本文關(guān)鍵詞：回輸不同極化類型的巨噬細(xì)胞對(duì)小鼠肝纖維化的治療作用和機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景】 肝纖維化由各種持續(xù)的慢性肝損傷導(dǎo)致，其漸進(jìn)性發(fā)展最終可形成肝硬化，甚至誘發(fā)肝癌，嚴(yán)重危害人們的生命健康。針對(duì)晚期肝硬化的有效治療手段十分有限，但有效的治療可以逆轉(zhuǎn)肝纖維化，甚至恢復(fù)肝臟正常的結(jié)構(gòu)和功能。因此，探索治療肝纖維化的有效方法具有重要意義。目前，針對(duì)肝纖維化的細(xì)胞治療具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。 肝纖維化是肝內(nèi)膠原纖維異常沉積的過程，是肝損傷后的傷口愈合反應(yīng)。各種慢性肝臟疾病，導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、壞死和凋亡，招募多種炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。在肝內(nèi)多種細(xì)胞的相互作用下，肝星形細(xì)胞活化，其合成和分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，基質(zhì)生成和降解失衡、大量沉積，導(dǎo)致肝纖維化。而在此過程中，巨噬細(xì)胞發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。 巨噬細(xì)胞是機(jī)體重要的固有免疫細(xì)胞。在肝纖維化的發(fā)展過程中，巨噬細(xì)胞起著雙刃劍的作用。一方面，，活化的巨噬細(xì)胞分泌大量細(xì)胞因子，導(dǎo)致肝星形細(xì)胞激活并合成分泌大量膠原蛋白；另一方面，巨噬細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶類，降解膠原纖維，誘發(fā)肝星形細(xì)胞凋亡，促進(jìn)肝纖維化的消融緩解。提示纖維化過程中，巨噬細(xì)胞的功能復(fù)雜多樣，具有一定的異質(zhì)性。大量研究表明，活化的巨噬細(xì)胞可分為經(jīng)典激活的M1型巨噬細(xì)胞和替代激活的M2型巨噬細(xì)胞。二者對(duì)肝纖維化的作用不同，分別具有抗纖維化和促進(jìn)纖維化的作用。目前的研究表明，骨髓來源的巨噬細(xì)胞回輸對(duì)肝纖維化具有一定的緩解作用，但關(guān)于不同極化類型巨噬細(xì)胞對(duì)肝纖維化的治療研究尚未見報(bào)道。因此，本課題擬培養(yǎng)骨髓來源的巨噬細(xì)胞，用不同因子刺激誘導(dǎo)成為不同極化類型，將其回輸給肝纖維化模型小鼠，觀察其對(duì)肝纖維化的作用，并探討其機(jī)制。 【目的】 1.研究不同極化類型的巨噬細(xì)胞回輸對(duì)小鼠肝纖維化的影響。 2.研究不同極化類型的巨噬細(xì)胞回輸參與肝纖維化治療的機(jī)制。 【方法】 1.CCl4腹腔注射建立小鼠肝纖維化模型。 2.建立巨噬細(xì)胞分離培養(yǎng)和極化誘導(dǎo)的方法。 3.用PEI-SPIO/Cy3-RNA復(fù)合物標(biāo)記巨噬細(xì)胞，追蹤巨噬細(xì)胞回輸后在肝臟中的定位。 4.回輸不同極化類型的巨噬細(xì)胞，用天狼星紅染色、肝臟羥脯氨酸測(cè)定、Desmin免疫組化染色和血清白蛋白檢測(cè)等方法評(píng)價(jià)細(xì)胞回輸后肝纖維化程度的變化和治療效果。 5.實(shí)時(shí)定量PCR、流式細(xì)胞術(shù)及明膠酶譜法檢測(cè)不同極化類型的巨噬細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶和巨噬細(xì)胞趨化因子配體的表達(dá)水平。 6.不同極化類型巨噬細(xì)胞回輸后，用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)肝臟組織中巨噬細(xì)胞趨化因子配體和基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)、用免疫組化檢測(cè)肝臟組織中F4/80+巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量、測(cè)定尿液中羥脯氨酸的含量。 【結(jié)果】 1.成功建立小鼠肝纖維化模型；成功獲得骨髓來源的巨噬細(xì)胞，并在不同誘導(dǎo)條件下得到M1和M2型巨噬細(xì)胞；尾靜脈回輸巨噬細(xì)胞可定位于肝纖維化區(qū)域。 2.天狼星紅染色、肝臟羥脯氨酸測(cè)定、Desmin免疫組化染色和血清白蛋白水平顯示，M0和M1型巨噬細(xì)胞回輸組小鼠肝臟膠原纖維沉積減少，其中M1型巨噬細(xì)胞回輸組減少更明顯，小鼠肝功能更好。提示M1型巨噬細(xì)胞回輸對(duì)肝纖維化有更好的治療效果。 3. M1型巨噬細(xì)胞高表達(dá)MMP-2、9、13和CCL2、CCL3。 4. M1型細(xì)胞回輸組小鼠肝臟組織中高表達(dá)CCL2、CCL3和MMP-2、9、13，F(xiàn)4/80+巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)增多，尿液中羥脯氨酸含量最高。 【結(jié)論】 1.M1和M0型巨噬細(xì)胞均可緩解小鼠肝纖維化，尤以回輸M1型細(xì)胞療效更為顯著。 2.M1型巨噬細(xì)胞本身高表達(dá)的MMPs分子，招募自體巨噬細(xì)胞向肝臟募集，并分泌大量MMPs，二者協(xié)同作用，加速膠原纖維的降解，肝纖維化減輕。
【關(guān)鍵詞】：肝纖維化 巨噬細(xì)胞 極化 基質(zhì)金屬蛋白酶
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-14
• 文獻(xiàn)回顧14-29
• 第一部分 肝纖維化14-23
• （一）肝纖維化形成的機(jī)制14-21
• （二）肝纖維化的治療策略21-23
• 第二部分 巨噬細(xì)胞23-29
• （一）巨噬細(xì)胞的極化23-26
• （二）巨噬細(xì)胞的異質(zhì)性與肝纖維化26-29
• 第一部分 小鼠肝纖維化模型的建立和骨髓來源巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)29-44
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器29-31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-36
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-43
• 4 討論43-44
• 第二部分 不同極化類型巨噬細(xì)胞回輸對(duì)肝纖維化的影響44-52
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器44-45
• 2 實(shí)驗(yàn)方法45-47
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-50
• 4 討論50-52
• 第三部分 M1 型巨噬細(xì)胞回輸對(duì)肝纖維化治療作用的機(jī)制的研究52-63
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器52-53
• 2 實(shí)驗(yàn)方法53-56
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-60
• 4 討論60-63
• 小結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果74-76
• 致謝76

  本文關(guān)鍵詞：回輸不同極化類型的巨噬細(xì)胞對(duì)小鼠肝纖維化的治療作用和機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：277136