發(fā)布時(shí)間：2017-03-29 03:14

  本文關(guān)鍵詞：潰瘍性結(jié)腸炎及回腸貯袋腸道微生物屏障的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:分析潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)及全結(jié)直腸切除、回腸貯袋肛管吻合手術(shù)(ileal pouch anal anastomosis,IPAA)術(shù)后回腸貯袋的腸道微生物屏障變化,探討UC及回腸貯袋炎發(fā)生的微生物學(xué)機(jī)制。方法:收集2013年7月~2014年7月在天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院普通外科和消化內(nèi)科病房及門診的UC患者和IPAA術(shù)后患者糞便標(biāo)本,同時(shí)收集性別年齡相匹配的健康人糞便標(biāo)本作為健康對照組。按照評估UC活動性的改良Mayo評分系統(tǒng)將UC組分為緩解期、輕度活動、中度活動及重度活動四組,按照回腸貯袋炎活動指數(shù)評分(PDAI)將IPAA術(shù)后組分為7分(無貯袋炎組)和7分及以上(貯袋炎組)兩組。采用糞便基因組DNA提取試劑盒提取糞便基因組DNA,設(shè)計(jì)帶有GC片段的針對細(xì)菌16Sr DNA基因V3區(qū)通用引物,采用Touchdown PCR技術(shù)對糞便基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增,將擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物進(jìn)行變性梯度凝膠電泳(DGGE),對DGGE條帶進(jìn)行切膠、回收、測序,確定各條帶所代表的細(xì)菌種類。對DGGE條帶進(jìn)行多樣性分析,采用quantity one軟件對健康對照組、UC各組及IPAA術(shù)后各組進(jìn)行Dice相似性分析及UPGMA樹狀圖分析,采用Canoco軟件對健康對照組、UC各組及IPAA術(shù)后各組進(jìn)行主成份分析(PCA分析)。結(jié)果:健康對照組:健康人腸道菌群的16Sr DNA基因V3區(qū)的DGGE圖譜主要由16.63±2.872條優(yōu)勢條帶(優(yōu)勢菌群)組成;健康人腸道主要優(yōu)勢菌屬以普氏菌屬為代表的各種擬桿菌為主。UC各組:與健康對照組相比,UC患者腸道細(xì)菌多樣性減少,且隨病情加重而明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與健康對照組相比,UC患者腸道優(yōu)勢菌屬種類分布發(fā)生變化,主要表現(xiàn)為有益菌或中性菌如普氏菌屬等的減少和有害菌如致病性大腸桿菌等的增加;Dice相似性分析及UPGMA樹狀圖分析均表明,健康對照組與UC各組組間相似性低于組內(nèi)相似性(p0.05);PCA分析顯示,前兩個(gè)排序軸對物種變量的解釋量為40.3%,不同組別之間能夠被理想的分開。IPAA術(shù)后各組:與健康對照組相比,IPAA術(shù)后患者回腸貯袋細(xì)菌多樣性減少,且隨PDAI評分增加而明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與健康對照組相比,IPAA術(shù)后患者腸道優(yōu)勢菌屬種類分布及數(shù)量發(fā)生變化;Dice相似性分析及UPGMA樹狀圖分析均表明,健康對照組與IPAA術(shù)后各組組內(nèi)相似性大于組間相似性(p0.05);PCA分析表明,前兩個(gè)排序軸對物種變量的解釋量為40.0%,正常對照組、無貯袋炎組和貯袋炎組能夠被理想的分開。結(jié)論:腸道菌群組成復(fù)雜,個(gè)體差異較為明顯,腸道菌群的復(fù)雜程度也代表了腸道微生物屏障的復(fù)雜性。潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群種類和數(shù)量發(fā)生明顯改變,并隨病情加重而明顯,且相同組內(nèi)的菌群改變存在一定的趨勢。本實(shí)驗(yàn)成果的取得對臨床上應(yīng)用益生菌、抗生素及糞菌移植等治療UC提供依據(jù),也為下一步采用特異性菌群進(jìn)行動物灌腸及UC動物模型構(gòu)建奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。IPAA術(shù)后回腸貯袋正常菌群發(fā)生改變,回腸貯袋炎患者貯袋正常菌群發(fā)生紊亂。腸道及回腸貯袋菌群失調(diào)與腸粘膜及回腸貯袋粘膜相互作用,直接或間接地的影響腸道微生物及免疫系統(tǒng),導(dǎo)致腸粘膜及貯袋粘膜微生物屏障損傷,介導(dǎo)了潰瘍性結(jié)腸炎及回腸貯袋炎的發(fā)生及發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：潰瘍性結(jié)腸炎 外科手術(shù) 貯袋炎 腸道菌群 發(fā)病機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 1.材料與方法14-26
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-16
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對象14
• 1.1.2 主要試劑及配制14-16
• 1.1.3 主要儀器16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)分組16-18
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)16-17
• 1.2.2 分組依據(jù)17-18
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 1.3.1 糞便基因組DNA的提取18-20
• 1.3.2 基因組DNA濃度及純度檢測20
• 1.3.3 細(xì)菌基因組 16SrDNA V3區(qū)特異性擴(kuò)增20-23
• 1.3.4 對Touchdown PCR產(chǎn)物的DGGE電泳檢測23-25
• 1.3.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)25-26
• 2.結(jié)果26-42
• 2.1 臨床資料26-27
• 2.2 糞便基因組DNA的提取鑒定27-28
• 2.3 Touchdown PCR產(chǎn)物鑒定28-29
• 2.4 DGGE圖譜解讀29
• 2.5 DGGE重現(xiàn)性鑒定29-30
• 2.6 DGGE條帶回收測序結(jié)果30-31
• 2.7 健康對照組DGGE圖譜分析31-32
• 2.8 UC各組DGGE圖譜分析32-38
• 2.8.1 健康對照組與UC各組細(xì)菌多樣性分析32-34
• 2.8.2 健康對照組與UC各組Dice相似性及UPGMA樹狀圖分析34-36
• 2.8.3 健康對照組與UC各組主成份分析36-38
• 2.9 IPAA術(shù)后各組DGGE圖譜分析38-42
• 2.9.1 健康對照組與IPAA術(shù)后各組細(xì)菌多樣性分析38-39
• 2.9.2 健康對照組與IPAA術(shù)后各組Dice相似性及UPGMA樹狀圖分析39-40
• 2.9.3 健康對照組與IPAA術(shù)后各組主成份分析40-42
• 3.討論42-51
• 3.1 腸道屏障42-46
• 3.1.1 腸道屏障的組成及特點(diǎn)42-44
• 3.1.2 潰瘍性結(jié)腸炎腸道微生物屏障44-45
• 3.1.3 IPAA術(shù)后貯袋微生物屏障45-46
• 3.2 16SrDNA-PCR-DGGE技術(shù)46-48
• 3.2.1 16SrDNA遺傳信息46-47
• 3.2.2 DGGE技術(shù)47-48
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論48-51
• 不足和展望51-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明57-58
• 綜述 潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展58-69
• 綜述參考文獻(xiàn)63-69
• 致謝69

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 錢娟;蘇煒;張國新;;幽門螺桿菌感染與克羅恩病關(guān)系的薈萃分析[J];國際消化病雜志;2014年06期

2 李楠;;潰瘍性結(jié)腸炎研究進(jìn)展[J];吉林醫(yī)學(xué);2014年07期

3 解春靜;莊彥華;欒雨蘢;;潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制中免疫因素的研究進(jìn)展[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年08期

4 Linda A Feagins;Ramiz Iqbal;Stuart J Spechler;;Case-control study of factors that trigger inflammatory bowel disease flares[J];World Journal of Gastroenterology;2014年15期

5 Konstantinos Papamichael;Panagiotis Konstantopoulos;Gerassimos J Mantzaris;;Helicobacter pylori infection and inflammatory bowel disease: Is there a link?[J];World Journal of Gastroenterology;2014年21期

6 Roberto Bringiotti;Enzo Ierardi;Rosa Lovero;Giuseppe Losurdo;Alfredo Di Leo;Mariabeatrice Principi;;Intestinal microbiota: The explosive mixture at the origin of inflammatory bowel disease?[J];World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology;2014年04期

7 Marta Maia Bosca-Watts;Joan Tosca;Rosario Anton;Maria Mora;Miguel Minguez;Francisco Mora;;Pathogenesis of Crohn's disease: Bug or no bug[J];World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology;2015年01期

8 Michele Cioffi;Antonella De Rosa;Rosalba Serao;Ilaria Picone;Maria Teresa Vietri;;Laboratory markers in ulcerative colitis: Current insights and future advances[J];World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology;2015年01期

9 許平平;任黎;許劍民;;炎癥性腸病外科治療理念的變化[J];中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)(電子版);2015年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 顧鑒秋;腸清口服液對潰瘍性結(jié)腸炎的防治作用及機(jī)制探討[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

2 婁運(yùn)偉;TNFAIP8和TIPE2蛋白在結(jié)腸炎中的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 邵曉娜;闌尾切除與炎癥性腸病發(fā)病關(guān)系的Meta分析[D];浙江大學(xué);2013年

2 韓海濤;益氣活血法治療氣虛血瘀型潰瘍性結(jié)腸炎的臨床研究[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2014年

3 劉同亭;清潰愈瘍湯結(jié)合中藥灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎作用機(jī)制研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：潰瘍性結(jié)腸炎及回腸貯袋腸道微生物屏障的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：273578