本文關(guān)鍵詞：外源性IGF-1調(diào)控HIF-1α表達(dá)對(duì)應(yīng)激性潰瘍大鼠胃粘膜的保護(hù)作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景應(yīng)激性潰瘍(stress ulcer, SU)是臨床上危重病患者常見(jiàn)的并發(fā)癥,其主要發(fā)病機(jī)制是應(yīng)激狀態(tài)下,神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào),胃粘膜微循環(huán)障礙,局部缺血缺氧,粘膜防御屏障遭到破壞,進(jìn)展形成潰瘍。目前預(yù)防和治療SU的臨床常用藥物為抑酸藥,而從SU發(fā)病機(jī)制角度靶向增加胃粘膜血流的藥物研究甚少。低氧誘導(dǎo)因子1(hypoxia-inducible factor 1, HIF-1)作為細(xì)胞內(nèi)的一種核轉(zhuǎn)錄因子,可靶向調(diào)控多種基因的表達(dá)發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng),如血管生成、糖代謝和細(xì)胞增殖等。HIF-1是由細(xì)胞質(zhì)中氧濃度敏感的α亞基和細(xì)胞核中結(jié)構(gòu)性表達(dá)的p亞基組成的異源二聚體。HIF-1α的穩(wěn)定和合成受到細(xì)胞氧濃度、pH、生長(zhǎng)因子等多種因素的調(diào)節(jié)。因此推測(cè)SU可能誘導(dǎo)胃粘膜HIF-1α表達(dá)增加,啟動(dòng)機(jī)體自我保護(hù)機(jī)制。然而,目前以HIF-1α為作用靶點(diǎn)治療SU的藥物少有研究。胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like growth factor1, IGF-1)是一類促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、具有胰島素樣代謝效應(yīng)的因子。研究發(fā)現(xiàn),體外培養(yǎng)胃粘膜上皮細(xì)胞,給予外源性IGF-1可增強(qiáng)上皮細(xì)胞的遷移、增殖及HIF-1α的表達(dá)。然而外源性IGF-1能否通過(guò)調(diào)控HIF-1α蛋白表達(dá)影響粘膜血流,促進(jìn)SU胃粘膜愈合的體內(nèi)研究甚少。磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases, PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)通路,與細(xì)胞增殖、凋亡、腫瘤發(fā)生等有著重要作用。既往研究發(fā)現(xiàn),IGF-1通過(guò)PI3K及MAPK信號(hào)通路調(diào)節(jié)結(jié)腸癌細(xì)胞HIF-1α、VEGF的表達(dá),促進(jìn)腫瘤血管生長(zhǎng)。本研究試圖探討在大鼠SU的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,PI3K/Akt信號(hào)通路是否參與外源性IGF-1對(duì)胃粘膜HIF-1α表達(dá)的影響,從而進(jìn)一步了解IGF-1的胃粘膜保護(hù)作用機(jī)制。目的通過(guò)水浸-束縛應(yīng)激法建立大鼠SU模型,探討外源性IGF-1對(duì)SU大鼠胃粘膜HIF-1α表達(dá)的影響及其可能的作用機(jī)制,進(jìn)一步研究IGF-1的胃粘膜保護(hù)作用。方法1實(shí)驗(yàn)一：應(yīng)用水浸-束縛應(yīng)激(water-immersion and restraint stress, WRS)方法建立大鼠SU模型,依據(jù)不同水浸時(shí)間,將30只雄性SD大鼠隨機(jī)(隨機(jī)數(shù)字法)分為5組(n=6),分別為Oh(Con)組、2h(W2)組、4h(W4)組、6h(W6)組、8h(W8)組。測(cè)定各組大鼠應(yīng)激后胃液pH值、胃粘膜血流量(gastric mucosal blood flow, GMBF)、潰瘍指數(shù)(ulcer index, UI),觀察大鼠胃粘膜大體觀,采用Westernblot方法檢測(cè)各組大鼠胃粘膜組織中HIF-1α、VEGF的表達(dá)水平。2.實(shí)驗(yàn)二：根據(jù)外源性IGF-1不同處理劑量,將雄性SD大鼠24只隨機(jī)分為4組(n=6),WRS (W)組、WRS+IGF-125 μg/kg(WI 1)組、WRS+IGF-150 μg/kg (WI2)組、WRS+IGF-1100 μg/kg(WI 3)組。WRS組應(yīng)激時(shí)間選擇實(shí)驗(yàn)一中水浸后胃粘膜損傷最明顯時(shí)間點(diǎn)。測(cè)定各組大鼠胃液pH值、GMBF、UI,觀察胃粘膜大體觀,Westernblot檢測(cè)胃粘膜HIF-1α、VEGF的表達(dá)變化。3.實(shí)驗(yàn)三：雄性SD大鼠30只,隨機(jī)分為5組(n=6),分別為正常對(duì)照(Con)組、WRS (W)組、WRS+IGF-1 (WI)組、WRS+LY294002 (WL)組和WRS+IGF-1+LY294002 (WIL)組。WI組外源性IGF-1劑量選擇實(shí)驗(yàn)二中改善胃粘膜損傷情況的最佳劑量,LY294002為PI3K特異性抑制劑。測(cè)定各組大鼠胃液pH值、GMBF、UI,并觀察胃粘膜大體觀及光鏡下組織病理學(xué)形態(tài)變化。Westernblot檢測(cè)各組大鼠胃粘膜HIF-1α、VEGF、p-Akt、t-Akt的表達(dá)水平。結(jié)果1.實(shí)驗(yàn)一：隨著水浸時(shí)間延長(zhǎng),大鼠胃液pH值、GMBF明顯降低、UI逐漸增加(P0.05),HIF-1α、VEGF表達(dá)逐漸增加(P0.05),W8組胃粘膜損傷最明顯,證實(shí)WRS法能夠誘導(dǎo)胃粘膜損傷及HIF-1α的表達(dá)。2.實(shí)驗(yàn)二：IGF-1處理組相比W組大鼠胃液pH值、GMBF有所增加、UI減少,但WI 1組與W組結(jié)果差異未見(jiàn)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),WI 2、WI 3組均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；HIF-1α、VEGF隨IGF-1劑量的增加表達(dá)水平明顯升高(P0.05),且一定程度上呈劑量依賴性,表明IGF-1能夠通過(guò)上調(diào)HIF-1α表達(dá)發(fā)揮胃粘膜保護(hù)作用。3.實(shí)驗(yàn)三：與W組比較,WI組胃液pH值、GMBF增加,而UI降低,同實(shí)驗(yàn)二結(jié)果相一致,胃粘膜p-Akt表達(dá)水平升高,HIF-1α、VEGF表達(dá)明顯增加(P0.05),說(shuō)明外源性IGF-1可能通過(guò)激活胃粘膜細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路上調(diào)HIF-1α蛋白表達(dá)；WIL組相比于WI組,胃液pH值、GMBF減少,但UI有所增加(P0.05),胃粘膜p-Akt表達(dá)水平降低,同時(shí)HIF-1α、VEGF表達(dá)減少(P0.05),表明給予PI3K抑制劑LY294002阻斷了PI3K/Akt信號(hào)通路后有效的降低了HIF-1α的表達(dá),減弱了IGF-1胃粘膜保護(hù)作用。結(jié)論外源性IGF-1通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路上調(diào)SU大鼠胃粘膜HIF-1α的表達(dá),增加胃粘膜血流,促進(jìn)潰瘍愈合,發(fā)揮胃粘膜保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：應(yīng)激性潰瘍 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1 低氧誘導(dǎo)因子1α 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 磷脂酰肌醇-3激酶 蛋白激酶B
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R573.1
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)詞表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-17
• 1 材料與方法17-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-22
• 1.2.1 SU模型制備18-19
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組19-20
• 1.2.3 胃粘膜損傷指標(biāo)的測(cè)定20
• 1.2.4 HE染色檢測(cè)胃粘膜病理形態(tài)變化20-21
• 1.2.5 Westernblot檢測(cè)胃粘膜相關(guān)蛋白的表達(dá)21-22
• 1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22
• 2 結(jié)果22-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)一：不同水浸時(shí)間對(duì)大鼠胃粘膜的影響22-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)二：不同劑量外源性IGF-1對(duì)應(yīng)激大鼠胃粘膜的影響24-26
• 2.3 實(shí)驗(yàn)三：外源性IGF-1影響應(yīng)激大鼠胃粘膜目的表達(dá)的作用機(jī)制26-29
• 3 討論29-32
• 4 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-39
• 文獻(xiàn)綜述39-48
• 1.1 HIF-1的結(jié)構(gòu)概述39-40
• 1.2 HIF-1的調(diào)節(jié)途徑40
• 1.3 HIF-1的主要生物學(xué)效應(yīng)40-41
• 1.4 HIF-1與缺氧性疾病的相關(guān)研究41-43
• 1.5 以HIF-1為靶點(diǎn)的治療方法43-44
• 1.6 結(jié)語(yǔ)44
• 1.7 參考文獻(xiàn)44-48
• 附錄48-49
• 致謝49-50

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王凌娟,張?chǎng)?胃潰瘍及實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型[J];中國(guó)燒傷創(chuàng)瘍雜志;2000年02期

2 ;Dynamic functional and ultrastructural changes of gastric parietal cells induced by water immersion-restraint stress in rats[J];World Journal of Gastroenterology;2006年21期

3 ;Gastric mucosal damage in water immersion stress:Mechanism and prevention with GHRP-6[J];World Journal of Gastroenterology;2012年24期

  本文關(guān)鍵詞：外源性IGF-1調(diào)控HIF-1α表達(dá)對(duì)應(yīng)激性潰瘍大鼠胃粘膜的保護(hù)作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：274662