本文關鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細胞治療大鼠肝硬化的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：摘要：目的：研究人臍帶間充質(zhì)干細胞(UC-MSC)和骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSC)的基因表達差異和免疫調(diào)控能力,然后采用人臍帶間充質(zhì)細胞治療肝硬化大鼠,研究肝臟在治療前后基因表達的變化；最后研究肝細胞表達的NAT8酶在臍帶間充質(zhì)干細胞治療肝硬化過程中的作用。方法：首先從人臍帶的血管外下層分離培養(yǎng)UC-MSC,然后從人骨髓樣本中分離培養(yǎng)BM-MSC,進行細胞形態(tài)學觀察、生長觀察,以及流式細胞術鑒定其細胞表型,檢測這兩種細胞向成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞的分化能力,并利用基因芯片檢測了這2種細胞的基因表達差異。其次利用皮下注射四氯化碳方法建立大鼠肝硬化動物模型,將人UC-MSC通過尾靜脈注射途徑對肝硬化大鼠模型進行治療,利用血清學生化指標檢測和組織學膠原纖維染色證明UC-MSC的治療效果,最后提取造模前后和治療前后的肝臟RNA,進行表達譜芯片雜交并對芯片結(jié)果數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。對篩選出的NAT8酶進行了PCR驗證、WB驗證和功能分析,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染NAT8真核表達質(zhì)粒和小分子干擾RNA的方法,在L02肝細胞株中上調(diào)和下調(diào)NAT8的表達,檢測其對雙氧水造成的肝細胞凋亡的逆轉(zhuǎn)作用。結(jié)果：細胞表型檢測和誘導分化實驗證明,我們從骨髓和臍帶中培養(yǎng)得到的貼壁細胞表型符合間充質(zhì)細胞特征,這些細胞均能夠表達例如CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD106和CD166等特征表面分子,同時不表達造血和內(nèi)皮細胞標志如CD14、CD31、CD34和CD45分子。在合適的體外誘導條件下,在體外培養(yǎng)中向造骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞分化,在UC-MSC中上調(diào)的表達基因主要涉及器官的生長發(fā)育和細胞分化,而BM-MSCs中上調(diào)表達的基因主要包括骨骼發(fā)育和免疫調(diào)控。然后我們利用血清學檢測和組織病理學染色結(jié)果證明,我們利用四氯化碳法成功建立了大鼠肝硬化模型,且UC-MSC治療可以顯著地改善肝損傷。芯片分析結(jié)果顯示與對照組相比,UC-MSC治療上調(diào)了補體凝血相關基因,下調(diào)細胞增殖、細胞周期和膠原合成等相關基因。其中NAT8酶在MSC介導的肝細胞抗損傷修復中發(fā)揮重要作用。在體外培養(yǎng)的肝細胞株L02實驗中,MSC條件上清可顯著改善雙氧水引起的細胞凋亡,上調(diào)NAT8酶可以減少雙氧水引起的細胞凋亡,而下調(diào)NAT8酶則加劇了細胞凋亡。結(jié)論：UC-MSC增殖快,表達更多的生長發(fā)育相關基因,更適合于用于異體間細胞輸注治療,在UC-MSC治療肝硬化大鼠逆轉(zhuǎn)肝細胞損傷的過程中,可能通過上調(diào)了補體凝血相關基因,抑制細胞增殖和膠原沉著發(fā)揮治療作用。其中NAT8酶在MSC介導的肝細胞抗損傷修復中發(fā)揮重要作用。
【關鍵詞】：臍帶間充質(zhì)細胞 肝硬化 基因芯片 細胞分化
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-11
• 第一部分 人骨髓與臍帶衍生的間充質(zhì)干細胞的基因表達譜比較11-20
• 材料與方法12-16
• 結(jié)果16-18
• 討論18-20
• 第二部分 人臍帶間充質(zhì)干細胞治療肝硬化大鼠的研究20-30
• 材料與方法21-24
• 結(jié)果24-27
• 討論27-30
• 第三部分 NAT8酶在臍帶間充質(zhì)干細胞治療損傷肝細胞中的作用30-38
• 材料方法31-35
• 結(jié)果35-36
• 討論36-38
• 附圖表38-54
• 參考文獻54-63
• 致謝63-64
• 在讀期間發(fā)表的論文64-65
• 發(fā)表論文65-73
• 附件73

【參考文獻】

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1 趙振強;陳志斌;蔡美華;王淑榮;陳蓉;王W，

本文編號：281064