本文關(guān)鍵詞：PCR-反向點(diǎn)雜交法與DNA直接測(cè)序法檢測(cè)HBV耐藥變異與基因型的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 用PCR-反向點(diǎn)雜交法和DNA直接測(cè)序法兩種方法檢測(cè)乙型肝炎病毒基因耐藥位點(diǎn)的突變情況以及基因型,并進(jìn)行比較分析,進(jìn)一步證實(shí)PCR-反向點(diǎn)雜交法是一種快速,準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療后耐藥位點(diǎn)的檢測(cè)方法。同時(shí)將檢測(cè)結(jié)果與臨床資料進(jìn)行分析,進(jìn)一步探討乙型肝炎病毒耐藥變異與基因型、肝功能檢測(cè)指標(biāo)、HBV DNA病毒載量等的相關(guān)性。 方法： 收集102例服用核苷類藥物治療的慢性乙型肝炎患者血清標(biāo)本,采用PCR-反向點(diǎn)雜交法和DNA直接測(cè)序法檢測(cè)HBV的耐藥突變位點(diǎn)以及基因型,并對(duì)HBV耐藥變異與基因型、肝功能檢測(cè)指標(biāo)、HBV DNA病毒載量等指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果： 1.兩種檢測(cè)方法準(zhǔn)確度比較：在102例服用核苷類藥物的慢性乙型肝炎患者血清中,PCR-反向點(diǎn)雜交法檢出耐藥突變株79例,變異率為77.5%；其中180M和204I突變株48例,占60.8%；204V突變株22例,占27.8%；181V突變株9例,占11.4%；HBV基因型中B基因型10例,C基因型84例,D基因型1例。DNA-直接測(cè)序法檢出耐藥變異株84例,其變異率為82.4%,共檢出5種變異位點(diǎn),其中分別為180M和204I突變株50例,占59.5%；204V突變株24例,占28.6%；181V突變株9例,占10.7‰202G1例,占1.2%。其中12份標(biāo)本為B型,占11.8%；89份標(biāo)本為C型,占87.3%；1份標(biāo)本為D型,占0.9%。兩種方法的準(zhǔn)確度經(jīng)χ2檢驗(yàn),無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.兩種檢測(cè)方法靈敏度的比較：HBV DNA水平在1000copies/ml的血清中,PCR-反向點(diǎn)雜交法無(wú)法檢出突變株；DNA-直接測(cè)序法檢出耐藥突變株5例。在相同HBV DNA檢測(cè)水平下,PCR-反向點(diǎn)雜交法和DNA直接測(cè)序法能同時(shí)檢出變異株與野生株,兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 3.將檢測(cè)結(jié)果與臨床資料進(jìn)行相關(guān)性分析：乙肝患者的耐藥變異位點(diǎn)與基因型、肝功能指標(biāo)無(wú)相關(guān)性(P0.05),與HBV DNA病毒載量有一定相關(guān)性(P0.05)。 結(jié)論： 1.PCR-反向點(diǎn)雜交法靈敏度和準(zhǔn)確度與DNA直接測(cè)序法(金標(biāo)準(zhǔn)方法)檢測(cè)相符率高。 2.PCR-反向點(diǎn)雜交法是一種快速,準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療后耐藥位點(diǎn)的檢測(cè)方法。 3.檢測(cè)結(jié)果與臨床相關(guān)性分析,乙型肝炎耐藥變異位點(diǎn)與基因型、肝功能檢測(cè)指標(biāo)無(wú)相關(guān)性,而與HBV DNA病毒載量等指標(biāo)有一定的相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒 耐藥變異 基因型 PCR-反向點(diǎn)雜交法 DNA直接測(cè)序法
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R512.62;R3416
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• ~.略語(yǔ)10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 材料與方法14-19
• 1 研究對(duì)象14
• 2 方法14-19
• 2.1 主要試劑14
• 2.2 主要儀器14-15
• 2.3 PCR-反向點(diǎn)雜交法檢測(cè)HBV耐藥變異與基因型15
• 2.3.1 HBV DNA的提取15
• 2.3.2 PCR擴(kuò)增反應(yīng)15
• 2.3.3 PCR反應(yīng)條件15
• 2.3.4 雜交15
• 2.3.5 洗膜和顯色15
• 2.4 PCR直接測(cè)序法檢測(cè)HBV耐藥變異與基因型15-18
• 2.4.1 HBV DNA提取15-16
• 2.4.2 巢式PCR擴(kuò)增16-18
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理18-19
• 結(jié)果19-23
• 1 PCR-反向點(diǎn)雜交法及PCR直接測(cè)序法檢測(cè)結(jié)果19-20
• 1.1 PCR-反向點(diǎn)雜交法檢測(cè)HBV耐藥變異與基因型結(jié)果19
• 1.1.1 PCR-反向點(diǎn)雜交法結(jié)果模式圖19
• 1.1.2 PCR-反向點(diǎn)雜交法結(jié)果19
• 1.2 PCR-直接測(cè)序法檢測(cè)HBV耐藥變異與基因型結(jié)果19-20
• 2 兩種方法檢測(cè)結(jié)果的比較分析20-21
• 2.1 兩種方法變異檢出率的比較20-21
• 2.2 兩種檢測(cè)方法在不同HBV-DNA水平變異檢出率的比較21
• 3 HBV基因分型與基因變異的相關(guān)性結(jié)果21-22
• 4 HBV變異與肝功能、HBV DNA病毒載量的關(guān)系22-23
• 討論23-27
• 小結(jié)27-28
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明31-32
• 綜述32-43
• 綜述參考文獻(xiàn)40-43
• 致謝43

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王義光,朱武軍,楊興林;貴陽(yáng)地區(qū)乙型肝炎病毒YMDD變異與基因分型[J];中華肝臟病雜志;2005年03期

  本文關(guān)鍵詞：PCR-反向點(diǎn)雜交法與DNA直接測(cè)序法檢測(cè)HBV耐藥變異與基因型的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：263944