發(fā)布時(shí)間：2017-05-21 10:23

  本文關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌與胃粘膜病變關(guān)系的基礎(chǔ)及臨床研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：SHP2(protein tyrosine phosphatase2)是一種胞內(nèi)酪氨酸磷酸酶，包含兩個(gè)SH2區(qū)域，可以通過(guò)生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和激素類激活Ras-Erk通路。近年大量研究證實(shí)，SHP2是一種原癌基因。然而有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，SHP2可以降低肝細(xì)胞癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。SHP2是ZAP70調(diào)節(jié)JAK/STAT與ERK通路的下游調(diào)節(jié)因子。幽門螺桿菌CagA可以影響SHP2/ERK與JAK/STAT信號(hào)通路的相互轉(zhuǎn)化。 目的：研究幽門螺桿菌脂多糖(LPS, lipopolysaccharide)是否通過(guò)STAT3調(diào)控IL-6的表達(dá)影響胃癌的發(fā)生以及SHP2在其中可能發(fā)揮的作用。 方法：Hp-LPS（0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml）刺激胃癌細(xì)胞12個(gè)小時(shí)，westernblotting檢測(cè)STAT3、SHP2的變化，Real time PCR檢測(cè)STAT3、SHP2的mRNA水平的變化。Hp-LPS（1μg/ml）刺激胃癌細(xì)胞（0min、1min、10min、30min、60min），western blotting檢測(cè)P-STAT3、P-SHP2的變化；Hp-LPS (0、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml)刺激胃癌細(xì)胞30分鐘，western blotting檢測(cè)P-STAT3、 P-SHP2的變化。給予SHP2阻斷劑NSC87877（60μg/ml）干預(yù)細(xì)胞6小時(shí)后再給予Hp-LPS（1μg/ml）刺激胃癌細(xì)胞30分鐘，western blotting及細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)給予NSC87877與未給予NSC87877處理組，P-STAT3、P-SHP2、 P-ERK的變化；ELISA檢測(cè)兩組IL-6的表達(dá)水平。 結(jié)果：Hp-LPS（0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml）刺激胃癌細(xì)胞12小時(shí)，western blotting檢測(cè)STAT3及SHP2蛋白水平無(wú)明顯變化，各組相對(duì)表達(dá)量差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Hp-LPS（0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml）刺激胃癌細(xì)胞12小時(shí)，Realtime PCR檢測(cè)STAT3的mRNA表達(dá)增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SHP2的mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Hp-LPS（1μg/ml）刺激胃癌細(xì)胞（0min、1min、10min、30min、60min），western blotting檢測(cè)P-STAT3的蛋白表達(dá)量30分鐘達(dá)到高峰，總體比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；P-SHP2的蛋白表達(dá)量30分鐘達(dá)到高峰，總體比較差別無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Hp-LPS (0、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml)刺激胃癌細(xì)胞30分鐘，western blotting檢測(cè)P-STAT3的蛋白表達(dá)量隨著刺激濃度的增高而增加，總體比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；P-SHP2不同濃度的蛋白表達(dá)量差別無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。NSC87877（60μg/ml）阻斷細(xì)胞6小時(shí)后，westernblotting檢測(cè)P-STAT3的蛋白表達(dá)量較未給予NSC87877處理組明顯增加，P-SHP2的蛋白表達(dá)量明顯降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)P-STAT3的蛋白表達(dá)量明顯增強(qiáng)，P-ERK的表達(dá)量明顯下降，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ELISA檢測(cè)IL-6的表達(dá)量明顯增高，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論：體外研究結(jié)果顯示，幽門螺桿菌LPS可以激活STAT3促進(jìn)IL-6的分泌增加。SHP2是幽門螺桿菌LPS激活STAT3促進(jìn)IL-6的表達(dá)的重要調(diào)控因子。 背景：胃癌是消化道常見(jiàn)的惡性腫瘤，胃癌的發(fā)病是多因素多階段的過(guò)程。研究顯示，幽門螺桿菌(H.pylori)感染是誘發(fā)胃癌最重要的單一危險(xiǎn)因素，世界衛(wèi)生組織的國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)已將其列為人類胃癌的Ⅰ類致癌原。近年國(guó)外學(xué)者在多種H.pylori菌株中發(fā)現(xiàn)一種新的毒素蛋白基因家族，因其表達(dá)的蛋白能誘導(dǎo)腫瘤壞死因子(TNF)-α的表達(dá)，故稱為TNF-α誘導(dǎo)蛋白基因家族。TNF-α誘導(dǎo)相關(guān)蛋白(Tipα)在H.pylori致胃癌機(jī)制中可能起重要作用。 目的：研究幽門螺桿菌毒素Tip-α(腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白)對(duì)細(xì)胞因子表達(dá)的影響及其是否依賴于NF-κB（核因子κB）途徑。 方法：從幽門螺桿菌（H.pylori）的26695菌株擴(kuò)增位于H.pylori0596的Tip-α基因，重組載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌表達(dá)并純化Tip-α蛋白，Western blotting鑒定。Tip-α（12.5μg/ml）作用于SGC-7901、GES-1細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)后ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子的變化。Tip-α（12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml）刺激細(xì)胞2小時(shí)后ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子的變化。PDTC（四氫吡咯烷即NF-κB特異性的抑制劑）阻斷NF-κB后檢測(cè)Tip-α作用細(xì)胞后IL-8、IL-1β和TNF-α的變化。 結(jié)果：用抗Tip-α抗體作western blotting檢測(cè)純化蛋白，證實(shí)已得到目的蛋白。Tip-α（12.5μg/ml）刺激細(xì)胞后細(xì)胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α的表達(dá)水平明顯升高，作用兩個(gè)小時(shí)后炎癥因子的表達(dá)達(dá)到高峰，總體比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05），研究數(shù)據(jù)并未顯示出明顯的時(shí)間依賴性。分別以12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的Tip-α作用于細(xì)胞兩個(gè)小時(shí)，研究結(jié)果顯示給予Tip-α處理后，細(xì)胞因子的表達(dá)較未處理組增加，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05），Tip-α（12.5μg/ml）刺激細(xì)胞兩個(gè)小時(shí)后細(xì)胞因子的表達(dá)達(dá)到高峰，研究數(shù)據(jù)并未顯示明顯的濃度依賴性。Tip-α（12.5μg/ml）刺激兩組細(xì)胞2小時(shí)后，ELISA檢測(cè)SGC7901中炎癥因子的表達(dá)量明顯高于GES-1，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。PDTC（12.5mg/ml）阻斷NF-κB后，Tip-α（12.5μg/ml）刺激細(xì)胞2小時(shí)，炎癥因子的表達(dá)較未給予PDTC處理組明顯下降。 結(jié)論：幽門螺桿菌Tip-α可以通過(guò)NF-κB促進(jìn)致炎細(xì)胞因子的表達(dá)。 背景：慢性萎縮性胃炎是以胃黏膜固有腺體萎縮為基礎(chǔ)的慢性炎癥過(guò)程，重度萎縮性胃炎后期常出現(xiàn)腸化生（IM）、異型增生（ATP）、甚至癌變(癌變率2%～8%)。世界衛(wèi)生組織已將其列為癌前狀態(tài)之一�，F(xiàn)有研究表明胃癌癌前病變中存在甲基化異常，而葉酸缺乏可導(dǎo)致DNA甲基化的紊亂和DNA修復(fù)機(jī)制效率的減弱。DNA的甲基化異常程度還與幽門螺桿菌感染有關(guān)。 目的：探討葉酸結(jié)合幽門螺桿菌（Hp）根除治療對(duì)慢性萎縮性胃炎轉(zhuǎn)歸的影響。 方法：選取2009年12月至2011年3月南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院經(jīng)胃鏡及病理檢查確診的慢性萎縮性胃炎患者184例，其中Hp陽(yáng)性90例，陰性94例。Hp陽(yáng)性患者隨機(jī)分為a和b組。a組43例，予標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)Hp根除治療后再予葉酸治療3個(gè)月。b組（47例）和Hp陰性者均予葉酸治療3個(gè)月。各組治療前、口服葉酸1個(gè)月、口服葉酸3個(gè)月時(shí)分別進(jìn)行臨床癥狀評(píng)分并行單因素方差分析和t檢驗(yàn)。各組治療前及停藥3個(gè)月時(shí)分別接受胃鏡檢查，并行內(nèi)鏡下評(píng)分、病理評(píng)分及t檢驗(yàn)。各組治療前及停藥3個(gè)月時(shí)分別抽取靜脈血并以ELISA法檢測(cè)血清胃蛋白酶原（PG）I、PGII及胃泌素17水平。 結(jié)果：所有患者經(jīng)葉酸1個(gè)月時(shí)的臨床癥狀評(píng)分與治療前相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.17，t=1.38），與治療3個(gè)月時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。a組治療結(jié)束時(shí)臨床癥狀評(píng)分低于b組，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.00，P=0.00）。所有患者治療前胃鏡下評(píng)分與治療后相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=11.12，P=0.00）。a組治療后胃鏡下評(píng)分與b組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有患者治療前后各項(xiàng)病理評(píng)分（炎性反應(yīng)、活動(dòng)性、萎縮、腸上皮化生、不典型增生程度評(píng)分）比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有患者治療前血清PGI水平低于治療后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.19，P=0.00）；PGII水平治療前后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.25，P=0.81）。所有患者治療后胃泌素17水平較治療前增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.33，P=0.00）。 結(jié)論：葉酸聯(lián)合Hp根除治療對(duì)萎縮性胃炎的轉(zhuǎn)歸有利，可促進(jìn)血清PG及胃泌素的分泌。
【關(guān)鍵詞】：幽門螺桿菌脂多糖 胃癌 SHP2 STAT3 幽門螺桿菌 Tip-α 細(xì)胞因子 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R573
【目錄】：

• 主要縮略詞中英文對(duì)照5-6
• 第一部分 SHP2 是幽門螺桿菌脂多糖誘導(dǎo) STAT3 引起 IL-6 增高的重要調(diào)控因子6-30
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10
• 材料與方法10-20
• 結(jié)果20-24
• 討論24-25
• 小結(jié)25-26
• 參考文獻(xiàn)26-30
• 第二部分 幽門螺桿菌毒素 Tip-α對(duì)細(xì)胞因子表達(dá)的影響及機(jī)制30-43
• 摘要30-32
• Abstract32-33
• 前言33
• 材料與方法33-36
• 結(jié)果36-39
• 討論39-40
• 小結(jié)40-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 第三部分 幽門螺桿菌根除、葉酸干預(yù)治療萎縮性胃炎的療效觀察43-62
• 摘要43-45
• Abstract45-47
• 前言47
• 材料與方法47-50
• 結(jié)果50-53
• 討論53-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 綜述62-77
• 參考文獻(xiàn)72-77
• 個(gè)人小結(jié)77-78
• 致謝78

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 吳改玲,藍(lán)宇,丁宜,王s

本文編號(hào)：383398