目的通過(guò)油酸(Oleic acid,OA)干預(yù)HepG2細(xì)胞建立非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型細(xì)胞,探討SIRT3調(diào)控NAFLD模型細(xì)胞氧化應(yīng)激的機(jī)制及丹酚酸B(Salvianolic acid,Sal B)干預(yù)作用。方法將HepG2細(xì)胞分為對(duì)照組、模型組(OA)及干預(yù)組(OA+Sal B)。對(duì)照組細(xì)胞用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h;模型組細(xì)胞用含1 mmol/L OA的培養(yǎng)基干預(yù)24 h;干預(yù)組細(xì)胞用含1 mmol/L OA的培養(yǎng)基干預(yù)24 h,然后用含Sal B的培養(yǎng)基處理3 h。干預(yù)完成后,用油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集情況,檢測(cè)上清液的相關(guān)生化指標(biāo),證實(shí)建模成功。采用熒光探針試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)試劑盒測(cè)定MDA含量;RT-qPCR和Western Blot檢測(cè)SIRT3、SOD2的mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量;免疫沉淀法(IP)檢測(cè)Forkhead轉(zhuǎn)錄因子O1(Forkhead box O1,FOXO1)的乙�；�;運(yùn)用SIRT3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒上調(diào)SIRT3及SIR...

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 主要試劑
    1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    2.2 HepG2細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)曲線測(cè)定
    2.3 MTT篩選藥物濃度
    2.4 細(xì)胞分組
    2.5 NAFLD模型驗(yàn)證
        2.5.1 油紅O染色
        2.5.2 生化指標(biāo)檢測(cè)
    2.6 MDA的檢測(cè)
    2.7 ROS的檢測(cè)
    2.8 RT-qPCR檢測(cè)SIRT3和SOD2 mRNA的表達(dá)
    2.9 WesternBlot檢測(cè)SIRT3及SOD2蛋白表達(dá)
    2.10 IP檢測(cè)FOXO1的乙�；�
    2.11 轉(zhuǎn)染siRNA
    2.12 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA
    2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 HepG2細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
    3.2 MTT篩選藥物濃度
    3.3 油紅O染色
    3.4 生化指標(biāo)檢測(cè)
    3.5 MDA的測(cè)定
    3.6 ROS的測(cè)定
    3.7 SIRT3、SOD2的mRNA和蛋白及乙�；疐OXO1的蛋白表達(dá)
    3.8 HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染SIRT3-siRNA及SIRT3高表達(dá)質(zhì)粒的效率篩選
    3.9 轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞SIRT3及乙�；疐OXO1蛋白表達(dá)情況
4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號(hào)：4018046