發(fā)布時間：2017-08-06 10:25

  本文關(guān)鍵詞：小鼠肝臟原代Kupffer細(xì)胞的分離和純化

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【摘要】：目的利用低速離心和差速貼壁的特性,探索一種高效分離純化BALB/c小鼠Kupffer細(xì)胞(KC)的方法。方法采用0.5 g/L 4型膠原蛋白酶原位灌注和消化肝臟組織,低速分離肝臟的細(xì)胞后差速貼壁分離純化KC,與Percoll密度梯度離心分離方法比較KC的產(chǎn)量和活性,應(yīng)用F4/80免疫熒光染色鑒定細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞術(shù)檢測F4/80的表達(dá)、墨汁吞噬實驗進(jìn)行吞噬功能鑒定。構(gòu)建KC缺氧/復(fù)氧模型,流式細(xì)胞術(shù)檢測主要組織相容性復(fù)合體(MHC)Ⅱ、CD40、CD68和CD86的表達(dá),ELISA檢測腫瘤壞死因子α(TNF-α)的表達(dá)。結(jié)果每只小鼠肝臟可獲得(5.83±0.54)×106個KC,細(xì)胞存活率達(dá)92%,Percoll密度梯度分離僅能獲得(2.19±0.43)×106個KC,F4/80免疫熒光染色顯示貼壁后KC呈梭形或棘狀,流式細(xì)胞術(shù)鑒定F4/80陽性細(xì)胞占比接近90%,吞墨實驗可見胞質(zhì)內(nèi)大量被吞噬的碳顆粒。KC在缺氧復(fù)氧模型下MHC-Ⅱ、CD40、CD86分子表達(dá)增多,并分泌TNF-α參與炎癥反應(yīng)。結(jié)論成功建立了BALB/c小鼠KC分離純化的方法。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院肝膽外科;
【關(guān)鍵詞】： 庫普弗細(xì)胞(Kupffer細(xì)胞) 分離方法 改良 小鼠
【基金】：重慶市科技計劃項目(cstc2015shmszx120019)
【分類號】：R575
【正文快照】： 庫普弗細(xì)胞(Kupffer cells,KC)是肝臟含量豐富的免疫細(xì)胞,其數(shù)量約占肝非實質(zhì)細(xì)胞數(shù)量的30%[1]。KC參與多種因素所致的肝損傷及繼發(fā)病變,在炎癥反應(yīng)、缺血再灌注損傷、移植和腫瘤免疫等發(fā)揮至關(guān)重要的作用[2-5]。體外原代培養(yǎng)是目前研究KC參與調(diào)控相關(guān)疾病作用機制的有效手段

【相似文獻(xiàn)】

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