本文關(guān)鍵詞：大鼠肝臟缺血—再灌注中線粒體DNA損傷與修復(fù)機(jī)制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本課題針對臨床上肝臟缺血-再灌注損傷(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)中線粒體DNA損傷與修復(fù)的機(jī)制進(jìn)行初步研究,主要有如下幾點(diǎn):1、肝細(xì)胞線粒體DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)損傷引起細(xì)胞凋亡的機(jī)制;2、mt DNA損傷的常見位點(diǎn);3、線粒體聚合酶γ修復(fù)受損mt DNA的途徑及靶點(diǎn);4、雷帕霉素對線粒體的保護(hù)作用及機(jī)制。對上述問題從基因水平探討mt DNA損傷在肝臟缺血-再灌注損傷中的作用,為肝臟缺血-再灌注損傷的治療提供理論依據(jù)。方法:第一部分:肝臟缺血-再灌注中線粒體DNA損傷及修復(fù)的機(jī)制,建立大鼠全肝缺血-再灌注損傷模型,測定血清AST、ALT;取出肝臟作病理學(xué)檢測;mt DNA D-loop區(qū)擴(kuò)增測序,查找變異位點(diǎn);RT-PCR檢測肝組織內(nèi)線粒體DNA聚合酶γm RNA的表達(dá)情況。第二部分:雷帕霉素在肝臟缺血-再灌注中對肝細(xì)胞線粒體的保護(hù)機(jī)制,建立大鼠全肝缺血-再灌注損傷模型,用雷帕霉素進(jìn)行干預(yù)。提取肝組織蛋白,western blot檢測細(xì)胞色素C蛋白表達(dá)水平;取肝臟組織行原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測肝細(xì)胞凋亡。結(jié)果:第一部分:肝臟缺血-再灌注后早期(24h),大鼠血清AST、ALT均升高,肝組織病理學(xué)變化較重,線粒體DNA聚合酶γm RNA表達(dá)量均升高,其中雷帕霉素干預(yù)組AST、ALT及肝組織病理學(xué)改變和線粒體DNA聚合酶γm RNA表達(dá)量明顯低于未給藥組(p0.01);24h后血清AST、ALT均降低,為給藥組線粒體DNA聚合酶γm RNA表達(dá)量逐漸降低,雷帕霉素干預(yù)組則較未給藥組為低(p0.01)且術(shù)后一直維持在同一水平;雷帕霉素干預(yù)組mt DNA D-loop區(qū)DNA突變率明顯低于未給藥組(p0.01)。第二部分:肝臟缺血-再灌注后各時(shí)間點(diǎn),大鼠肝臟細(xì)胞色素C表達(dá)水平均升高,其中雷帕霉素干預(yù)組細(xì)胞色素C的表達(dá)水平較未給藥組為低(p0.01),24h后各組細(xì)胞色素C的表達(dá)水平逐漸降低,但各時(shí)間點(diǎn)雷帕霉素干預(yù)組細(xì)胞色素C的表達(dá)水平均較未給藥組為低(p0.01)。各組各時(shí)間點(diǎn)檢測肝細(xì)胞凋亡與細(xì)胞色素C表達(dá)水平的變化相同,即各時(shí)間點(diǎn)雷帕霉素干預(yù)組肝細(xì)胞凋亡水平均較未給藥組為低(p0.01)。結(jié)論:(1)肝臟缺血-再灌注損傷中存在線粒體DNA突變,且突變率與缺血時(shí)間呈正相關(guān),而雷帕霉素降低線粒體DNA突變率。(2)細(xì)胞在肝臟缺血-再灌注損傷的修復(fù)中線粒體DNA聚合酶γm RNA表達(dá)量升高,其表達(dá)水平與線粒體DNA損傷程度相一致,而雷帕霉素可以抑制HIRI中線粒體DNA聚合酶γm RNA的過度表達(dá),更利于修復(fù)受損的線粒體DNA。(3)肝臟缺血-再灌注損傷使組織中細(xì)胞色素C表達(dá)水平升高、肝組織細(xì)胞凋亡,且隨缺血時(shí)間的延長表達(dá)水平及細(xì)胞凋亡程度亦升高,表明肝臟缺血時(shí)間越長,肝細(xì)胞凋亡程度越重,(4)雷帕霉素對肝細(xì)胞有保護(hù)作用,能降低線粒體DNA突變率;抑制肝臟缺血-再灌注損傷中線粒體DNA聚合酶γm RNA的過度表達(dá),更利于修復(fù)受損的線粒體DNA及減輕肝細(xì)胞凋亡,從而減輕缺血-再灌注中肝臟細(xì)胞的損傷程度。
【關(guān)鍵詞】：缺血-再灌注損傷 線粒體DNA 能量代謝 細(xì)胞凋亡 雷帕霉素
【學(xué)位授予單位】：貴陽醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文略縮詞表9-10
• 引言10-11
• 第一部分11-27
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-25
• 討論25-27
• 第二部分27-38
• 材料與方法27-35
• 結(jié)果35-37
• 討論37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 附錄43-46
• 綜述46-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 作者簡歷55-56
• 致謝56-57
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集57

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：大鼠肝臟缺血—再灌注中線粒體DNA損傷與修復(fù)機(jī)制的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：337557