本文關(guān)鍵詞：AFP抑制天然免疫的Siglec-5途徑，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：慢性肝病是影響人類健康重要的疾病之一。由于肥胖的全球趨勢、增加的酒精消費(fèi)和肝炎病毒的感染等因素,肝臟疾病的發(fā)病率預(yù)計(jì)會(huì)大幅上升。慢性肝病的發(fā)展結(jié)局多數(shù)會(huì)進(jìn)展為肝硬化,肝硬化患者的免疫功能低下及其易感染體質(zhì)造成50%的住院率、15-35%進(jìn)一步發(fā)展成院內(nèi)感染,并導(dǎo)致較高的死亡率。在天然免疫系統(tǒng)中,肝硬化患者外周血中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的功能障礙可能與細(xì)菌性感染相關(guān),但影響免疫功能的機(jī)制仍然不是十分清楚。本論文探討了甲胎蛋白(a-fetoprotein, AFP)在天然免疫功能及在慢性肝病細(xì)菌感染之間的關(guān)系。AFP是胎兒主要的血清球蛋白,其合成部位主要在卵黃囊和肝臟,并運(yùn)輸?shù)狡渌鞣N組織和細(xì)胞中。研究表明AFP影響著免疫功能的各個(gè)方面：可以抑制天然殺傷細(xì)胞活性、抑制T細(xì)胞的增殖及T細(xì)胞誘導(dǎo)的有絲分裂反應(yīng)、降低巨噬細(xì)胞吞噬功能等。文獻(xiàn)報(bào)道,在懷孕期間一些自身免疫疾病將得到緩解,如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥和其它自身免疫疾病,這些緩解在孕晚期最明顯,正好與孕產(chǎn)婦血清AFP水平增加相一致。但是,AFP與天然免疫的聯(lián)系機(jī)制仍不清楚。天然免疫(Innate Immunity)也稱固有免疫或非特異性免疫,通過遺傳獲得。天然免疫和特異性免疫一樣,是生物體在長期種系發(fā)育和進(jìn)化過程中逐漸形成的一系列防御機(jī)制。天然免疫系統(tǒng)是由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子構(gòu)成的,主要包括組織屏障(皮膚黏膜、血腦屏障等)、天然免疫細(xì)胞(樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等)及天然免疫分子(干擾素、趨化因子等)。影響天然免疫的因素有防御素、補(bǔ)體、溶菌酶、炎性介質(zhì)、唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素(sialic acid binding immunoglobulin-like lectins,Siglecs)等,其中,Siglecs介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、主要起調(diào)節(jié)天然免疫的功能。Siglecs被認(rèn)為是重要的調(diào)節(jié)細(xì)胞活化和炎癥反應(yīng)的細(xì)胞膜受體。Siglec-5是一種免疫調(diào)節(jié)因子,也是一個(gè)隸屬于免疫球蛋白超家族的凝集素家族,其成員可通過特異性識(shí)別并結(jié)合糖蛋白和糖脂的糖基側(cè)鏈上的唾液酸來介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)信號(hào)的傳導(dǎo)。病原微生物通過膜表面唾液酸結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合免疫細(xì)胞表面的Siglecs從而誘導(dǎo)宿主的免疫應(yīng)答作用。AFP除了作為配基與細(xì)胞膜上的AFP受體結(jié)合并調(diào)控細(xì)胞生長外,細(xì)胞內(nèi)的AFP還可以通過和轉(zhuǎn)錄因子或一些關(guān)鍵蛋白之間發(fā)生相互作用參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。AFP是一種糖蛋白,其多糖結(jié)構(gòu)上的唾液酸可能會(huì)與Siglec-5的膜外結(jié)構(gòu)結(jié)合并激發(fā)免疫抑制作用。本課題在U937細(xì)胞中研究AFP通過Siglec-5抑制天然免疫的途徑。研究方法：(1).研究AFP與U937細(xì)胞及人外周血中性白細(xì)胞的結(jié)合：分離人外周血中性白細(xì)胞和培養(yǎng)的U937細(xì)胞,采用放射受體分析法測定125I-AFP與U937細(xì)胞及人外周血中性白細(xì)胞的結(jié)合作用。(2).研究AFP對(duì)白細(xì)胞吞噬甲型鏈球菌作用的影響：首先制備好甲型鏈球菌,然后用AFP處理白細(xì)胞,采用細(xì)菌吞噬法測定AFP對(duì)白細(xì)胞吞噬甲型鏈球菌作用的影響。(3).研究AFP對(duì)全血氧爆發(fā)能力的影響：AFP處理細(xì)胞后在fMLP (N-formylmethionyl-leucyl-henyl-alanine,N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸)刺激因子作用下采用魯米諾熒光分析法測定AFP對(duì)全血氧爆發(fā)能力的影響。(4).研究AFP對(duì)Siglec-5表達(dá)的影響：AFP處理U937細(xì)胞后采用流式細(xì)胞法測定Siglec-5表達(dá)的變化。(5).研究AFP激活Siglec-5及細(xì)胞內(nèi)SHP-1/SHP-2的活化及招募作用：AFP孵育U937細(xì)胞后再用B型鏈球菌處理,采用免疫共沉淀法用Siglec-5抗體研究AFP激活Siglec-5后細(xì)胞內(nèi)SHP-1/SHP-2的活化。研究結(jié)果：(1).125I-AFP放射受體分析方法證明AFP與U937細(xì)胞及外周血中性白細(xì)胞的結(jié)合。(2).細(xì)菌吞噬法證明AFP抑制白細(xì)胞吞噬甲型鏈球菌的作用。(3).“呼吸爆發(fā)”檢測方法證明AFP對(duì)全血的氧爆發(fā)能力有短暫增強(qiáng)作用。(4).流式細(xì)胞法表明在U937細(xì)胞中AFP促進(jìn)了Siglec-5的表達(dá)。(5).免疫共沉淀法證明AFP具有激活Siglec-5并促進(jìn)募集細(xì)胞內(nèi)SHP-1/SHP-2的作用。結(jié)論：AFP通過激活U937細(xì)胞Siglec-5的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),抑制白細(xì)胞對(duì)甲型鏈球菌的吞噬和殺傷功能。肝癌及慢性肝病高水平血清AFP可能導(dǎo)致免疫功能的下降及感染。
【關(guān)鍵詞】：甲胎蛋白(AFP) 肝硬化 天然免疫 Siglec-5 自身免疫疾病
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575;R735.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 縮略詞表10-11
• 第1章 引言11-29
• 1.1 甲胎蛋白(AFP)的分子生物學(xué)11-17
• 1.1.1 AFP基因11
• 1.1.2 AFP蛋白的分子結(jié)構(gòu)11-14
• 1.1.3 AFP的受體14-15
• 1.1.4 AFP的生物學(xué)功能15-17
• 1.2 天然免疫17-26
• 1.2.1 天然免疫的概念17
• 1.2.2 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素(Siglecs)17-25
• 1.2.3 Siglec-525-26
• 1.3 AFP與免疫及感染性疾病26-27
• 1.4 本論文的研究意義27-29
• 第2章 AFP對(duì)天然免疫的抑制作用研究29-41
• 2.1 材料和試劑29-31
• 2.1.1 細(xì)胞29
• 2.1.2 主要試劑29
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備29-30
• 2.1.4 主要的溶液和試劑配制30-31
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法31-34
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)流程31
• 2.2.2 AFP與U937細(xì)胞及人外周血中性白細(xì)胞的結(jié)合31-33
• 2.2.3 AFP對(duì)白細(xì)胞吞噬甲型鏈球菌作用的影響33-34
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析34-38
• 2.3.1 AFP與U937及人外周血中性白細(xì)胞的結(jié)合34-35
• 2.3.2 AFP對(duì)白細(xì)胞吞噬甲型鏈球菌的抑制作用35-36
• 2.3.3 AFP對(duì)全血氧爆發(fā)能力的抑制36-37
• 2.3.4 小結(jié)37-38
• 2.4 討論38-41
• 第3章 AFP抑制天然免疫Siglec-5途徑41-51
• 3.1 材料和試劑41-43
• 3.1.1 細(xì)胞41
• 3.1.2 主要試劑41
• 3.1.3 主要儀器設(shè)備41
• 3.1.4 主要的溶液和試劑配制41-43
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法43-46
• 3.2.1 流式細(xì)胞法研究AFP對(duì)Siglec-5表達(dá)的影響43-44
• 3.2.2 免疫沉淀法研究AFP激活Siglec-5及細(xì)胞內(nèi)SHP-1/SHP-2的活化及招募作用44-46
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析46-49
• 3.3.1 AFP誘導(dǎo)Siglec-5的表達(dá)46-47
• 3.3.2 AFP激活Siglec-5及募集細(xì)胞內(nèi)SHP-1/SHP-247-49
• 3.3.3 小結(jié)49
• 3.4 討論49-51
• 第4章 總結(jié)51-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 致謝61-63
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉往;;甲胎蛋白研究進(jìn)展[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2012年01期

  本文關(guān)鍵詞：AFP抑制天然免疫的Siglec-5途徑，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：298879