本文關(guān)鍵詞：介入治療誘導(dǎo)HIF-1a加重肝纖維化的分子機制及干預(yù)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝纖維化是一個全球重大的健康問題，一旦發(fā)展到終末期，形成肝硬化則無法逆轉(zhuǎn)。但是，肝纖維化的可逆轉(zhuǎn)性已得到國內(nèi)外眾多學(xué)者的證實和認(rèn)可。近年來，國內(nèi)外學(xué)者針對肝纖維化逆轉(zhuǎn)機制的臨床和實驗研究不斷涌現(xiàn)，，大量的促纖維化因子被發(fā)現(xiàn)，但尚未找到切實有效的治療方法。另外，大量的臨床實踐及研究報道證明，纖維化的肝組織因結(jié)構(gòu)改變及治療過程中如肝細(xì)胞肝癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）經(jīng)動脈栓塞治療（transarterial embolization，TAE）造成的肝組織缺氧能夠?qū)е赂卫w維化程度的進一步加重，形成肝纖維化進展的惡性循環(huán)并影響HCC患者TAE治療的遠(yuǎn)期療效。目前，缺氧與肝纖維化的關(guān)系已被學(xué)界普遍認(rèn)知，但是其具體的分子機制并未闡明，同時缺乏有效的干預(yù)手段。因此，尋找逆轉(zhuǎn)肝纖維化進程的有效治療手段及探討缺氧加重肝纖維化的機制并建立相應(yīng)的干預(yù)策略，對于有效防止肝硬化及其相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生，提高患者生存質(zhì)量具有重要意義。 第一部分：目的探討肝動脈缺氧加重肝纖維化程度的分子機制，初步研究抑制缺氧誘導(dǎo)因子對缺氧加重肝纖維化程度的干預(yù)作用。 方法雄性Sprague Dawley （SD）大鼠60只，隨機分為假手術(shù)組、肝動脈結(jié)扎（hepatic artery ligation，HAL）組、HAL+LW6治療組、四氯化碳（carbon tetrachloride，CCL4）誘導(dǎo)肝纖維化組、CCL4誘導(dǎo)肝纖維化+HAL組、CCL4誘導(dǎo)肝纖維化+HAL+LW6治療組。不同時間點處死實驗動物，并獲取肝組織，石蠟包埋切片，利用哌莫硝唑攝取實驗評價肝臟組織的缺氧程度；行天狼星紅-苦味酸染色，了解肝纖維化程度及缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia induced factors1 alpha，HIF-1α）抑制劑LW6對缺氧加重肝纖維化程度的干預(yù)作用；通過免疫組織化學(xué)染色觀察HIF-1α、促纖維化因子轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscleactin，α-SMA）的表達(dá)情況，闡明缺氧加重肝纖維化的現(xiàn)象及可能的分子機制；利用體外培養(yǎng)的人肝細(xì)胞株，給予缺氧處理，通過Western blot、ELISA等方法評估缺氧處理前后肝細(xì)胞中TGF-β1和VEGF的合成和分泌情況，進一步研究缺氧加重肝纖維化的分子機制。 結(jié)果1.天狼星紅-苦味酸染色結(jié)果顯示，缺氧促進肝組織膠原沉積；2.免疫組化結(jié)果顯示大鼠肝組織中TGF-β1，VEGF表達(dá)水平和HIF-1α表達(dá)水平呈正相關(guān)。3.Western blot結(jié)果顯示缺氧導(dǎo)致肝細(xì)胞中HIF-1α及TGF-β1、VEGF表達(dá)上調(diào)。4.缺氧狀態(tài)下肝細(xì)胞中HIF-1α正向調(diào)控VEGF的表達(dá)。5. HIF-1α抑制劑LW6能夠減弱缺氧后肝組織中膠原纖維的沉積。6.α-SMA免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：HIF-1α抑制劑LW6能夠抑制缺氧對肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSCs）的激活作用。 結(jié)論HAL術(shù)后導(dǎo)致的肝組織缺氧能夠加重肝纖維化的程度；肝組織缺氧后肝細(xì)胞中HIF-1α表達(dá)上調(diào)并通過正向調(diào)控肝細(xì)胞中的TGF-β1、VEGF合成和分泌導(dǎo)致肝纖維化的加重；HIF-1α抑制劑LW6能夠減弱缺氧后肝組織中HSCs的活化及肝組織內(nèi)膠原纖維的沉積，從而抑制缺氧加重肝纖維化的進程。 第二部分：目的觀察多靶點酪氨酸激酶抑制劑阿西替尼對CCL4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化疾病進程的影響，初步探討阿西替尼治療肝纖維化的可行性。 方法將SD大鼠18只腹腔注射CCl_4后，隨機分為肝纖維化組和阿西替尼治療組，每2周處死后取肝組織。利用蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）、天狼星紅-苦味酸染色技術(shù)觀察肝組織病理學(xué)改變及肝內(nèi)膠原蛋白的沉積情況，另外利用Western blot技術(shù)檢測肝組織中膠原蛋白含量，并通過免疫組化染色檢測α-SMA的表達(dá)水平。 結(jié)果隨著CCl_4處理時間的延長，大鼠肝臟纖維組織增生程度較對照組明顯增高。阿西替尼治療組大鼠肝臟肝纖維化程度，膠原蛋白含量及α-SMA的表達(dá)顯著低于肝纖維化組（P0.05）。 結(jié)論阿西替尼可能通過阻斷HSCs激活從而有效抑制大鼠肝纖維化進程。
【關(guān)鍵詞】：缺氧 肝纖維化 肝星狀細(xì)胞 分子機制 治療
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-28
• 1 肝纖維化的病因及發(fā)生發(fā)展的機制15-22
• 1.1 肝纖維化發(fā)生的病因?qū)W基礎(chǔ)15
• 1.2 肝纖維化發(fā)生發(fā)展的細(xì)胞學(xué)機制15-17
• 1.3 細(xì)胞因子與肝纖維化17-22
• 2 肝細(xì)胞肝癌的介入栓塞治療22-23
• 2.1 介入栓塞在肝細(xì)胞肝癌治療中的應(yīng)用及預(yù)后22-23
• 2.2 HCC 介入栓塞治療后肝纖維化加重的機制23
• 3 缺氧與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展23-25
• 3.0 缺氧刺激 Kupffer 細(xì)胞參與肝纖維化進程23-24
• 3.1 缺氧激活肝星狀細(xì)胞參與肝纖維化24
• 3.2 缺氧誘導(dǎo)肝細(xì)胞 EMT 參與肝纖維化24-25
• 3.3 缺氧促進肝血竇內(nèi)皮毛細(xì)血管化參與肝纖維化25
• 4 肝纖維化的治療及轉(zhuǎn)歸25-28
• 第一部分：肝組織缺氧加重肝纖維化進展的分子機制及干預(yù)措施的實驗研究28-41
• 1 實驗材料28-30
• 2 方法30-35
• 3 結(jié)果35-39
• 4 討論39-41
• 第二部分：多靶點酪氨酸激酶抑制劑阿西替尼治療大鼠肝纖維化的實驗研究41-47
• 1 實驗材料41
• 2 方法41-42
• 3 結(jié)果42-45
• 4 討論45-47
• 小結(jié)47-49
• 參考文獻(xiàn)49-61
• 個人簡歷和研究成果61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李辛,黎海亮,劉海泉,張建偉,郭e

本文編號：273900