本文關鍵詞：PCR-反向點雜交法與DNA直接測序法檢測HBV耐藥變異與基因型的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 用PCR-反向點雜交法和DNA直接測序法兩種方法檢測乙型肝炎病毒基因耐藥位點的突變情況以及基因型,并進行比較分析,進一步證實PCR-反向點雜交法是一種快速,準確發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療后耐藥位點的檢測方法。同時將檢測結果與臨床資料進行分析,進一步探討乙型肝炎病毒耐藥變異與基因型、肝功能檢測指標、HBV DNA病毒載量等的相關性。 方法： 收集102例服用核苷類藥物治療的慢性乙型肝炎患者血清標本,采用PCR-反向點雜交法和DNA直接測序法檢測HBV的耐藥突變位點以及基因型,并對HBV耐藥變異與基因型、肝功能檢測指標、HBV DNA病毒載量等指標進行相關性分析。 結果： 1.兩種檢測方法準確度比較：在102例服用核苷類藥物的慢性乙型肝炎患者血清中,PCR-反向點雜交法檢出耐藥突變株79例,變異率為77.5%；其中180M和204I突變株48例,占60.8%；204V突變株22例,占27.8%；181V突變株9例,占11.4%；HBV基因型中B基因型10例,C基因型84例,D基因型1例。DNA-直接測序法檢出耐藥變異株84例,其變異率為82.4%,共檢出5種變異位點,其中分別為180M和204I突變株50例,占59.5%；204V突變株24例,占28.6%；181V突變株9例,占10.7‰202G1例,占1.2%。其中12份標本為B型,占11.8%；89份標本為C型,占87.3%；1份標本為D型,占0.9%。兩種方法的準確度經(jīng)χ2檢驗,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2.兩種檢測方法靈敏度的比較：HBV DNA水平在1000copies/ml的血清中,PCR-反向點雜交法無法檢出突變株；DNA-直接測序法檢出耐藥突變株5例。在相同HBV DNA檢測水平下,PCR-反向點雜交法和DNA直接測序法能同時檢出變異株與野生株,兩者差異無統(tǒng)計學意義(P0.05) 3.將檢測結果與臨床資料進行相關性分析：乙肝患者的耐藥變異位點與基因型、肝功能指標無相關性(P0.05),與HBV DNA病毒載量有一定相關性(P0.05)。 結論： 1.PCR-反向點雜交法靈敏度和準確度與DNA直接測序法(金標準方法)檢測相符率高。 2.PCR-反向點雜交法是一種快速,準確發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療后耐藥位點的檢測方法。 3.檢測結果與臨床相關性分析,乙型肝炎耐藥變異位點與基因型、肝功能檢測指標無相關性,而與HBV DNA病毒載量等指標有一定的相關性。
【關鍵詞】：乙型肝炎病毒 耐藥變異 基因型 PCR-反向點雜交法 DNA直接測序法
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R512.62;R3416
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• ~.略語10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 材料與方法14-19
• 1 研究對象14
• 2 方法14-19
• 2.1 主要試劑14
• 2.2 主要儀器14-15
• 2.3 PCR-反向點雜交法檢測HBV耐藥變異與基因型15
• 2.3.1 HBV DNA的提取15
• 2.3.2 PCR擴增反應15
• 2.3.3 PCR反應條件15
• 2.3.4 雜交15
• 2.3.5 洗膜和顯色15
• 2.4 PCR直接測序法檢測HBV耐藥變異與基因型15-18
• 2.4.1 HBV DNA提取15-16
• 2.4.2 巢式PCR擴增16-18
• 2.5 統(tǒng)計學處理18-19
• 結果19-23
• 1 PCR-反向點雜交法及PCR直接測序法檢測結果19-20
• 1.1 PCR-反向點雜交法檢測HBV耐藥變異與基因型結果19
• 1.1.1 PCR-反向點雜交法結果模式圖19
• 1.1.2 PCR-反向點雜交法結果19
• 1.2 PCR-直接測序法檢測HBV耐藥變異與基因型結果19-20
• 2 兩種方法檢測結果的比較分析20-21
• 2.1 兩種方法變異檢出率的比較20-21
• 2.2 兩種檢測方法在不同HBV-DNA水平變異檢出率的比較21
• 3 HBV基因分型與基因變異的相關性結果21-22
• 4 HBV變異與肝功能、HBV DNA病毒載量的關系22-23
• 討論23-27
• 小結27-28
• 參考文獻28-31
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明31-32
• 綜述32-43
• 綜述參考文獻40-43
• 致謝43

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王義光,朱武軍,楊興林;貴陽地區(qū)乙型肝炎病毒YMDD變異與基因分型[J];中華肝臟病雜志;2005年03期

  本文關鍵詞：PCR-反向點雜交法與DNA直接測序法檢測HBV耐藥變異與基因型的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：263944