本文關(guān)鍵詞：腸道動(dòng)力分子調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景 腸道動(dòng)力異常被認(rèn)為在諸多功能性胃腸病的發(fā)病中起重要作用,但腸動(dòng)力異常的發(fā)病機(jī)制始終未明確。 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)是重要的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子之一,與其特異性蛋白酪氨酸激酶受體B(tyrosine kinase receptor B, TrkB)結(jié)合后,激活磷脂酶C (phospholipase C, PLC)/三磷酸肌醇(inositol triphosphate, IP3)信號(hào)傳導(dǎo)途徑,使細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度升高,增強(qiáng)神經(jīng)肌肉接頭突觸興奮性神經(jīng)傳導(dǎo)。近年研究發(fā)現(xiàn)BDNF和TrkB受體在腸道高表達(dá)。幾項(xiàng)臨床和動(dòng)物研究表明BDNF可以加快成人的腸道排空及增強(qiáng)大鼠腸道平滑肌的肌電活動(dòng),提示BDNF可能通過TrkB-PLC/IP3信號(hào)通路發(fā)揮著重要的促進(jìn)腸動(dòng)力作用。 近來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)BDNF與P物質(zhì)(substance P, SP).降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)等神經(jīng)遞質(zhì)在中樞或外周神經(jīng)突觸囊泡內(nèi)共儲(chǔ)存,并可以促進(jìn)這些神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,增強(qiáng)其功能,表明BDNF可能作為一種神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)通過調(diào)節(jié)SP、CGRP等其他神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)腸道的作用,來(lái)發(fā)揮其對(duì)腸動(dòng)力的調(diào)節(jié)作用。 目的 本研究采用在體和離體方法監(jiān)測(cè)小鼠腸道運(yùn)動(dòng),探討B(tài)DNF對(duì)小鼠在體及離體腸道動(dòng)力的具體作用及機(jī)制,明確SP和CGRP對(duì)小鼠離體腸道動(dòng)力的影響,研究BDNF對(duì)SP和CGRP引起的小鼠離體腸道收縮活動(dòng)的調(diào)節(jié)作用,探究小鼠腸道動(dòng)力的分子調(diào)控機(jī)制。 方法 實(shí)驗(yàn)選用健康成年雄性C57B1/6(BDNF+/+)小鼠和BDNF基因敲除(BDNF+/-)小鼠。 1：在體腸動(dòng)力檢測(cè)：兩組小鼠行1小時(shí)糞粒計(jì)數(shù)和24小時(shí)糞便含水量檢測(cè)及碳末推進(jìn)檢測(cè) 2離體腸動(dòng)力檢測(cè)：制備BDNF+/+小鼠和BDNF+/小鼠腸道離體縱行肌條,在灌流肌槽中孵育,并記錄肌條的收縮活動(dòng)。以平滑肌肌條張力變化為指標(biāo),觀察不同干預(yù)對(duì)腸道肌條收縮活動(dòng)的影響。 2.1觀察不同濃度的BDNF、SP和CGRP對(duì)BDNF+/+小鼠肌條收縮活動(dòng)的影響。 2.2觀察TrkB受體抗體、新霉素(PLC阻滯劑)和肝素(IP3阻滯劑)孵育肌條后,對(duì)BDNF引起的肌條收縮活動(dòng)的影響。 2.3觀察外源性BDNF孵育肌條后,對(duì)SP和CGRP引起的肌條收縮活動(dòng)的影響。 2.5觀察內(nèi)源性BDNF的減少(BDNF+/.小鼠)和活性的降低(TrkB受體抗體孵育肌條)對(duì)SP和CGRP引起的肌條收縮活動(dòng)的影響。 3酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)BDNF+/+小鼠腸道肌條、BDNF+/.小鼠腸道肌條和TrkB抗體孵育的BDNF+/+小鼠腸道肌條BDNF的釋放量。 4免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TrkB受體在小鼠腸道的分布。 5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,并采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1BDNF+/小鼠每小時(shí)排便糞粒數(shù)較BDNF+/+小鼠明顯減少,24小時(shí)糞便含水量顯著低于BDNF+/+小鼠。 2BDNF+/小鼠活性炭黑便排出所需的時(shí)間較BDNF+/+小鼠明顯延長(zhǎng),腸道碳末推進(jìn)率較BDNF+/+小鼠顯著降低。 3BDNF可以明顯增強(qiáng)小鼠回腸、近端結(jié)腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸肌條的收縮活動(dòng)。 4TrkB受體抗體、新霉素和肝素可明顯減弱BDNF引起的小鼠腸道肌條的收縮。 5SP(1×10-8-1×10-6mol/L)呈濃度依賴性的增強(qiáng)BDNF+/+小鼠腸道肌條的收縮活動(dòng)。CGRP(1×10-8-1×10-7mol/L)對(duì)BDNF+/+小鼠腸道肌條的收縮活動(dòng)呈先短暫抑制后興奮的效應(yīng)。高濃度CGRP(1×10-6mol/L)可明顯抑制BDNF+/+小鼠肌條的收縮活動(dòng)。 6外源性BDNF(1×10-8mol/L)可明顯增強(qiáng)SP及CGRP對(duì)小鼠腸道肌條收縮的興奮效應(yīng)。 7與BDNF+/+小鼠相比,SP及CGRP對(duì)BDNF+/.小鼠肌條收縮的興奮效應(yīng)明顯減弱。TrkB抗體(1×10-8mol/L)可明顯減弱SP和CGRP對(duì)肌條收縮的興奮效應(yīng)。 8BDNF+/小鼠回腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸肌條BDNF的釋放水平明顯降低,大約為BDNF+/+小鼠BDNF釋放水平的一半。與未干預(yù)的BDNF+/+小鼠腸道肌條相比,TrkB抗體孵育的BDNF+/+小鼠肌條BDNF的釋放水平無(wú)明顯變化。 9TrkB受體主要分布在小鼠腸道肌間神經(jīng)叢內(nèi),平滑肌細(xì)胞未見表達(dá)。 結(jié)論 1BDNF可增強(qiáng)小鼠在體與離體腸道動(dòng)力,此增強(qiáng)作用是通過作用于腸神經(jīng)叢TrkB-PLC/IP3信號(hào)傳導(dǎo)途徑實(shí)現(xiàn)的。 2SP呈濃度依賴性的增強(qiáng)小鼠腸道離體肌條的收縮活性,CGRP小鼠腸道肌條的收縮活動(dòng)呈先短暫抑制后興奮效應(yīng)。 3內(nèi)、外源性BDNF可調(diào)節(jié)SP和CGRP引起的小鼠腸道離體肌條收縮活動(dòng)。
【關(guān)鍵詞】：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 P物質(zhì) 降鈣素基因相關(guān)肽 腸動(dòng)力 平滑肌條
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R57
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 符號(hào)說(shuō)明14-16
• 前言16-19
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法19-28
• 結(jié)果28-32
• 討論32-39
• 結(jié)論39-40
• 附圖40-53
• 參考文獻(xiàn)53-64
• 致謝64-65
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章65
• 參與科研基金項(xiàng)目65-66
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表66

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本文編號(hào)：378989