本文關(guān)鍵詞：氫生理鹽水對(duì)對(duì)乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的 藥物性肝損傷是指藥物本身(中藥、西藥)或其活性代謝產(chǎn)物所導(dǎo)致肝功能不全甚至發(fā)展至肝功能衰竭，嚴(yán)重可致患者死亡[1]。有證據(jù)表明，非甾體類抗炎藥是藥物性肝損傷常見(jiàn)的原因[2]。在西方國(guó)家，統(tǒng)計(jì)顯示非甾體類抗炎藥被大量使用和構(gòu)成了藥物性肝損傷的常見(jiàn)原因[3]。事實(shí)上，全部藥物性肝損傷約10%與非甾體類抗炎藥有關(guān)[4]。在中國(guó)，非甾體類抗炎藥占藥物性肝損傷的比例是7.6%[4]；在美國(guó)，非甾體抗炎藥是美國(guó)藥物性肝損傷的最重要的原因，約占所有病例的41%[5]。 對(duì)乙酰氨基酚是一類重要的非甾體類抗炎藥，是藥物性肝損傷和急性肝功能衰竭的最常見(jiàn)原因，尤其是在美國(guó)、西歐[6]，占成人急性肝功能衰竭的病例的一半[7]。對(duì)乙酰氨基酚是典型的劑量依賴性肝毒性藥物，在體內(nèi)經(jīng)氧化反應(yīng)形成高活性的中間代謝產(chǎn)物N－乙酰－對(duì)－苯醌亞胺（NAPQI）[8]。在治療劑量時(shí)，對(duì)乙酰氨基酚在肝臟代謝主要是生物轉(zhuǎn)化的第二相反應(yīng)即與硫酸鹽和葡萄糖醛酸結(jié)合，但有一小部分代謝藥物通過(guò)生物轉(zhuǎn)化的第一相反應(yīng)即肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的細(xì)胞色素P450(CYP)介導(dǎo)的氧化反應(yīng)，隨后再進(jìn)行第二相結(jié)合反應(yīng)[8]。在生理狀態(tài)下，氧化反應(yīng)主要通過(guò)細(xì)胞色素P450酶系統(tǒng)，主要是CYP2E1和CYP3A4兩種同功酶，，形成大量的NAPQI，NAPQI與谷胱甘肽結(jié)合無(wú)毒的硫醇尿酸而排出[8]。當(dāng)對(duì)乙酰氨基酚過(guò)量時(shí)，硫酸鹽化作用和糖脂化作用的通路飽和，快速生成的NAPQI可導(dǎo)致肝內(nèi)的谷胱甘肽（GSH）儲(chǔ)備耗竭和降低解毒作用[9]。實(shí)驗(yàn)證明：長(zhǎng)時(shí)間的禁食和慢性飲酒通過(guò)降低肝內(nèi)谷胱甘肽儲(chǔ)備和增加由酒精誘導(dǎo)CYP2E1酶的表達(dá)來(lái)增加對(duì)對(duì)乙酰氨基酚肝毒性的敏感性[10]。NAPQI耗盡肝內(nèi)的GSH，使氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，生成大量活性氧族（ROS）和活性氮族（RNS）并產(chǎn)生氧化應(yīng)激，最終導(dǎo)致肝小葉中心的壞死[11]。 研究證明ROS和RNS在對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷中起著至關(guān)緊要的作用，許多抗氧化劑如谷胱甘肽[12]、五味子素[13]、維生素E[14]、胡蘿卜素[15]、褪黑素[16]等已經(jīng)被證明對(duì)對(duì)乙酰氨基酚所致的肝損傷具有保護(hù)作用。 氫氣是世界上已知的密度最小的氣體，作為一種新型抗氧化劑，自2007年被日本學(xué)者Ohsawa等[17]人證明：吸入濃度為2%氫氣能明顯抑制大鼠腦部的局部缺血再灌注損傷或炎癥損傷是通過(guò)選擇性地降低了羥自由基、細(xì)胞毒性的活性氧自由基，從而有效保護(hù)細(xì)胞，提示氫氣作為一種抗氧化劑在預(yù)防和治療的應(yīng)用潛力。許多報(bào)告已經(jīng)證明了氫氣不僅在腦部缺血再灌注損傷或炎癥損傷有保護(hù)作用[17]，而且在心[18]、肝[19]、腎[20]等缺血再灌注的損傷中同樣具有治療作用。 氫氣在高壓（0.4MPa）溶于生理鹽水中制成的濃度大于0.6mmol/L氫生理鹽水，更加安全、方便，研究同樣證明氫生理鹽水具有和氫氣一樣功能，對(duì)缺血再灌注損傷或炎癥引起的損傷具有保護(hù)作用[21-25]。 因此，本研究的目的是評(píng)估氫生理鹽水在對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)肝損傷的保護(hù)作用，通過(guò)檢測(cè)血漿ALT、AST和ALP水平，氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)及肝組織病理學(xué)。研究?jī)?nèi)容和方法 一、對(duì)乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷模型建立及實(shí)驗(yàn)分組 1.對(duì)乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷模型建立 動(dòng)物全部購(gòu)自第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，并飼養(yǎng)一周，實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物被前禁食12小時(shí)。將配制2.5%的對(duì)乙酰氨基酚溶液，按照500mg/kg一次性腹腔注射，制備成急性肝損傷模型。 2.實(shí)驗(yàn)分組 將40只雄性BALB/C小鼠隨機(jī)分成4組即：生理鹽水組（NS組）、對(duì)乙酰氨基酚組（APAP組）、對(duì)乙酰氨基酚+生理鹽水組（APAP+NS組）、對(duì)乙酰氨基酚+氫生理鹽水組（APAP+HS組）。APAP組和NS組給予2.5%對(duì)乙酰氨基酚500mg/kg或等劑量的生理鹽水一次性腹腔注射。而APAP+NS組和APAP+HS組除給予2.5%對(duì)乙酰氨基酚500mg/kg一次性腹腔注射后，每隔3小時(shí)再給予6ml/kg生理鹽水或等劑量氫生理鹽水腹腔注射。 二、對(duì)乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷實(shí)驗(yàn)研究的檢測(cè)指標(biāo) 1.檢測(cè)小鼠血漿的肝功能指標(biāo)，如ALT、AST和ALP。 2.檢測(cè)小鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)，如MPO、MDA、GSH。 3.檢測(cè)小鼠炎癥因子，如IL-6、TNF-。 4.觀察小鼠病理組織學(xué)改變。 三、氫生理鹽水減輕對(duì)乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷的可能機(jī)制 1.氫生理鹽水降低小鼠血漿ALT、AST和ALP水平可能與氫生理鹽水能減少肝細(xì)胞壞死程度，穩(wěn)定細(xì)胞膜的通透性，從而減少ALT、AST和ALP從壞死或損傷的肝細(xì)胞漏至血液中。 2.氫生理鹽水抑制MPO、MDA的生成，增加GSH的含量可能與氫生理鹽水具有清除ROS和RNS，減輕ROS和RNS對(duì)線粒體的損傷，維持線粒體正常結(jié)構(gòu)與功能，降低脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和抑制氧化應(yīng)激，保護(hù)肝細(xì)胞免受氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的損害。 3.研究表明細(xì)胞因子TNF-和IL-6參與APAP引起的肝臟毒性，而氫生理鹽水顯著降低血漿TNF-和IL-6水平和肝組織TNF-和IL-6基因表達(dá)，證明了氫生理鹽水能夠抑制對(duì)乙酰氨基酚所致肝臟炎癥反應(yīng)，避免吞噬細(xì)胞浸潤(rùn)并分泌大量炎癥細(xì)胞因子，從而保護(hù)肝臟免受對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷。 4.從HE染色光子顯微鏡觀察證實(shí)：對(duì)乙酰氨基酚所致肝細(xì)胞壞死主要是急性肝小葉中央?yún)^(qū)大片壞死為主，肝細(xì)胞壞死程劑量依賴性，隨著注射劑量的增加可能發(fā)展到肝功能衰竭甚至引起小鼠死亡。氫生理鹽水治療后，不僅明顯改善肝臟外形、質(zhì)地、顏色等，光學(xué)顯微鏡鏡下觀察提示：肝臟充血腫脹減輕，肝細(xì)胞索走向較清晰，肝細(xì)胞壞死面積顯著減少，肝細(xì)胞保持一個(gè)較好的形態(tài)。 結(jié)果 一、HS降低對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的血漿ALT、AST和ALP水平。 二、HS抑制對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的氧化應(yīng)激。 三、HS抑制對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的炎癥反應(yīng)。 四、HS降低對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠肝細(xì)胞壞死程度。 結(jié)論 實(shí)驗(yàn)以對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠為研究對(duì)象，通過(guò)研究證明：腹腔注射氫生理鹽水能降低對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的血漿ALT、AST和ALP水平，顯著抑制氧化應(yīng)激，抑制炎癥反應(yīng)，有效減輕肝細(xì)胞壞死的嚴(yán)重程度。
【關(guān)鍵詞】：氫生理鹽水 藥物性肝損傷 對(duì)乙酰氨基酚 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 縮略詞表12-14
• 第一章 前言14-18
• 第二章 材料與方法18-24
• 一、實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 二、實(shí)驗(yàn)方法19-24
• 第三章 結(jié)果24-32
• 一、HS降低對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的ALT、AST和ALP水平24-25
• 二、HS 抑制對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的氧化應(yīng)激25-27
• 三、HS 抑制對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠的炎癥反應(yīng)27-28
• 四、HS 降低對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠肝細(xì)胞壞死程度28-32
• 第四章 討論32-37
• 第五章 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 附錄43-46
• 一、實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖43-44
• 二、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總44-45
• 三、對(duì)乙酰氨基酚所致肝損傷機(jī)制圖45-46
• 文獻(xiàn)綜述46-52
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 成果與發(fā)表論文52-53
• 致謝53-54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：264240