本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)重癥急性胰腺炎后胰腺組織損傷修復(fù)的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：急性胰腺炎是臨床上常見的急腹癥之一，其中10-20%可發(fā)展為重癥急性胰腺炎。該類型是一種病情兇險、并發(fā)癥多、預(yù)后差、死亡率高的嚴(yán)重疾病。目前，臨床上對SAP的治療缺乏特異有效的治療方法。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報導(dǎo)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Mesenchymal Stem Cells，BMSCs）參與了急性胰腺炎的發(fā)病過程，并能減輕病情，，改善預(yù)后，提高生存率，但BMSCs對SAP的作用機(jī)制目前尚不完全清楚。本課題以SD大鼠SAP為動物模型，給予SAP雄性大鼠移植同種異體BMSCs，觀察輸注后大鼠胰腺的病理損傷修復(fù)情況，并初步探討SMSCs對SAP大鼠胰腺損傷的修復(fù)機(jī)制。 一、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取、分離、培養(yǎng)和鑒定 目的：體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行表面抗原鑒定及多向分化能力檢測，以建立穩(wěn)定的BMSCs體外培養(yǎng)、擴(kuò)增體系，供日后的實驗做準(zhǔn)備。 方法：取健康成年的雄性SD大鼠，在無菌的條件下，取大鼠雙下肢，分離脛腓骨，于超凈臺剪開骨端，PBS徹底沖洗骨髓腔直至發(fā)白，1500rpm離心10分鐘，棄上清，大鼠淋巴細(xì)胞分離液（Ficoll液）分離單個淋巴細(xì)胞，取單個淋巴細(xì)胞DMEM-LG培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在24小時內(nèi)觀察細(xì)胞貼壁情況。首次傳代后繼續(xù)觀察生長情況，繼而傳至第三代（P3）時，收取細(xì)胞并計數(shù)，進(jìn)行BMSCs的鑒定。 結(jié)果：在培養(yǎng)基中24H后BMSCs開始貼壁，呈紡錘絲及三角等形態(tài)生長聚集，并有集落樣生長。經(jīng)過幾次傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞純化，至P3代時細(xì)胞形態(tài)均一。表面抗原鑒定： BMSCs流式細(xì)胞儀檢測其抗原,高表達(dá)CD29、CD90、低表達(dá)CD45、CD34；誘導(dǎo)分化能力鑒定：BMSCs誘導(dǎo)分化為成骨和成脂細(xì)胞。 結(jié)論： 采用Ficoll密度梯度離心和體外細(xì)胞貼壁分離培養(yǎng)法相結(jié)合建立穩(wěn)定的SMSCs原代和傳代培養(yǎng)方法。 二、大鼠重癥胰腺炎模型的建立 目的：制作SD大鼠SAP動物模型，為研究胰腺損傷修復(fù)提供可靠的動物模型。 方法：健康成年雄性SD大鼠共60只，體重250-300g，隨機(jī)分為2組：對照組（N=25）；模型組（N=25）。對照組大鼠僅翻動胰腺，模型組分為6H、12H、24H、48H、72H5個時間點，每個時間點5只大鼠。余10只大鼠均制作SAP，觀察72H生存率。實驗大鼠禁食12H，自由飲水。濃度為5%�；悄懰徕c，行膽胰管逆行注射。在制模后各時間點檢測血清淀粉酶，胰腺和肺HE染色，并依據(jù)schmidt評分法評分。觀察兩組動物72H存活率。 結(jié)果：血清淀粉酶水平6H（6526.191454.79）、12H(7683.501806.41)、24H(9501.002111.76)、48H(4516.671715.32)、72H（38851682.67）均顯著高于對照組（P0.05）,胰腺組織schmidt評分均明顯高于對照組（P0.05）。兩組死亡率分別為0和70%。模型組病檢可見6H：小葉間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤。12H：胰腺細(xì)胞壞死。24H：胰腺組織大面積壞死，出血和炎性細(xì)胞明顯。48H：胰腺組織壞死，胰腺細(xì)胞壞死，腺泡結(jié)構(gòu)消失，大量炎性細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）浸潤；72H：大量腺細(xì)胞壞死，炎性細(xì)胞浸潤。 結(jié)論：采用5%牛黃膽酸鈉成功制作SD大鼠SAP模型。由于在24H時胰腺損傷最為嚴(yán)重，我們在24H時間點選擇BMSCs干預(yù)治療。 三、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)重癥急性胰腺炎后胰腺組織損傷修復(fù)的實驗研究 目的：明確同種異體BMSCs能否減輕SAP大鼠病情，能否對其胰腺損傷具有保護(hù)或修復(fù)作用。 方法：將制模成功的SAP模型大鼠隨機(jī)分為3組：對照組（N=5）；SAP+培養(yǎng)基組（N=5）：接受相應(yīng)體積的培養(yǎng)基。SAP+BMSCs組（N=5）：輸注BMSCs，約5-7106/只。干預(yù)后24H，提取血清測定AMY、ALT、CR、LDH和TNF-和INF-；獲取胰腺組織用于HE染色，病理評分和檢測IL-1、IL-6、 IL-10表達(dá)情況。另取培養(yǎng)基組和BMSCs組各10只大鼠觀察72H存活情況。 結(jié)果：三組AMY、ALT、CR、LDH兩兩比較，均有顯著差異；培養(yǎng)基組血清中TNF-和INF-與BMSCs組相比較，差異顯著；BMSCs移植組胰腺組織中TNF-和INF-表達(dá)低于培養(yǎng)基輸注組（P0.05）。BMSCs移植組大鼠的72小時生存率明顯高于培養(yǎng)基組。 結(jié)論： BMSCs的移植可以減輕SAP大鼠胰腺病理損傷，改善病情，提高生存率。 四、同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在重癥急性胰腺炎大鼠體內(nèi)的遷移 目的：利用Y染色體檢測，明確雄性大鼠BMSCs在雌性大鼠內(nèi)遷移，并初步探討B(tài)MSCs減輕SAP病情的機(jī)制。 方法：對照組：正常雌性大鼠3只，輸注（約1106/只）雄性BMSCs，實驗組：雌性24H制模后SAP大鼠3只，等體積BMSCs，輸注24H后提取胰腺、腎臟、肝臟、心臟和肺，檢測雄性Y染色體DNA。 結(jié)果：實驗組中胰腺組織雄性Sry陽性更為明顯。 結(jié)論：證實移植的同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，能夠定植在受損的部位，發(fā)揮其抗炎和修復(fù)作用。 全文小結(jié) 采用Ficoll密度梯度離心和貼壁分離法相結(jié)合可以分離、陪養(yǎng)、擴(kuò)增出較均一具有較強(qiáng)增殖分化能力的BMSCs；采用5%牛黃膽酸鈉成功誘導(dǎo)了與臨床高度相仿的SAP大鼠模型。BMSCs可以改善SAP病情，提高SAP大鼠的存活率。BMSCs定植到受損部位，發(fā)揮其抗炎和修復(fù)等作用。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 胰腺炎模型 移植 損傷修復(fù) 遷移
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R576
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-16
• 前言16-20
• 第一部分：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取、分離、培養(yǎng)和功能鑒定20-35
• 實驗材料21-23
• 實驗方法23-28
• 結(jié)果28-32
• 討論32-35
• 第二部分：大鼠重癥急性胰腺炎模型的建立35-52
• 實驗材料35-37
• 實驗方法37-42
• 結(jié)果42-47
• 討論47-52
• 第三部分：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)重癥急性胰腺炎后胰腺組織損傷修復(fù)的實驗研究52-68
• 實驗材料52-54
• 實驗方法54-60
• 結(jié)果60-65
• 討論65-68
• 第四部分：同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在重癥急性胰腺炎大鼠胰腺歸巢的研究68-75
• 實驗材料68-70
• 實驗方法70-72
• 結(jié)果72-73
• 討論73-75
• 結(jié)論75-76
• 參考資料76-86
• 致謝86-87
• 綜述87-94
• 參考文獻(xiàn)91-94
• 在讀期間發(fā)表的論文目錄94

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)重癥急性胰腺炎后胰腺組織損傷修復(fù)的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：260851