本文關(guān)鍵詞：對酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的乳酸菌的篩選，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】： 肝損傷是臨床常見的病理癥狀,許多因素如酒精、藥物、病毒等均能導(dǎo)致肝損傷的產(chǎn)生,若診治不當(dāng),會導(dǎo)致嚴(yán)重后果。目前,臨床尚缺乏理想的預(yù)防藥物。乳酸菌具有多種保健功能,已廣泛地應(yīng)用到食品和醫(yī)藥中,因此篩選獲得對肝損傷具有保護(hù)作用的乳酸菌為相關(guān)保健食品應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 本文對不同來源樣品中篩選獲得的乳酸菌,通過體外抗氧化活性,抑菌能力及破壞內(nèi)毒素能力研究,篩選獲得具有良好特性乳酸菌,并以急性酒精性肝損傷小鼠進(jìn)行驗證。 1.研究了不同乳酸菌SOD活性。對本實驗分離保藏的58株乳酸菌的SOD活性進(jìn)行了比較,有12株乳酸菌發(fā)酵液SOD活性較高,超過了24.45U/mL,分別為:RS_5、C_8M、AP_3、GP_1、ST_1、BF、綠桿、白桿、Lr-4、R26、F、LV108,而ST1的SOD活性最高,達(dá)到30.01U/mL。從長壽老人糞便中分離的菌株(除R02)SOD活性普遍較高,均超過24U/mL;從腐乳中分離的菌株活性普遍較低,活性最高僅為14.90U/mL(W_4M)。 2.研究了12株乳酸菌清除DPPH自由基能力。由清除DPPH自由基能力曲線來看,各菌株的清除能力均不強(qiáng)。比較而言ST_1清除能力相對最強(qiáng),清除DPPH自由基能力曲線為y=12.53x+10.78,清除50%自由基時,所需消耗的發(fā)酵液濃度僅為3.13%,其次為GP_1,發(fā)酵液濃度為3.34%,BF,發(fā)酵液濃度為3.37%,綠桿,發(fā)酵液濃度為3.39%,AP_3清除能力最弱,發(fā)酵液濃度為4.26%。 3.研究了12株乳酸菌總抗氧化能力。通過研究發(fā)現(xiàn),菌株GP1總抗氧化能力最強(qiáng),發(fā)酵18h時達(dá)到17.35U/mL,其次為ST_1,發(fā)酵18h時達(dá)到16.39U/mL,綠桿,發(fā)酵24h時達(dá)到15.92U/mL,BF,發(fā)酵18h時達(dá)到15.05U/mL,而C8M總抗氧化能力最低僅為8.37 U/mL。發(fā)酵時間對各菌株抗氧化活性影響較大,大部分菌株在12h至18h,抗氧化活性呈上升趨勢,在18h至24h之間,抗氧化活性比較強(qiáng),趨于比較穩(wěn)定的階段,24h后呈下降趨勢。細(xì)胞破碎后各菌株的抗氧化能力均有所提高,菌株ST1提高的程度最大,總抗氧化能力上升了3.07U/mL,而AP3僅提高了0.14U/mL。 4.研究了12株乳酸菌的抑菌能力。通過比較抑菌能力,有6株乳酸菌抑菌能力較強(qiáng),分別為:GP_1、ST_1、BF、綠桿、LV108、Lr-4。其中,GP_1抑制大腸桿菌能力最強(qiáng),抑菌直徑達(dá)到23.5mm,其次為Lr-4,抑菌直徑為22.75mm,最弱為C8M和白桿,抑菌直徑為19.75mm;GP1和F抑制沙門氏菌能力最強(qiáng),抑菌直徑達(dá)到26.75mm,其次為BF、ST_1、Lr-4,抑菌直徑為26mm,最弱為C8M,抑菌直徑為24mm。調(diào)節(jié)pH值至6后,AP_3、C_8M、F、RS_5失去抑菌能力,但其余菌株仍具有一定的抑菌效果,GP1抑菌能力仍最強(qiáng),抑制大腸桿菌直徑為13.50mm,抑制沙門氏菌直徑為14.00mm。 5.研究了抗氧化能力及抑菌能力均較強(qiáng)的6株乳酸菌破壞內(nèi)毒素能力。結(jié)果顯示,各菌株代謝產(chǎn)物直接破壞內(nèi)毒素能力弱。當(dāng)內(nèi)毒素濃度為0.5eu/mL時,陽性對照OD值為0.376,此時破壞能力最強(qiáng)的綠桿OD值為0.316;當(dāng)內(nèi)毒素濃度為1eu/mL時,陽性對照OD值為0.627,此時破壞能力最強(qiáng)的BF的OD值為0.488,內(nèi)毒素的殘留量仍很高;當(dāng)內(nèi)毒素濃度為2eu/mL時,陽性對照OD值為1.11,而此時破壞能力最強(qiáng)的綠桿OD值為0.767,破壞效果仍不明顯。而與內(nèi)毒素共培養(yǎng)時乳酸菌破壞內(nèi)毒素能力均具有明顯效果且隨著培養(yǎng)時間的延長破壞能力不斷增強(qiáng)。GP1在培養(yǎng)24h時OD下降到0.19,BF、綠桿、ST1OD值也分別下降到0.27、0.28、0.35,而陽性對照OD值高達(dá)0.82。并且發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素與乳酸菌共培養(yǎng)時,對乳酸菌生長影響不大。 6.對篩選獲得的菌株綠桿、GP1和ST1進(jìn)行了鑒定。通過API系列鑒定條和16S rDNA基因測序與BLAST在線比對,發(fā)現(xiàn)API系列鑒定與分子鑒定結(jié)果一致。得出綠桿、GP_1、ST_1分別為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、屎腸球菌(Enterococcus faecium)。 7.對篩選獲得的菌株以急性酒精肝損傷小鼠進(jìn)行驗證。乳酸菌表現(xiàn)出保護(hù)肝臟損傷的特征,乳酸菌組與模型組血清中谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)和肝臟中丙二醛(MDA)、還原性谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、乙醇脫氫酶(ADH)水平比較,差異顯著(P0.05),有效的保護(hù)了肝臟。普通乳酸菌對照C_8M的護(hù)肝特性總體上不如GP_1、綠桿、ST_1、BF(陽性對照),而GP1的總體效果最好,尤其是在肝臟脂質(zhì)過氧化的幾項指標(biāo)中效果接近于空白組(P0.05),優(yōu)于藥物組和BF組。由此,所篩選獲得的S. thermophilus GP1、E. faecium ST_1、L.rhamnosus綠桿、Bifidobacterium lactis BF為具有酒精性肝損傷保護(hù)作用的優(yōu)良乳酸菌。
【關(guān)鍵詞】：乳酸菌 肝損傷 抗氧化活性 小鼠
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 1 緒論11-26
• 1.1 肝臟及功能11
• 1.2 肝損傷11-20
• 1.2.1 肝損傷的分類11
• 1.2.2 酒精性肝損傷11-15
• 1.2.2.1 酒精性肝損傷定義及類型11-12
• 1.2.2.2 酒精性肝損傷機(jī)制12
• 1.2.2.3 酒精性肝損傷的危害12-14
• 1.2.2.4 保護(hù)酒精性肝損傷的功能評價14-15
• 1.2.3 肝損傷的主要影響因素15-18
• 1.2.3.1 肝損傷與自由基15-16
• 1.2.3.2 肝損傷與內(nèi)毒素16-17
• 1.2.3.3 肝損傷與腸道微生態(tài)系統(tǒng)17
• 1.2.3.4 肝損傷與其它17-18
• 1.2.4 肝損傷保護(hù)的研究進(jìn)展18-20
• 1.3 乳酸菌20-24
• 1.3.1 乳酸菌的定義20
• 1.3.2 乳酸菌的保健功能20-22
• 1.3.3 乳酸菌保護(hù)肝損傷的機(jī)制22-24
• 1.4 本論文研究目的及意義24-25
• 1.5 本課題研究的內(nèi)容25-26
• 2 乳酸菌抗氧化性的研究26-40
• 2.1 實驗材料26-27
• 2.1.1 乳酸菌26
• 2.1.2 主要試劑26-27
• 2.1.3 儀器設(shè)備27
• 2.2 實驗方法27-29
• 2.2.1 乳酸菌的培養(yǎng)27
• 2.2.2 SOD 活性的測定27-28
• 2.2.3 清除二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）能力測定28
• 2.2.4 總抗氧化能力的測定28-29
• 2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計29
• 2.3 結(jié)果與討論29-38
• 2.3.1 不同來源乳酸菌SOD 活性比較29-34
• 2.3.1.1 乳扇中分離的乳酸菌在發(fā)酵過程中的SOD 活性比較29-30
• 2.3.1.2 臭干、豆腐乳中分離的乳酸菌發(fā)酵過程中的SOD 活性比較30
• 2.3.1.3 新疆馬奶酒中分離的乳酸菌在發(fā)酵過程中的 SOD 活性比較30-31
• 2.3.1.4 新疆天然混合菌株gz-08 中分離乳酸菌發(fā)酵過程中的SOD 活性比較31-32
• 2.3.1.5 新疆傳統(tǒng)乳制品中分離的乳酸菌在發(fā)酵過程中的 SOD 活性比較32
• 2.3.1.6 長壽老人糞便中分離的乳酸菌在發(fā)酵過程中的 SOD 活性比較32-33
• 2.3.1.7 乳酸菌SOD 活性比較33-34
• 2.3.2 乳酸菌清除 DPPH·能力比較34-36
• 2.3.4 乳酸菌總抗氧化能力比較36-37
• 2.3.5 細(xì)胞破碎后對菌株總抗氧化能力的影響37-38
• 2.4 結(jié)論38-40
• 3 乳酸菌對大腸桿菌、沙門氏菌的抑制作用研究40-46
• 3.1 實驗材料40-41
• 3.1.1 主要試劑40
• 3.1.2 培養(yǎng)基40
• 3.1.3 菌株40
• 3.1.4 儀器設(shè)備40-41
• 3.2 實驗方法41
• 3.2.1 乳酸菌的培養(yǎng)41
• 3.2.2 乳酸菌發(fā)酵液的處理41
• 3.2.3 大腸桿菌、沙門氏菌的培養(yǎng)41
• 3.2.4 對致病性大腸桿菌、沙門氏菌抑制作用41
• 3.3 結(jié)果與討論41-45
• 3.3.1 乳酸菌不同發(fā)酵時間對大腸桿菌的抑制作用41-42
• 3.3.2 乳酸菌不同發(fā)酵時間對沙門氏菌的抑制作用42-44
• 3.3.3 發(fā)酵液經(jīng)調(diào)節(jié)pH 值后對大腸桿菌、沙門氏菌抑制作用44-45
• 3.4 結(jié)論45-46
• 4 乳酸菌體外破壞內(nèi)毒素的研究46-52
• 4.1 實驗材料46
• 4.1.1 主要試劑46
• 4.1.2 培養(yǎng)基46
• 4.1.3 主要儀器設(shè)備46
• 4.2 實驗方法46-48
• 4.2.1 器材去熱原處理46-47
• 4.2.2 乳酸菌培養(yǎng)47
• 4.2.3 破壞內(nèi)毒素能力測定47
• 4.2.4 乳酸菌活菌數(shù)量的測定47-48
• 4.3 結(jié)果與討論48-51
• 4.3.1 乳酸菌代謝產(chǎn)物直接破壞內(nèi)毒素能力比較48
• 4.3.2 乳酸菌破碎細(xì)胞壁后破壞內(nèi)毒素能力比較48-49
• 4.3.3 與內(nèi)毒素共培養(yǎng)時不同生長階段乳酸菌破壞內(nèi)毒素能力比較49-51
• 4.3.4 內(nèi)毒素對不同乳酸菌生長的影響51
• 4.4 結(jié)論51-52
• 5 乳酸菌的鑒定52-60
• 5.1 實驗材料52-53
• 5.1.1 主要試劑52
• 5.1.2 主要儀器設(shè)備52-53
• 5.2 方法53-54
• 5.2.1 API 系列鑒定條鑒定53
• 5.2.2 乳酸菌16SrDNA 序列測定及分析53-54
• 5.2.2.1 乳酸菌 DNA 的提取53
• 5.2.2.2 乳酸菌16SrDNA 擴(kuò)增53-54
• 5.3 結(jié)果與分析54-59
• 5.3.1 API 系列鑒定條鑒定54-55
• 5.3.2 乳酸菌基因組DNA 電泳圖譜55-56
• 5.3.3 16SrDNA 擴(kuò)增及測序56-59
• 5.3.4 16SrDNA 序列在線 BLAST 結(jié)果59
• 5.4 結(jié)論59-60
• 6乳酸菌對小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究60-69
• 6.1 實驗材料60-61
• 6.1.1 實驗動物60
• 6.1.2 主要試劑60
• 6.1.3 主要儀器60-61
• 6.2 方法61-64
• 6.2.1 動物分組及處理61
• 6.2.2 樣本處理61
• 6.2.3 指標(biāo)檢測61-64
• 6.2.3.1 肝臟乙醇脫氫酶活力（ADH）測定61-62
• 6.2.3.2 丙二醛（MDA）生成量測定62
• 6.2.3.3 超氧化物歧化酶（SOD）活性測定62
• 6.2.3.4 還原性谷胱甘肽（GSH）含量測定62
• 6.2.3.5 血清 ALT、AST 活性測定62-63
• 6.2.3.6 總蛋白(TP)的測定63
• 6.2.3.7 白蛋白(ALB)測定63
• 6.2.3.8 甘油三酯（TG）的測定63
• 6.2.3.9 病理檢查63-64
• 6.2.4 數(shù)據(jù)處理64
• 6.3 結(jié)果與分析64-67
• 6.3.1 造模后小鼠狀態(tài)特征64
• 6.3.2 乳酸菌對酒精性肝損傷小鼠血清中指標(biāo)的影響64-65
• 6.3.3 乳酸菌對酒精性肝損傷小鼠肝臟中指標(biāo)的影響65-67
• 6.3.4 小鼠肝組織病理切片觀察67
• 6.4 結(jié)論67-69
• 7 結(jié)論與展望69-72
• 7.1 結(jié)論69-71
• 7.2 展望71-72
• 參考文獻(xiàn)72-80
• 附錄80-86
• 致謝86-87

【引證文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王春穎;劉斌;李云旭;馮謙;龔虹;李康寧;劉彥民;;乳酸菌保肝護(hù)肝的研究進(jìn)展[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2013年06期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張寧波;乳酸菌胞外多糖化學(xué)組成的研究[D];山西大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：對酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的乳酸菌的篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：279559