本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒DNA X蛋白突變預(yù)測(cè)乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后生存率的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2015年

乙型肝炎病毒DNA X蛋白突變預(yù)測(cè)乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后生存率的研究

王文帥  

【摘要】：目的:構(gòu)成乙型肝炎病毒基因組的4個(gè)讀碼框是重疊開(kāi)放的,各自編碼一種蛋白。其中X基因重疊包繞啟動(dòng)子與增強(qiáng)子2,前核心區(qū)和核心區(qū)域的轉(zhuǎn)錄作用受以上兩個(gè)因子控制。由于乙型肝炎病毒聚合酶的校對(duì)缺陷,導(dǎo)致乙型肝炎病毒DNA容易發(fā)生突變。HBV基因型和病毒DNA載量均和乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌的發(fā)病相關(guān)聯(lián),除此之外,前S1、前S2、BCP和增強(qiáng)子2區(qū)域的基因突變也參與到乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌的風(fēng)險(xiǎn)的病例對(duì)照研究中。有研究表明這上述區(qū)域中的幾種基因突變與肝細(xì)胞癌的發(fā)展存在相關(guān)性。然而,目前只有少數(shù)針對(duì)乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者中上述基因突變的預(yù)后價(jià)值的研究,尤其針對(duì)HBX基因區(qū)域。通過(guò)測(cè)定肝組織樣本中乙型病毒性肝炎DNA,Yeh等人發(fā)現(xiàn)核心啟動(dòng)子組分A1752T/1764A的突變是肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。在當(dāng)前的研究中我們通過(guò)利用來(lái)自乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者肝癌組織樣本中的乙肝病毒DNA測(cè)定出乙型肝炎病毒X的基因序列,并用該序列來(lái)鑒定識(shí)別與術(shù)后生存相關(guān)的基因突變序列。方法:1研究對(duì)象及隨訪:選取2007-2009兩年間在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院肝膽外科行肝癌切除術(shù)的患者,通過(guò)影像學(xué)檢查、組織病理明確診斷為肝細(xì)胞肝癌。采集肝細(xì)胞癌患者術(shù)中切除的肝癌組織標(biāo)本,并準(zhǔn)確記錄所有患者的性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期、Child分級(jí)等臨床特征。通過(guò)門(mén)診復(fù)查、電話等方式隨訪肝癌患者術(shù)后的生存情況,隨訪時(shí)間截止到2014年12月。2基因組DNA提取、擴(kuò)增及測(cè)序:用DNA純化試劑盒提取肝癌組織標(biāo)本的基因組DNA,鑒定合格后,采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的片段,設(shè)計(jì)兩對(duì)引物對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增,引物分別為:HBV1F:5'-ATGCGTGGAACCTTTGTG-3',HBV1R:5'-TCGGTCGTTGACATTGCT-3';HBV2F:5'-CACCTCTGCACGTAGCAT-3',HBV2R:5'-TCCCATACAGAGCAGAG-3'。擴(kuò)增所得DNA產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)證實(shí)后送測(cè)序,每個(gè)標(biāo)本選用雙向重復(fù)測(cè)序。3統(tǒng)計(jì)分析:單因素分析中使用Kaplan-Meier的方法來(lái)生成生存曲線,曲線之間的比較所用的方法是對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)。多因素分析采用Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者的一般特征。本研究包括總共106例乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者,對(duì)這些患者每3個(gè)月進(jìn)行一次隨訪,隨訪時(shí)間3年。其間有7例患者失去聯(lián)系,失訪率低于20%,對(duì)分析研究無(wú)影響。將上述肝癌DNA從肝細(xì)胞癌組織中提取用于病毒學(xué)分析,平均乙肝病毒DNA水平是5×109±2.616×1010復(fù)制量/微克,其中最大復(fù)制量1.97×1011,最小復(fù)制量1.39×104。經(jīng)DNA序列測(cè)定,本研究發(fā)現(xiàn)在HBV X區(qū)域存在114個(gè)核苷酸突變。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)突變率最高的位點(diǎn)是1386核苷酸位點(diǎn),有74例患者存在此突變。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性分析,乙肝病毒DNA復(fù)制水平與基因突變數(shù)量并無(wú)相關(guān)性(P=0.146)。2本研究選擇攜帶B型或C型乙肝病毒基因型的共94例肝細(xì)胞肝癌術(shù)后患者進(jìn)行生存分析。選擇可能影響術(shù)后生存率的臨床特征(性別、年齡、腫瘤數(shù)目、Child分級(jí)、基因型、腫瘤大小、TNM分期、門(mén)脈瘤栓)進(jìn)行單因素分析。結(jié)果顯示,肝細(xì)胞癌術(shù)后男性與女性的3年生存率比較無(wú)差異(P=0.415);年齡分組以55歲為界限,比較≤55歲與55歲兩組的3年生存率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.324);肝細(xì)胞癌患者的腫瘤數(shù)目(單發(fā)與多發(fā),P=0.922)、Child分級(jí)(A與B,P=0.446)、TNM分期(Ⅰ期與Ⅱ期+ⅢA期+ⅢB期,P=0.227)與患者術(shù)后生存時(shí)間無(wú)關(guān)。然而,腫瘤大小(≤55與55歲,P=0.016)、門(mén)脈瘤栓(有與無(wú),P=0.001)與這些患者的術(shù)后生存率相關(guān)聯(lián)。經(jīng)過(guò)DNA測(cè)序,統(tǒng)計(jì)發(fā)生突變的核苷酸位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)高于5%突變率的突變位點(diǎn)總共有21個(gè),這些位點(diǎn)用于生存分析研究。在21個(gè)突變位點(diǎn)中,經(jīng)過(guò)秩檢驗(yàn)和Kaplan-Meier法分析,以下7個(gè)位點(diǎn)突變?cè)诮y(tǒng)計(jì)學(xué)重要水平上影響肝癌術(shù)后生存率:1383,1461,1485,1544,1613,1653和1762�；贑ox比例風(fēng)險(xiǎn)模型的多變量生存分析,結(jié)果表明門(mén)脈瘤栓是乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后生存率的獨(dú)立影響因素。在突變位點(diǎn)中,以下4個(gè)突變位點(diǎn)是乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后生存率的獨(dú)立影響因素:1461(相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)(RR)3.162,95%置信區(qū)間(CI)1.319-7.582,P=0.010),1485(RR 1.989,95%CI 1.054-3.751,P=0.034),1544(RR 2.602,95%CI 1.040-6.513,P=0.041),1653(RR 2.652,95%CI 1.184-5.938,P=0.018)。3病毒學(xué)參數(shù)與肝癌病人術(shù)后生存率的相關(guān)性病毒學(xué)因素中,患者的基因型、HBV DNA復(fù)制水平、E抗原狀態(tài)和突變數(shù)目通過(guò)Kaplan-Meier生存分析法進(jìn)行比較,結(jié)果顯示:HBV DNA復(fù)制水平(6.0E+08與≥6.0E+08,P=0.061)與肝癌患者術(shù)后生存率的關(guān)系在重要水平的臨界線上,而患者的基因型、E抗原狀態(tài)、突變數(shù)目與肝癌患者術(shù)后生存時(shí)間不相關(guān)。結(jié)論:我們研究的HBV X基因的4個(gè)核苷酸位點(diǎn)突變:1461、1485、1544、1653是乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后生存率的獨(dú)立影響因素。在臨床特征中,門(mén)脈瘤栓是乙肝相關(guān)性肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后生存率的獨(dú)立影響因素。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7;R512.62
【目錄】：

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本文編號(hào)：248629