目的建立HBV感染者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）microRNA（miRNA）的xMAP液態(tài)芯片的檢測(cè)方法，并運(yùn)用此技術(shù)研究HBV感染者不同時(shí)期miRNA表達(dá)變化及意義，用直接測(cè)序法檢測(cè)HBV基因型及P區(qū)耐藥突變位點(diǎn)與HBV感染不同時(shí)期的相關(guān)因素，探討其在乙肝慢性化演變中的作用及其在診斷、治療、判斷預(yù)后中的應(yīng)用價(jià)值。 方法第一部分建立基于xMAP液態(tài)芯片技術(shù)定量檢測(cè)HBV感染不同時(shí)期PBMCmiRNA的方法，并用該法檢測(cè)急性乙型肝炎（AHB，40例）、慢性乙型肝炎(CHB，53例)、乙肝后肝硬化(LC，44例）、原發(fā)性肝癌(HCC，32例）及正常健康對(duì)照組（NC，40例）標(biāo)本PBMC中miR-191、-223、-222、-145、-21、-31、-126、-20a、-372的表達(dá)變化，分析其在乙肝慢性化演變中的作用。 第二部分采用直接測(cè)序法檢測(cè)第一部分配對(duì)血清標(biāo)本HBV基因型及HBV DNA P基因區(qū)耐藥位點(diǎn)突變，對(duì)HBV感染后疾病轉(zhuǎn)歸的可能相關(guān)因素包括性別、年齡、HBV基因型、HBV DNA載量水平、HBeAg狀態(tài)、miRNA表達(dá)水平作多因素Logistic回歸分析，分析其在乙...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1液態(tài)芯片技術(shù)檢測(cè)miRNA原理示意圖

合探針-miRNA復(fù)合物結(jié)合，發(fā)出熒光而被檢測(cè)。此種方法檢測(cè)miRNA標(biāo)本用量少，反應(yīng)迅速，重復(fù)性好，無需逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增，特異性好，并且可以多至100項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)靈活組合進(jìn)行定性、定量分析。其原理如下圖1-1所示。圖1-1液態(tài)芯片技術(shù)檢測(cè)miRNA原理示意圖

圖1-2TotalRNA電泳圖A：AHB標(biāo)本B：CHB標(biāo)本，C：LC標(biāo)本，D：HCC

TotalRNA電泳圖A：AHB標(biāo)本B：CHB標(biāo)本，C：LC標(biāo)本陰性對(duì)照。MAP液態(tài)芯片技術(shù)檢測(cè)各組miRNA結(jié)果miR-223、miR-126染的不同時(shí)期有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其他分子均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，詳細(xì)結(jié)1-5HBV感染不同時(shí)期PBMC中的miRNA....

圖1-3miR126、-20a、-223在HBV感染者不同時(shí)期的表達(dá)

組（P=1.00）、CHB和LC組（P=0.11）之間外，其余各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），且隨著慢性化進(jìn)展miR-126表達(dá)下調(diào)；miR-20a除AHB和NC（P=1.00）及CHB（P=0.08）之間外，其余各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），且隨....

圖2-1HBV感染者不同臨床時(shí)期HBVDNAP基因區(qū)經(jīng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖像

1.5統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Kolmog檢驗(yàn)法作數(shù)據(jù)正態(tài)分布檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，計(jì)量資料以x±s表示采用單因素方差分析，多重比較采用Bonferroni法，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢感染后疾病轉(zhuǎn)歸的可能相關(guān)因素包括性別、年齡、HBV基因型....

本文編號(hào)：4021258