本文關鍵詞：氫生理鹽水對對乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的 藥物性肝損傷是指藥物本身(中藥、西藥)或其活性代謝產(chǎn)物所導致肝功能不全甚至發(fā)展至肝功能衰竭，嚴重可致患者死亡[1]。有證據(jù)表明，非甾體類抗炎藥是藥物性肝損傷常見的原因[2]。在西方國家，統(tǒng)計顯示非甾體類抗炎藥被大量使用和構成了藥物性肝損傷的常見原因[3]。事實上，全部藥物性肝損傷約10%與非甾體類抗炎藥有關[4]。在中國，非甾體類抗炎藥占藥物性肝損傷的比例是7.6%[4]；在美國，非甾體抗炎藥是美國藥物性肝損傷的最重要的原因，約占所有病例的41%[5]。 對乙酰氨基酚是一類重要的非甾體類抗炎藥，是藥物性肝損傷和急性肝功能衰竭的最常見原因，尤其是在美國、西歐[6]，占成人急性肝功能衰竭的病例的一半[7]。對乙酰氨基酚是典型的劑量依賴性肝毒性藥物，在體內(nèi)經(jīng)氧化反應形成高活性的中間代謝產(chǎn)物N－乙酰－對－苯醌亞胺（NAPQI）[8]。在治療劑量時，對乙酰氨基酚在肝臟代謝主要是生物轉(zhuǎn)化的第二相反應即與硫酸鹽和葡萄糖醛酸結合，但有一小部分代謝藥物通過生物轉(zhuǎn)化的第一相反應即肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的細胞色素P450(CYP)介導的氧化反應，隨后再進行第二相結合反應[8]。在生理狀態(tài)下，氧化反應主要通過細胞色素P450酶系統(tǒng)，主要是CYP2E1和CYP3A4兩種同功酶，，形成大量的NAPQI，NAPQI與谷胱甘肽結合無毒的硫醇尿酸而排出[8]。當對乙酰氨基酚過量時，硫酸鹽化作用和糖脂化作用的通路飽和，快速生成的NAPQI可導致肝內(nèi)的谷胱甘肽（GSH）儲備耗竭和降低解毒作用[9]。實驗證明：長時間的禁食和慢性飲酒通過降低肝內(nèi)谷胱甘肽儲備和增加由酒精誘導CYP2E1酶的表達來增加對對乙酰氨基酚肝毒性的敏感性[10]。NAPQI耗盡肝內(nèi)的GSH，使氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，生成大量活性氧族（ROS）和活性氮族（RNS）并產(chǎn)生氧化應激，最終導致肝小葉中心的壞死[11]。 研究證明ROS和RNS在對乙酰氨基酚所致肝損傷中起著至關緊要的作用，許多抗氧化劑如谷胱甘肽[12]、五味子素[13]、維生素E[14]、胡蘿卜素[15]、褪黑素[16]等已經(jīng)被證明對對乙酰氨基酚所致的肝損傷具有保護作用。 氫氣是世界上已知的密度最小的氣體，作為一種新型抗氧化劑，自2007年被日本學者Ohsawa等[17]人證明：吸入濃度為2%氫氣能明顯抑制大鼠腦部的局部缺血再灌注損傷或炎癥損傷是通過選擇性地降低了羥自由基、細胞毒性的活性氧自由基，從而有效保護細胞，提示氫氣作為一種抗氧化劑在預防和治療的應用潛力。許多報告已經(jīng)證明了氫氣不僅在腦部缺血再灌注損傷或炎癥損傷有保護作用[17]，而且在心[18]、肝[19]、腎[20]等缺血再灌注的損傷中同樣具有治療作用。 氫氣在高壓（0.4MPa）溶于生理鹽水中制成的濃度大于0.6mmol/L氫生理鹽水，更加安全、方便，研究同樣證明氫生理鹽水具有和氫氣一樣功能，對缺血再灌注損傷或炎癥引起的損傷具有保護作用[21-25]。 因此，本研究的目的是評估氫生理鹽水在對乙酰氨基酚誘導肝損傷的保護作用，通過檢測血漿ALT、AST和ALP水平，氧化應激、炎癥反應相關指標及肝組織病理學。研究內(nèi)容和方法 一、對乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷模型建立及實驗分組 1.對乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷模型建立 動物全部購自第二軍醫(yī)大學實驗動物中心，并飼養(yǎng)一周，實驗前動物被前禁食12小時。將配制2.5%的對乙酰氨基酚溶液，按照500mg/kg一次性腹腔注射，制備成急性肝損傷模型。 2.實驗分組 將40只雄性BALB/C小鼠隨機分成4組即：生理鹽水組（NS組）、對乙酰氨基酚組（APAP組）、對乙酰氨基酚+生理鹽水組（APAP+NS組）、對乙酰氨基酚+氫生理鹽水組（APAP+HS組）。APAP組和NS組給予2.5%對乙酰氨基酚500mg/kg或等劑量的生理鹽水一次性腹腔注射。而APAP+NS組和APAP+HS組除給予2.5%對乙酰氨基酚500mg/kg一次性腹腔注射后，每隔3小時再給予6ml/kg生理鹽水或等劑量氫生理鹽水腹腔注射。 二、對乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷實驗研究的檢測指標 1.檢測小鼠血漿的肝功能指標，如ALT、AST和ALP。 2.檢測小鼠氧化應激指標，如MPO、MDA、GSH。 3.檢測小鼠炎癥因子，如IL-6、TNF-。 4.觀察小鼠病理組織學改變。 三、氫生理鹽水減輕對乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷的可能機制 1.氫生理鹽水降低小鼠血漿ALT、AST和ALP水平可能與氫生理鹽水能減少肝細胞壞死程度，穩(wěn)定細胞膜的通透性，從而減少ALT、AST和ALP從壞死或損傷的肝細胞漏至血液中。 2.氫生理鹽水抑制MPO、MDA的生成，增加GSH的含量可能與氫生理鹽水具有清除ROS和RNS，減輕ROS和RNS對線粒體的損傷，維持線粒體正常結構與功能，降低脂質(zhì)過氧化反應和抑制氧化應激，保護肝細胞免受氧化應激及脂質(zhì)過氧化反應的損害。 3.研究表明細胞因子TNF-和IL-6參與APAP引起的肝臟毒性，而氫生理鹽水顯著降低血漿TNF-和IL-6水平和肝組織TNF-和IL-6基因表達，證明了氫生理鹽水能夠抑制對乙酰氨基酚所致肝臟炎癥反應，避免吞噬細胞浸潤并分泌大量炎癥細胞因子，從而保護肝臟免受對乙酰氨基酚所致肝損傷。 4.從HE染色光子顯微鏡觀察證實：對乙酰氨基酚所致肝細胞壞死主要是急性肝小葉中央?yún)^(qū)大片壞死為主，肝細胞壞死程劑量依賴性，隨著注射劑量的增加可能發(fā)展到肝功能衰竭甚至引起小鼠死亡。氫生理鹽水治療后，不僅明顯改善肝臟外形、質(zhì)地、顏色等，光學顯微鏡鏡下觀察提示：肝臟充血腫脹減輕，肝細胞索走向較清晰，肝細胞壞死面積顯著減少，肝細胞保持一個較好的形態(tài)。 結果 一、HS降低對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的血漿ALT、AST和ALP水平。 二、HS抑制對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的氧化應激。 三、HS抑制對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的炎癥反應。 四、HS降低對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠肝細胞壞死程度。 結論 實驗以對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠為研究對象，通過研究證明：腹腔注射氫生理鹽水能降低對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的血漿ALT、AST和ALP水平，顯著抑制氧化應激，抑制炎癥反應，有效減輕肝細胞壞死的嚴重程度。
【關鍵詞】：氫生理鹽水 藥物性肝損傷 對乙酰氨基酚 氧化應激
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 縮略詞表12-14
• 第一章 前言14-18
• 第二章 材料與方法18-24
• 一、實驗材料18-19
• 二、實驗方法19-24
• 第三章 結果24-32
• 一、HS降低對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的ALT、AST和ALP水平24-25
• 二、HS 抑制對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的氧化應激25-27
• 三、HS 抑制對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的炎癥反應27-28
• 四、HS 降低對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠肝細胞壞死程度28-32
• 第四章 討論32-37
• 第五章 結論37-38
• 參考文獻38-43
• 附錄43-46
• 一、實驗技術路線圖43-44
• 二、實驗數(shù)據(jù)匯總44-45
• 三、對乙酰氨基酚所致肝損傷機制圖45-46
• 文獻綜述46-52
• 參考文獻50-52
• 成果與發(fā)表論文52-53
• 致謝53-54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關鍵詞：氫生理鹽水對對乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：264240