本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠肝硬化的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：摘要：目的：研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSC)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSC)的基因表達(dá)差異和免疫調(diào)控能力,然后采用人臍帶間充質(zhì)細(xì)胞治療肝硬化大鼠,研究肝臟在治療前后基因表達(dá)的變化；最后研究肝細(xì)胞表達(dá)的NAT8酶在臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝硬化過程中的作用。方法：首先從人臍帶的血管外下層分離培養(yǎng)UC-MSC,然后從人骨髓樣本中分離培養(yǎng)BM-MSC,進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、生長(zhǎng)觀察,以及流式細(xì)胞術(shù)鑒定其細(xì)胞表型,檢測(cè)這兩種細(xì)胞向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的分化能力,并利用基因芯片檢測(cè)了這2種細(xì)胞的基因表達(dá)差異。其次利用皮下注射四氯化碳方法建立大鼠肝硬化動(dòng)物模型,將人UC-MSC通過尾靜脈注射途徑對(duì)肝硬化大鼠模型進(jìn)行治療,利用血清學(xué)生化指標(biāo)檢測(cè)和組織學(xué)膠原纖維染色證明UC-MSC的治療效果,最后提取造模前后和治療前后的肝臟RNA,進(jìn)行表達(dá)譜芯片雜交并對(duì)芯片結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)篩選出的NAT8酶進(jìn)行了PCR驗(yàn)證、WB驗(yàn)證和功能分析,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染NAT8真核表達(dá)質(zhì)粒和小分子干擾RNA的方法,在L02肝細(xì)胞株中上調(diào)和下調(diào)NAT8的表達(dá),檢測(cè)其對(duì)雙氧水造成的肝細(xì)胞凋亡的逆轉(zhuǎn)作用。結(jié)果：細(xì)胞表型檢測(cè)和誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)證明,我們從骨髓和臍帶中培養(yǎng)得到的貼壁細(xì)胞表型符合間充質(zhì)細(xì)胞特征,這些細(xì)胞均能夠表達(dá)例如CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD106和CD166等特征表面分子,同時(shí)不表達(dá)造血和內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志如CD14、CD31、CD34和CD45分子。在合適的體外誘導(dǎo)條件下,在體外培養(yǎng)中向造骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化,在UC-MSC中上調(diào)的表達(dá)基因主要涉及器官的生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞分化,而BM-MSCs中上調(diào)表達(dá)的基因主要包括骨骼發(fā)育和免疫調(diào)控。然后我們利用血清學(xué)檢測(cè)和組織病理學(xué)染色結(jié)果證明,我們利用四氯化碳法成功建立了大鼠肝硬化模型,且UC-MSC治療可以顯著地改善肝損傷。芯片分析結(jié)果顯示與對(duì)照組相比,UC-MSC治療上調(diào)了補(bǔ)體凝血相關(guān)基因,下調(diào)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和膠原合成等相關(guān)基因。其中NAT8酶在MSC介導(dǎo)的肝細(xì)胞抗損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。在體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞株L02實(shí)驗(yàn)中,MSC條件上清可顯著改善雙氧水引起的細(xì)胞凋亡,上調(diào)NAT8酶可以減少雙氧水引起的細(xì)胞凋亡,而下調(diào)NAT8酶則加劇了細(xì)胞凋亡。結(jié)論：UC-MSC增殖快,表達(dá)更多的生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)基因,更適合于用于異體間細(xì)胞輸注治療,在UC-MSC治療肝硬化大鼠逆轉(zhuǎn)肝細(xì)胞損傷的過程中,可能通過上調(diào)了補(bǔ)體凝血相關(guān)基因,抑制細(xì)胞增殖和膠原沉著發(fā)揮治療作用。其中NAT8酶在MSC介導(dǎo)的肝細(xì)胞抗損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：臍帶間充質(zhì)細(xì)胞 肝硬化 基因芯片 細(xì)胞分化
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號(hào)說明10-11
• 第一部分 人骨髓與臍帶衍生的間充質(zhì)干細(xì)胞的基因表達(dá)譜比較11-20
• 材料與方法12-16
• 結(jié)果16-18
• 討論18-20
• 第二部分 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝硬化大鼠的研究20-30
• 材料與方法21-24
• 結(jié)果24-27
• 討論27-30
• 第三部分 NAT8酶在臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療損傷肝細(xì)胞中的作用30-38
• 材料方法31-35
• 結(jié)果35-36
• 討論36-38
• 附圖表38-54
• 參考文獻(xiàn)54-63
• 致謝63-64
• 在讀期間發(fā)表的論文64-65
• 發(fā)表論文65-73
• 附件73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 趙振強(qiáng);陳志斌;蔡美華;王淑榮;陳蓉;王W，

本文編號(hào)：281064