本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞移植抑制肝星狀細(xì)胞治療肝纖維化的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:肝纖維化是指由各種致病因子所致肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生,導(dǎo)致肝內(nèi)彌漫性細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積的病理過程。許多慢性肝臟疾病最終均發(fā)展為肝纖維化及肝硬化。在肝纖維化進(jìn)程中,肝星狀細(xì)胞的活化是關(guān)鍵事件。膠原纖維等細(xì)胞外基質(zhì)多是由肝星狀細(xì)胞活化而成的肌成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的。一般認(rèn)為肝星狀細(xì)胞有四種狀態(tài):原始靜止的肝星狀細(xì)胞、激活的肝星狀細(xì)胞、靜止的肌成纖維細(xì)胞、衰老凋亡的肝星狀細(xì)胞。有學(xué)者提出抗肝纖維化的主要策略包括誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞凋亡、維持細(xì)胞靜止表型或抑制細(xì)胞活化等。但迄今為止,臨床上尚無確切有效的抑制肝星狀細(xì)胞的抗纖維化藥物,肝纖維化仍缺乏有效治療手段。間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cell,MSC)是來源于中胚層的一類成體多能干細(xì)胞,除具有自我增殖和多向分化等干細(xì)胞特性外還具有免疫調(diào)節(jié)、靶向歸巢、靶向抗炎、主動適應(yīng)并改造微環(huán)境等生物學(xué)特性,使MSC適用于多種組織修復(fù)治療。研究表明MSC對缺血性心肌梗死引起的心臟纖維化、自身免疫性疾病引起的腎臟纖維化及特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化均有療效。最近,Kharaziha P等利用MSC治療肝硬化I-II期臨床研究和Salama H等利用MSC治療終末期丙肝肝病研究中發(fā)現(xiàn)MSC在抗肝纖維化方面有一定療效,提示MSC移植在治療肝纖維化方面具有廣闊的應(yīng)用前景。但由于多個臨床中心的研究結(jié)果并不一致,治療機制尚未明確,均有待于進(jìn)一步的基礎(chǔ)與臨床研究。研究目的:研究MSC移植對肝纖維化和HSC活化的影響及其可能機制。研究方法:Ficoll-Hypaque梯度密度離心法及細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BM-MSC)。取18只SD大鼠,通過腹腔小劑量注射CCl4 8周,進(jìn)行肝纖維化造模,在造模4周時,取其中9只作為治療組,每周經(jīng)尾靜脈移植給予該組每只大鼠6×106個MSC,持續(xù)4周;另外9只作為模型對照組,經(jīng)尾靜脈移植給予不含MSC的等量生理鹽水,持續(xù)4周;另取9只大鼠,作為正常對照組,僅給予尾靜脈等量生理鹽水注射,持續(xù)4周。自實驗開始,每周用全自動生化分析儀測定血清ALT、AST、TBIL、ALB水平,至結(jié)束共測定8次。實驗終點8周時通過免疫組化方法對α平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Ⅰ型膠原蛋白(CollagenⅠ,COLⅠ)在肝組織中的定位和表達(dá)進(jìn)行研究;原位灌注和梯度密度離心法分離HSC,326nm紫外光激發(fā)和α-SMA免疫熒光染色法鑒定HSC;q RT-PCR和Western Blot檢測HSC中α-SMA、TGF-β1、COLⅠ、解偶聯(lián)蛋白2(Uncoupling protein 2,UCP2)、解偶聯(lián)蛋白3(Uncoupling protein 3,UCP3)基因和蛋白的表達(dá)水平。研究結(jié)果:1、與模型組相比,治療組經(jīng)MSC移植治療后,血清ALT、AST、TBIL水平逐漸呈下降趨勢,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析有顯著差異;2、治療組肝組織纖維化和炎癥細(xì)胞浸潤程度較模型組明顯改善、肝組織α-SMA、TGF-β1和COLⅠ表達(dá)水平較模型組明顯減低,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析有顯著差異;3、與模型組相比,治療組HSC中α-SMA、TGF-β1、COLⅠ基因和蛋白表達(dá)水平下降,UCP2、UCP3基因和蛋白的表達(dá)水平升高,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析有顯著差異。結(jié)論:1、CCl4長期小劑量腹腔注射能誘導(dǎo)典型的肝纖維化模型,造模過程中以BM-MSC尾靜脈注射進(jìn)行干預(yù)治療,可以減輕肝臟炎癥,抑制肝纖維化形成,促進(jìn)肝功能恢復(fù);2、BM-MSC抗肝纖維化的療效可能與MSC的抗炎作用及抑制HSC活化相關(guān);BM-MSC可通過上調(diào)HSC中UCP2表達(dá)而抑制其活化;3、BM-MSC移植可用于治療肝纖維化。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 肝纖維化 肝星狀細(xì)胞 a平滑肌肌動蛋白 轉(zhuǎn)化生長因子β1 Ⅰ型膠原 解偶聯(lián)蛋白2
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 英文縮略詞5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-35
• 結(jié)果35-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 綜述48-71
• 參考文獻(xiàn)59-71
• 在校期間論文情況71-72
• 致謝72

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本文編號：374879