本文關鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細胞治療小鼠自身免疫性肝炎的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的發(fā)病與誘發(fā)因素、自身抗原應答、遺傳易感性和免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡等相關。單用糖皮質(zhì)激素或聯(lián)合免疫抑制劑存在疾病完全緩解率低,需要長期服藥和類腎上腺皮質(zhì)功能亢進綜合癥等多種副作用。AIH最終可進展為肝硬化并需要肝移植,尋找更安全、有效和經(jīng)濟的治療方法將有深遠的意義。對間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的理化特性和實際應用的研究為AIH的治療提供了新的方向。MSCs具有免疫抑制、多向分化和抗纖維化等多方面的作用。本研究探討MSCs對AIH小鼠模型的治療作用及其可能的機制,并觀察MSCs預移植對AIH小鼠成模的影響。 材料和方法： 1.AIH小鼠動物模型的建立。分次腹腔注射同種異體小鼠肝s-100抗原與弗氏完全佐劑乳化液,首次注射后第4周予以鑒定模型是否建立。 2.MSCs移植對AIH小鼠模型療效觀察。AIH小鼠隨機分為三組：MSCs移植治療組(組1),給予1×106/只MSCs單次尾靜脈注射；地塞米松治療組(組2),給予0.25mg/g·周DXM分次腹腔注射；空白對照組(組3),給予0.05ml/只·周PBS腹腔注射；實驗第5周和第9周取肝臟制作病理切片,取血清測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)水平 3.觀察MSCs對AIH成模的影響。分為兩組：首日MSCs移植,隔日給予造模處理(組Ⅰ)；首日給予磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution,PBS)注射,隔日造模處理(組Ⅱ)。首次注射后4周取肝臟做病理檢查,取血清標本測ALT。 4.體外MSCs上清液對脾淋巴細胞增殖的影響：凝膠層析技術分離小鼠肝s-100抗原第1峰(s-100-1),用小鼠淋巴細胞分離液分離出正常小鼠的脾臟淋巴細胞,進行分組：刀豆蛋白A培養(yǎng)組(組A)；刀豆蛋白A聯(lián)合MSCs上清液培養(yǎng)組(組B)；s-100-1培養(yǎng)組(組C)；s-100-1聯(lián)合MSCs上清液培養(yǎng)組(組D)。對各組進行淋巴細胞增殖抑制實驗,后測各組吸光度(optical density,OD)值。 結果： 1.AIH小鼠模型的建立：AIH小鼠肝臟平均炎癥評分為2.67±0.516, Knodell評分5.50±1.975,血清學AIL水平為122.00+15.476。 2. MSCs移植于AIH小鼠的療效觀察： 2.1造模后(第4周)小鼠血清ALT為122.00±15.476U/L。第5周,組1、組2和組3小鼠血清ALT分別為：101.43±9.144U/L、115.00±10.315U/L和118.33±15.161U/L。三組間差異有統(tǒng)計學(P0.05),組1和組2兩組間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。第9周,組1、組2和組3小鼠血清ALT分別為：84.00±6.557U/L、98.83+15.767U/L和107.50±11.777U/L,三組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),組1和組2兩組間比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2.2造模后(第4周)小鼠肝臟Knodell評分為5.50±1.975。第5周,組1、組2和組3小鼠肝臟Knodell評分分別為：3.00±1.528、3.33±1.366和4.67±1.862,三組間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),組1和組2差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。第9周,組1、組2和組3小鼠肝臟Knodell評分分別為：2.00±1.291、2.67±0.516和4.33±2.066,三組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),組1和組2差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3. MSCs預移植對小鼠AIH模型成模的研究： 3.1組Ⅰ和組Ⅱ小鼠的ALT水平分別為：52.17±15.741U/L和122.±15.476U/L,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3.2組Ⅰ和組Ⅱ小鼠的肝臟Knodell評分分別為：3.33±0.816和5.50±1.975,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4.體外MSCs上清液對脾淋巴細胞增殖的影響：組A的OD值為0.267±0.167,組B的OD值為0.217±0.128,兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。組C的OD值為0.165±0.187,組D的OD值為0.082±0.051,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論： 1.同種異體肝抗原與弗氏完全佐劑乳化液注射方法可以復制出AIH小鼠模型。 2. MSCs移植可以減低AIH小鼠血清ALT水平和肝臟炎細胞浸潤,提示MSCs移植對AIH小鼠具有治療作用。 3. MSCs預移植也可以顯著降低AIH小鼠ALT水平和肝臟炎細胞浸潤情況。提MSCs預移植可以預防AIH小鼠的發(fā)病。 4.體外MSCs上清液可以顯著抑制抗原物質(zhì)引起的T淋巴細胞增殖作用,這一作用可能是MSCs對AIH小鼠發(fā)揮治療作用的機制。
【關鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 自身免疫性肝炎 動物模型 細胞移植 免疫抑制
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R575.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 材料和方法14-23
• 結果23-31
• 討論31-39
• 結論39
• 本研究創(chuàng)新性自我評價39-40
• 參考文獻40-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明45-46
• 附錄：廣州賽業(yè)公司MSCs質(zhì)檢報告46-51
• 綜述51-63
• 綜述參考文獻56-63
• 致謝63

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