56-82
• 綜述82-91
• 摘要82-83
• 前言83
• 1、蛋白組學(xué)概述83-84
• 2、蛋白質(zhì)組學(xué)的主要研究技術(shù)84-86
• 3、蛋白組學(xué)在肝臟疾病中的應(yīng)用86-88
• (1) 闡明肝臟疾病的發(fā)病機制86
• (2) 篩選、鑒定腫瘤特異性標(biāo)記和特異性抗原86-87
• (3) 在腫瘤治療和藥物開發(fā)中的應(yīng)用87-88
• 4、展望88
• 參考文獻(xiàn)88-91
• 致謝91-92
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文92

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：731335