發(fā)布時(shí)間：2017-03-17 09:07

  本文關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)膽石、膽汁中的華支睪吸蟲(chóng)DNA，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：運(yùn)用基于Taqman探針?lè)ǖ膶?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)膽囊結(jié)石患者膽汁及膽石標(biāo)本中的華支睪吸蟲(chóng)DNA,并對(duì)其檢測(cè)效價(jià)進(jìn)行對(duì)比評(píng)估。 方法：隨機(jī)選取2011年8-9月份30例實(shí)施內(nèi)鏡取石保膽手術(shù)患者的膽汁及膽囊結(jié)石,首先分別對(duì)膽汁及膽石標(biāo)本進(jìn)行顯微鏡檢,然后提取其DNA。同時(shí)收集患者的相應(yīng)糞便標(biāo)本,進(jìn)行顯微鏡檢檢測(cè)。根據(jù)華支睪吸蟲(chóng)細(xì)胞色素C氧化酶亞基1基因,設(shè)計(jì)合成特異性的引物、TaqMan探針,建立華支睪吸蟲(chóng)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法,并做靈敏度及特異性分析,然后對(duì)膽汁及膽石標(biāo)本DNA進(jìn)行基因檢測(cè)。 結(jié)果：①該實(shí)驗(yàn)建立的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法對(duì)華支睪吸蟲(chóng)成蟲(chóng)DNA的最低檢測(cè)閾值可達(dá)0.1pg,且不與日本血吸蟲(chóng)、蛔蟲(chóng)、廣州圓線蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)產(chǎn)生陽(yáng)性擴(kuò)增反應(yīng)。②膽囊膽汁標(biāo)本中有14例鏡檢發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)卵(陽(yáng)性率46.7%),膽汁實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)結(jié)果與顯微鏡檢結(jié)果一致(符合率100%)；膽囊結(jié)石中16例鏡檢發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)卵(陽(yáng)性率53.3%),19例實(shí)時(shí)熒光PCR結(jié)果陽(yáng)性(陽(yáng)性率63.3%)；糞便標(biāo)本中9例鏡檢發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)卵(陽(yáng)性率30%)。 結(jié)論：①華支睪吸蟲(chóng)細(xì)胞色素C氧化酶亞基1基因可作為膽囊結(jié)石患者膽汁及膽石標(biāo)本中華支睪吸成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵的診斷基因。②實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)膽囊結(jié)石標(biāo)本中華支睪吸蟲(chóng)細(xì)胞色素C氧化酶亞基1基因是判定華支睪吸蟲(chóng)感染的有效手段。此方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高,對(duì)取石保膽患者的術(shù)后治療、預(yù)防復(fù)發(fā)以及提高膽囊結(jié)石合并華支睪吸蟲(chóng)感染的診斷方面具有重要的指導(dǎo)意義。
【關(guān)鍵詞】：膽囊結(jié)石病 華支睪吸蟲(chóng) 實(shí)時(shí)熒光-PCR 膽汁 膽囊 結(jié)石 線粒體基因
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R575.62
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-15
• 第一章 材料與方法15-20
• 1.1 材料15-16
• 1.1.1 研究對(duì)象15
• 1.1.2 標(biāo)本采集15
• 1.1.3 主要試劑和儀器15-16
• 1.2 方法16-20
• 1.2.1 各種臨床標(biāo)本的光學(xué)顯微鏡鏡檢16-17
• 1.2.2 DNA提取17-18
• 1.2.3 引物設(shè)計(jì)與合成18
• 1.2.4 實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)條件及體系的建立18
• 1.2.5 靈敏度及特異性分析18-19
• 1.2.6 數(shù)據(jù)處理19-20
• 第二章 結(jié)果與結(jié)論20-27
• 2.1 結(jié)果20-26
• 2.1.1 光學(xué)顯微鏡檢結(jié)果20-21
• 2.1.2 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)華支睪吸蟲(chóng)DNA的靈敏度分析21-22
• 2.1.3 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)華支睪吸蟲(chóng)DNA的特異性分析22-23
• 2.1.4 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)膽囊膽汁DNA結(jié)果23-24
• 2.1.5 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)膽囊結(jié)石DNA結(jié)果24-26
• 2.2 結(jié)論26-27
• 第三章 討論27-30
• 參考文獻(xiàn)30-35
• 綜述35-55
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 名詞縮略表55-56
• 致謝56-57
• 在校期間科研成果及發(fā)表論文57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)膽石、膽汁中的華支睪吸蟲(chóng)DNA，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：252658