本文關(guān)鍵詞：DSS所致的慢性實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎加重CCl_4誘導(dǎo)的肝纖維化及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝纖維化（hepatic fibrosis, HF）是肝臟對病毒、酒精、代謝毒物等各種致病因子所致的組織修復(fù)反應(yīng)。肝纖維化是可逆的，而肝硬化卻難以逆轉(zhuǎn)。因此研究肝纖維化的發(fā)病機(jī)制并盡早干預(yù)對阻止疾病進(jìn)展甚或逆轉(zhuǎn)肝纖維化具有重要意義。近年研究發(fā)現(xiàn)，腸道炎癥可加重高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎，因此腸黏膜屏障受損可能在肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展中起到一定作用。 在炎癥性腸病(inflammotory bowel disease, IBD)的研究中發(fā)現(xiàn)，肝膽系統(tǒng)病變是其最常見的腸外表現(xiàn)之一。IBD發(fā)病時(shí)，腸黏膜屏障功能受損，引起腸道菌群失調(diào)，繼發(fā)細(xì)菌移位，導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥，進(jìn)而引起肝損傷。Marshall于1998年正式提出了“腸-肝軸”的概念，指出腸道和肝臟在對機(jī)體免疫防御功能上是相互影響，相互調(diào)節(jié)，密不可分的。腸黏膜屏障功能受損，腸道菌群，內(nèi)毒素進(jìn)入門脈系統(tǒng)進(jìn)而誘發(fā)肝臟疾病。此外，肝纖維化、非酒精性脂肪性肝炎等肝臟疾病常伴有腸源性內(nèi)毒素血癥(intestinalendotoxemia, IETM)，這可能與肝病時(shí)腸道內(nèi)毒素吸收增多有關(guān)。 肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells, HSCs)的活化增殖是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。活化的HSCs分泌大量趨化因子，引起肝巨噬細(xì)胞(Kupffer cell,KCs)聚集到損傷部位產(chǎn)生大量TGF-β。脂多糖(1ipopolysaccharide, LPS)激活星狀細(xì)胞表面的Toll樣受體4(Toll like receptor4, TLR4)通過MyD-88-NF-κB途徑下調(diào)TGF-β誘導(dǎo)受體，增強(qiáng)TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)纖維化的發(fā)生。 LPS是革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素的重要成分，細(xì)菌裂解或黏附在其他細(xì)胞上時(shí)得以釋放。TLR是識別病原微生物的主要受體，其中，TLR4在人體免疫中發(fā)揮重要作用。TLR4是LPS信號導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的表面受體，當(dāng)與LPS結(jié)合后， TLR4通過其胞漿域募集銜接蛋白MyD-88(Myeloiddifferentiation protein88)，進(jìn)一步作用于其下游分子TNF-α受體活化的因子6(tumor necrosis receptor-associated factor, TRAF6），隨后引起NF-κB的活化，導(dǎo)致大量促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生從而介導(dǎo)肝臟病變。Gabele E等的研究，表明非酒精性脂肪性肝炎(non alcoholic steatohepatitis, NASH)伴有腸道炎癥，會明顯促進(jìn)肝臟病變，證實(shí)結(jié)腸炎癥可能通過“腸-肝軸”介導(dǎo)肝臟病變。為此，我們聯(lián)合腹腔注射CCl4與飲用DSS誘導(dǎo)建立了小鼠肝纖維化伴腸道損傷模型，來研究結(jié)腸炎癥對肝臟炎癥和纖維化病變的影響；同時(shí)觀察慢性實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎相關(guān)的肝臟病變情況，并探討內(nèi)毒素及腸肝軸在其中的作用，從而為延緩肝纖維化的進(jìn)展以及IBD的綜合治療提供理論依據(jù)。 目的：研究DSS所致的慢性實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎加重CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化的機(jī)制。 方法：將50只雄性C57BL/6小鼠按完全隨機(jī)法分為conrtol組（正常飲食），DSS組（間斷飲用2%DSS），Olive oil組（腹腔注射橄欖油10μL/g，每周2次），CCl4組（腹腔注射5%CCl4橄欖油10μL/g，每周2次）和CCl4+DSS組（間斷飲用2%DSS聯(lián)合腹腔注射5%CCl4橄欖油10μL/g），每組10只。結(jié)腸黏膜炎癥程度的評估包括疾病活動指數(shù)(Diseaseactivity index, DAI)、結(jié)腸形態(tài)學(xué)變化和組織病理學(xué)評分，檢測結(jié)腸組織中MPO的含量；測定血清LPS水平及細(xì)菌移位率；分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色、Western blot技術(shù)和real-time PCR技術(shù)檢測結(jié)腸組織中TNF-α，IFN-γ，IL-17A，緊密連接蛋白o(hù)ccludin，claudin-1的表達(dá)水平；應(yīng)用Haematoxylineosin staining(HE染色)、Masson’s trichrome staining(MT染色)、Sirius red staining（天狼猩紅染色）等方法觀察肝臟病理學(xué)改變；分別采用免疫組織化學(xué)染色、western blot和real-time Q-PCR方法檢測各組小鼠肝臟組織中TNF-α、IFN-γ、IL-17A、TGF-β1、α-SMA、I、III型膠原、MMP-2、TIMP-2、TLR4、TRAF6和NF-κB的表達(dá)水平。 結(jié)果：①與對照組相比，DSS組和CCl4+DSS組小鼠體重顯著減輕，DAI顯著升高，結(jié)腸壁充血、水腫、長度顯著縮短，結(jié)腸組織病理切片示大量炎癥細(xì)胞浸潤，黏膜上皮破壞形成淺潰瘍，病理評分顯著增加；MPO活性顯著升高；免疫組織化學(xué)檢測、Western blot和real-time Q-PCR檢測結(jié)果顯示TNF-α、IFN-γ和IL-17A表達(dá)水平顯著升高(P0.05)；而這兩組之間沒有明顯差異(P0.05)；②肝臟組織HE顯示：DSS組可見肝內(nèi)匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤增加，肝細(xì)胞排列散亂，肝細(xì)胞水腫、胞漿疏松化；CCl4組及CCl4+DSS組均可見到肝臟組織肝板排列紊亂，肝細(xì)胞水腫、胞漿疏松化，可見肝細(xì)胞空泡樣變性，大量肝細(xì)胞變性壞死，匯管區(qū)大量炎性細(xì)胞浸潤，尤以CCl4+DSS組顯著；炎癥評分結(jié)果顯示：DSS組、CCl4組、CCl4+DSS組均顯著高于對照組，尤以重疊組升高明顯；差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；③肝臟組織MT染色、天狼猩紅染色顯示，DSS組可見肝小葉中央靜脈壁纖維染色，匯管區(qū)及小葉間隔內(nèi)少許纖維組織沉積，較對照組無明顯變化；CCl4組及CCl4+DSS組均可見到肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，增生小膽管周圍纖維組織生成，中央靜脈周圍及匯管區(qū)可見纖維組織沉積增多，肝纖維化形成但是此種病變尤以CCl4+DSS組病變嚴(yán)重；纖維化程度分級顯示：DSS組較正常對照組小鼠相差不大(P0.05)，CCl4組、CCl4+DSS組肝臟纖維化程度分級顯著高，尤以重疊組升高顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；④羥脯氨酸測試盒檢測結(jié)果顯示，，同正常對照組相比，DSS組小鼠羥脯氨酸含量略升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；CCl4組小鼠和CCl4+DSS組小鼠羥脯氨酸含量明顯升高，CCl4+DSS組含量顯著高于單純CCl4組小鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；⑤血清肝功能檢測顯示，同正常對照組相比，DSS組小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase, ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平明顯升高，白蛋白(albumin, ALB)水平明顯減少(P0.05)，血清總膽紅素(total bilirubin, TBIL)、直接膽紅素(direct bilirubin, DBIL)水平相差不大(P0.05)；CCl4組和CCl4+DSS組小鼠ALT、AST、TBIL及DBIL水平明顯增高，ALB水平明顯下降，CCl4+DSS組變化較單純CCl4組小鼠顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；⑥免疫組織化學(xué)染色、Western blot和real-time Q-PCR檢測肝臟中TNF-α、IFN-γ和IL-17A結(jié)果顯示：DSS組、CCl4組、CCl4+DSS組小鼠肝臟組織其表達(dá)水平，較對照組顯著增加，尤以CCl4+DSS組變化顯著(P0.05)；⑦免疫組織化學(xué)染色、Western blot和real-time Q-PCR檢測肝臟中Collagen typeⅠ、Collagen type Ⅲ結(jié)果顯示：DSS組較正常對照組變化不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；CCl4組、CCl4+DSS組較對照組顯著增加，尤以CCl4+DSS組變化顯著(P0.05)；⑧免疫組織化學(xué)染色、Western blot和real-time Q-PCR檢測肝臟組織中α-SMA、TGF-β1、MMP-2和TIMP-2結(jié)果顯示：DSS組較正常對照組變化不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；CCl4組、CCl4+DSS組較對照組顯著增加，尤以CCl4+DSS組變化顯著(P0.05)；⑨與對照組相比，DSS組、CCl4組、CCl4+DSS組小鼠血清中LPS水平顯著增加(P0.05)；而CCl4+DSS組與CCl4組比較，其LPS含量顯著升高(P0.05)；正常對照組腸系膜淋巴結(jié)勻漿液中細(xì)菌移位率為0%；DSS組小鼠細(xì)菌移位率為80%；橄欖油組勻漿液細(xì)菌培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)個(gè)別有大腸桿菌生長，其細(xì)菌移位率為10%；CCl4組小鼠細(xì)菌移位率為60%；CCl4+DSS組細(xì)菌移位率為90%；免疫組織化學(xué)染色、Western blot和real-time Q-PCR檢測結(jié)果顯示緊密連接蛋白o(hù)ccludin和claudin-1表達(dá)，與對照組相比，DSS組、CCl4+DSS組結(jié)腸黏膜蛋白陽性面積顯著減少(P0.05)，而這兩組之間沒有明顯差異(P0.05)；⑩免疫組織化學(xué)染色、Western blot和real-time Q-PCR檢測肝臟中TLR4、TRAF6和NF-κB結(jié)果顯示：DSS組、CCl4組及CCl4+DSS組小鼠表達(dá)水平較對照組升高，尤以CCl4+DSS組升高更為顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：肝纖維化伴有腸道炎癥會明顯促進(jìn)肝臟病變的進(jìn)程，其機(jī)制可能與損傷的肝臟對腸源性內(nèi)毒素清除能力下降，加之存在腸道炎癥，會明顯促進(jìn)LPS移位，從而上調(diào)LPS/TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)肝臟病變有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肝纖維化 實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎 腸-肝軸 脂多糖 Toll樣受體
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-14
• 英文縮寫14-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-34
• 結(jié)果34-45
• 附圖45-61
• 討論61-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-70
• 綜述 腸-肝軸在慢性肝病中的研究新進(jìn)展70-81
• 參考文獻(xiàn)78-81
• 致謝81-82
• 個(gè)人簡歷82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 宋敏,夏冰,李瑾;炎癥性腸病的腸外表現(xiàn)[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年01期

2 Arthur W Yan;Bernd Schnabl;;Bacterial translocation and changes in the intestinal microbiome associated with alcoholic liver disease[J];World Journal of Hepatology;2012年04期

3 毛靖偉;王英德;;腸黏膜屏障在炎癥性腸病中作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2010年07期

4 Gyongyi Szabo;Shashi Bala;;Alcoholic liver disease and the gut-liver axis[J];World Journal of Gastroenterology;2010年11期

  本文關(guān)鍵詞：DSS所致的慢性實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎加重CCl_4誘導(dǎo)的肝纖維化及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：333601