本文關(guān)鍵詞：異甘草酸鎂對肝細胞模擬缺血再灌注損傷的保護作用和機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 觀察異甘草酸鎂（Magnesium isoglycyrrhizinate，MgIG）對肝細胞模擬缺血再灌注后細胞增殖、凋亡、炎癥的調(diào)控作用，探討MgIG對肝臟缺血再灌注損傷的保護作用及作用機制，為將來MgIG在肝臟缺血再灌注損傷中的應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法： 體外培養(yǎng)人肝細胞株HL-7702，當細胞處于對數(shù)生長期時：1.將細胞接種至96孔板，隨機分為缺血再灌注組（ischemia-reperfusion group，IR組）及MgIG預處理組，待細胞貼壁后分別用不同濃度(0、10-2、10-1、1、10、100mg/ml)的MgIG預處理細胞24h，模擬缺血6h、再灌注4h后應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測MgIG對缺血再灌注肝細胞增殖活力的影響；2.將HL-7702細胞接種至培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶或載玻片上，隨機將細胞分為IR組、低濃度組、中濃度組、高濃度組，待細胞貼壁后，分別用含有不同濃度的MgIG（0、0.1、1、10mg/ml）預處理24h，模擬缺血6h、再灌注4h后，取細胞或細胞的上清液用作以下實驗：①應(yīng)用吖啶橙/嗅化乙啶（AO/EB）染色觀察細胞的凋亡情況；②用相應(yīng)的試劑盒分別檢測各組培養(yǎng)液中ALT、SOD、MDA、IL-1β、TNF-α的水平；③應(yīng)用RT-qPCR法檢測各組bcl-2、Bax、NF-ΚB基因mRNA的表達量。 結(jié)果： 1.MTT法結(jié)果表明：與IR組（0.227±0.013）相比，MgIG在0.1-10mg/mL濃度范圍內(nèi)能提高缺血再灌注HL-7702細胞的A值（0.285±0.017、0.320±0.008、0.341±0.019），差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）；濃度過低時（0.01mg/ml），與IR組（0.227±0.013）相比，雖然也能提高缺血再灌注HL-7702細胞的A值（0.235±0.014），但差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）；濃度過高時（100mg/ml），觀察發(fā)現(xiàn)細胞全部漂浮，無活細胞； 2.AO/EB染色結(jié)果顯示，低濃度組細胞凋亡率（0.5763±0.0405）低于IR組（0.7124±0.0581），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05），，中、高濃度組細胞凋亡率（0.2866±0.0619、0.1261±0.0439）分別低于IR組（0.7124±0.0581），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）； 3.低、中、高濃度組上清液ALT含量（21.27±1.58、17.03±0.87、14.79±1.54u/L）分別低于IR組（24.65±1.22u/L），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）； 4.低、中、高濃度組SOD含量（16.99±1.25、20.22±1.35、23.76±0.99u/mL）分別高于IR組（12.52±1.80u/mL），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）； 5.低、中、高濃度組MDA含量（9.84±1.14、5.64±0.87、3.93±0.59nmol/mL）分別低于IR組（11.89±0.82nmol/mL），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）； 6.低、中、高濃度組IL-1β含量（33.34±1.30、30.51±0.76、28.35±1.24pg/ml）、TNF-α含量（58.75±4.05、40.04±4.74、29.22±2.31pg/ml）分別低于IR組（37.07±1.18pg/ml）、（66.43±3.28pg/ml），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）； 7.RT-qPCR結(jié)果顯示低、中、高濃度組bcl-2基因mRNA的表達量（3.350±0.151、9.279±0.350、15.290±0.756）分別高于IR組（0.928±0.068），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01），低、中、高濃度組Bax、NF-ΚB基因mRNA的表達量（0.743±0.035、0.265±0.065、0.119±0.019）、（0.597±0.062、0.248±0.067、0.141±0.029）分別低于IR組（0.945±0.063）、（0.962±0.034），差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）。 結(jié)論： MgIG能減輕肝細胞缺血再灌注的損傷，其作用機制可能與MgIG能提高肝細胞增殖活力、抑制脂質(zhì)過氧化、抑制炎癥反應(yīng)、減輕肝細胞凋亡等多種因素有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：異甘草酸鎂 肝細胞 缺血-再灌注 凋亡 炎癥
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料與方法13-23
• 2.1 實驗材料13-14
• 2.1.1 細胞株13
• 2.1.2 實驗儀器13-14
• 2.1.3 實驗藥品及試劑14
• 2.2 試劑配制14-15
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)主要試劑配制14-15
• 2.2.2 異甘草酸鎂溶液的配制15
• 2.2.3 MTT 溶液的配制15
• 2.3 實驗方法15-23
• 2.3.1 細胞復蘇、培養(yǎng)及傳代15
• 2.3.2 細胞計數(shù)15-16
• 2.3.3 缺血再灌注模型的建立16
• 2.3.4 MTT 比色法觀察 MgIG 對缺血再灌注損傷肝細胞活力的影響16
• 2.3.5 MgIG 對缺血再灌注肝細胞凋亡、炎癥的影響16-22
• 2.3.6 統(tǒng)計學分析22-23
• 第3章 結(jié)果23-31
• 3.1 細胞形態(tài)學的變化23-24
• 3.2 MgIG 對缺血再灌注肝細胞活力的影響(MTT 法)24-25
• 3.3 MgIG 對 IRI 肝細胞凋亡影響（AO/EB 雙重染色）25-26
• 3.4 MgIG 對 IRI 肝細胞 ALT、SOD、MDA、IL-1β、TNF-α的影響26-29
• 3.5 MgIG 對 IRI 后肝細胞 bcl-2、bax、NF-κB 表達的影響29-31
• 第4章 討論31-35
• 4.1 模擬缺血再灌注模型的選擇31
• 4.2 MgIG 的藥理作用31-32
• 4.3 MgIG 保護肝細胞缺血再灌注損傷的機制32-35
• 4.3.1 MgIG 促進肝細胞增殖，增強肝細胞活力的作用32
• 4.3.2 MgIG 的抗氧化及脂質(zhì)過氧化作用32
• 4.3.3 MgIG 的抗炎作用32-33
• 4.3.4 MgIG 抗細胞凋亡的作用33-35
• 第5章 結(jié)論與展望35-36
• 5.1 結(jié)論35
• 5.2 展望35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻37-39
• 攻讀學位期間的研究成果39-40
• 綜述40-47
• 參考文獻45-47

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：異甘草酸鎂對肝細胞模擬缺血再灌注損傷的保護作用和機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：279744