本文關(guān)鍵詞：介入治療誘導(dǎo)HIF-1a加重肝纖維化的分子機(jī)制及干預(yù)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝纖維化是一個(gè)全球重大的健康問題，一旦發(fā)展到終末期，形成肝硬化則無法逆轉(zhuǎn)。但是，肝纖維化的可逆轉(zhuǎn)性已得到國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者的證實(shí)和認(rèn)可。近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)肝纖維化逆轉(zhuǎn)機(jī)制的臨床和實(shí)驗(yàn)研究不斷涌現(xiàn)，，大量的促纖維化因子被發(fā)現(xiàn)，但尚未找到切實(shí)有效的治療方法。另外，大量的臨床實(shí)踐及研究報(bào)道證明，纖維化的肝組織因結(jié)構(gòu)改變及治療過程中如肝細(xì)胞肝癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）經(jīng)動(dòng)脈栓塞治療（transarterial embolization，TAE）造成的肝組織缺氧能夠?qū)е赂卫w維化程度的進(jìn)一步加重，形成肝纖維化進(jìn)展的惡性循環(huán)并影響HCC患者TAE治療的遠(yuǎn)期療效。目前，缺氧與肝纖維化的關(guān)系已被學(xué)界普遍認(rèn)知，但是其具體的分子機(jī)制并未闡明，同時(shí)缺乏有效的干預(yù)手段。因此，尋找逆轉(zhuǎn)肝纖維化進(jìn)程的有效治療手段及探討缺氧加重肝纖維化的機(jī)制并建立相應(yīng)的干預(yù)策略，對(duì)于有效防止肝硬化及其相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生，提高患者生存質(zhì)量具有重要意義。 第一部分：目的探討肝動(dòng)脈缺氧加重肝纖維化程度的分子機(jī)制，初步研究抑制缺氧誘導(dǎo)因子對(duì)缺氧加重肝纖維化程度的干預(yù)作用。 方法雄性Sprague Dawley （SD）大鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、肝動(dòng)脈結(jié)扎（hepatic artery ligation，HAL）組、HAL+LW6治療組、四氯化碳（carbon tetrachloride，CCL4）誘導(dǎo)肝纖維化組、CCL4誘導(dǎo)肝纖維化+HAL組、CCL4誘導(dǎo)肝纖維化+HAL+LW6治療組。不同時(shí)間點(diǎn)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并獲取肝組織，石蠟包埋切片，利用哌莫硝唑攝取實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)肝臟組織的缺氧程度；行天狼星紅-苦味酸染色，了解肝纖維化程度及缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia induced factors1 alpha，HIF-1α）抑制劑LW6對(duì)缺氧加重肝纖維化程度的干預(yù)作用；通過免疫組織化學(xué)染色觀察HIF-1α、促纖維化因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscleactin，α-SMA）的表達(dá)情況，闡明缺氧加重肝纖維化的現(xiàn)象及可能的分子機(jī)制；利用體外培養(yǎng)的人肝細(xì)胞株，給予缺氧處理，通過Western blot、ELISA等方法評(píng)估缺氧處理前后肝細(xì)胞中TGF-β1和VEGF的合成和分泌情況，進(jìn)一步研究缺氧加重肝纖維化的分子機(jī)制。 結(jié)果1.天狼星紅-苦味酸染色結(jié)果顯示，缺氧促進(jìn)肝組織膠原沉積；2.免疫組化結(jié)果顯示大鼠肝組織中TGF-β1，VEGF表達(dá)水平和HIF-1α表達(dá)水平呈正相關(guān)。3.Western blot結(jié)果顯示缺氧導(dǎo)致肝細(xì)胞中HIF-1α及TGF-β1、VEGF表達(dá)上調(diào)。4.缺氧狀態(tài)下肝細(xì)胞中HIF-1α正向調(diào)控VEGF的表達(dá)。5. HIF-1α抑制劑LW6能夠減弱缺氧后肝組織中膠原纖維的沉積。6.α-SMA免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：HIF-1α抑制劑LW6能夠抑制缺氧對(duì)肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSCs）的激活作用。 結(jié)論HAL術(shù)后導(dǎo)致的肝組織缺氧能夠加重肝纖維化的程度；肝組織缺氧后肝細(xì)胞中HIF-1α表達(dá)上調(diào)并通過正向調(diào)控肝細(xì)胞中的TGF-β1、VEGF合成和分泌導(dǎo)致肝纖維化的加重；HIF-1α抑制劑LW6能夠減弱缺氧后肝組織中HSCs的活化及肝組織內(nèi)膠原纖維的沉積，從而抑制缺氧加重肝纖維化的進(jìn)程。 第二部分：目的觀察多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑阿西替尼對(duì)CCL4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化疾病進(jìn)程的影響，初步探討阿西替尼治療肝纖維化的可行性。 方法將SD大鼠18只腹腔注射CCl_4后，隨機(jī)分為肝纖維化組和阿西替尼治療組，每2周處死后取肝組織。利用蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）、天狼星紅-苦味酸染色技術(shù)觀察肝組織病理學(xué)改變及肝內(nèi)膠原蛋白的沉積情況，另外利用Western blot技術(shù)檢測(cè)肝組織中膠原蛋白含量，并通過免疫組化染色檢測(cè)α-SMA的表達(dá)水平。 結(jié)果隨著CCl_4處理時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠肝臟纖維組織增生程度較對(duì)照組明顯增高。阿西替尼治療組大鼠肝臟肝纖維化程度，膠原蛋白含量及α-SMA的表達(dá)顯著低于肝纖維化組（P0.05）。 結(jié)論阿西替尼可能通過阻斷HSCs激活從而有效抑制大鼠肝纖維化進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：缺氧 肝纖維化 肝星狀細(xì)胞 分子機(jī)制 治療
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-28
• 1 肝纖維化的病因及發(fā)生發(fā)展的機(jī)制15-22
• 1.1 肝纖維化發(fā)生的病因?qū)W基礎(chǔ)15
• 1.2 肝纖維化發(fā)生發(fā)展的細(xì)胞學(xué)機(jī)制15-17
• 1.3 細(xì)胞因子與肝纖維化17-22
• 2 肝細(xì)胞肝癌的介入栓塞治療22-23
• 2.1 介入栓塞在肝細(xì)胞肝癌治療中的應(yīng)用及預(yù)后22-23
• 2.2 HCC 介入栓塞治療后肝纖維化加重的機(jī)制23
• 3 缺氧與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展23-25
• 3.0 缺氧刺激 Kupffer 細(xì)胞參與肝纖維化進(jìn)程23-24
• 3.1 缺氧激活肝星狀細(xì)胞參與肝纖維化24
• 3.2 缺氧誘導(dǎo)肝細(xì)胞 EMT 參與肝纖維化24-25
• 3.3 缺氧促進(jìn)肝血竇內(nèi)皮毛細(xì)血管化參與肝纖維化25
• 4 肝纖維化的治療及轉(zhuǎn)歸25-28
• 第一部分：肝組織缺氧加重肝纖維化進(jìn)展的分子機(jī)制及干預(yù)措施的實(shí)驗(yàn)研究28-41
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28-30
• 2 方法30-35
• 3 結(jié)果35-39
• 4 討論39-41
• 第二部分：多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑阿西替尼治療大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究41-47
• 1 實(shí)驗(yàn)材料41
• 2 方法41-42
• 3 結(jié)果42-45
• 4 討論45-47
• 小結(jié)47-49
• 參考文獻(xiàn)49-61
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李辛,黎海亮,劉海泉,張建偉,郭e

本文編號(hào)：273900