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  本文關(guān)鍵詞：Tim-1信號(hào)通路在小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南昌大學(xué)》 2012年

Tim-1信號(hào)通路在小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的作用

王萍  

【摘要】：背景與目的: 炎癥性腸�。↖BD）的發(fā)病機(jī)制和病因非常復(fù)雜，我們的前期研究和文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)現(xiàn)TLR信號(hào)通路和Th免疫反應(yīng)的異常在其中起著十分重要的作用，并且這些異常在不同類型的IBD（CD和UC）中有所不同，但是其發(fā)生機(jī)制尚不明確。為何不同類型的IBD會(huì)出現(xiàn)不同的Th優(yōu)勢(shì)反應(yīng)，，它們的調(diào)控機(jī)制不清楚。Tim-1信號(hào)通路是最新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)Th免疫反應(yīng)的核心環(huán)節(jié)，并且與TLR信號(hào)通路有著密切的關(guān)系。然而Tim-1信號(hào)通路在IBD發(fā)生發(fā)展中的作用，及它與IBD的Th免疫反應(yīng)和TLR信號(hào)通路變化的關(guān)系國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。為此，本文研究不同類型的小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎（分別類似人類的UC和CD的動(dòng)物模型）Tim-1信號(hào)通路的變化及其與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）和TLR信號(hào)通路的關(guān)系，并以此為干預(yù)靶點(diǎn)，分別觀察Tim-1信號(hào)通路對(duì)不同類型小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的Treg細(xì)胞和TLR信號(hào)通路的影響，及其與疾病的的關(guān)系，從這一新的角度來(lái)探討IBD的發(fā)病機(jī)制，為IBD的防治提供新的靶點(diǎn)和方向。 方法: 1．實(shí)驗(yàn)分組 (1) Tim-1抗體未處理小鼠組；(2)Tim-1抗體預(yù)處理小鼠組； 每組內(nèi)再分為：①正常對(duì)照組；②D SS模型組；③TNBS模型組。 2．小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型的建立 (1)DSS誘導(dǎo)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型的建立：BALB/c小鼠自由飲用5%DSS溶液7天，建立小鼠急性結(jié)腸炎模型。 (2)TNBS誘導(dǎo)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型的建立：BALB/C小鼠禁食、不禁飲24小時(shí)后，乙醚麻醉，用3.5F導(dǎo)管從肛門插入腸道深約5.5cm處，灌注TNBS/50%乙醇溶液100μ1(含2mg TNBS的50%乙醇溶液)，之后將小鼠倒置60秒。從造模第一天開(kāi)始，每日觀察并記錄各組小鼠體重、大便性狀，7天后處死小鼠。 (3)小鼠Tim-1信號(hào)通路的干預(yù)：小鼠建模前12h，腹腔內(nèi)注射100μg抗-Fc抗體消除非特異性吸附后，再給予250μg抗-Tim-1Ab腹腔注射，對(duì)照小鼠給予同等劑量的IgG2a。 3.觀察以下各項(xiàng)指標(biāo)： (1)各組小鼠每天的體重變化、結(jié)腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI積分）； (2)肉眼觀察小鼠結(jié)腸大體形態(tài)改變，HE染色觀察小鼠結(jié)腸炎病理組織學(xué)損傷程度； (3)Western blot法檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中Foxp3、MyD88、SIGIRR、Tim-1蛋白的表達(dá)； (4)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中Foxp3、MyD88、SIGIRR、NF-κBp65蛋白的表達(dá)。結(jié)果： 1.各組小鼠體重變化及DAI積分 實(shí)驗(yàn)第5、7天，各模型組小鼠體重下降百分比均顯著高于相應(yīng)的對(duì)照組(P0.01)。在Tim-1抗體預(yù)處理組中，DSS組小鼠體重下降百分比顯著高于TNBS組(P0.01)。小鼠體重變化在Tim-1抗體未處理組和預(yù)處理組之間有差異，僅實(shí)驗(yàn)第7天DSS組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，其余組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 在實(shí)驗(yàn)第5、7天，無(wú)論是Tim-1抗體未處理組還是預(yù)處理組中，模型組小鼠DAI積分均顯著高于相應(yīng)對(duì)照組(P0.01)。Tim-1抗體預(yù)處理的各組小鼠DAI積分均高于未處理組，但都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 2.小鼠腸黏膜大體形態(tài)和結(jié)腸組織病理變化 (1)無(wú)論是Tim-1抗體未處理組還是預(yù)處理組，對(duì)照組小鼠結(jié)腸黏膜呈淡紅色、光滑完整，未見(jiàn)充血、水腫、糜爛、潰瘍，DSS組和TNBS組小鼠結(jié)腸黏膜可見(jiàn)充血、水腫、糜爛。 (2)無(wú)論是在Tim-1抗體未處理組還是預(yù)處理組，模型組小鼠的結(jié)腸炎癥程度、病變深度、隱窩破壞均顯著高于對(duì)照組(P0.01)。Tim-1抗體預(yù)處理的各組小鼠病理組織學(xué)損傷程度均高于未處理組，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 3.小鼠結(jié)腸組織中Foxp3的表達(dá) (1)免疫印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在Tim-1抗體未處理組中，模型組Foxp3蛋白的表達(dá)低于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。在Tim-1抗體預(yù)處理組中，對(duì)照組Foxp3蛋白的表達(dá)顯著高于兩個(gè)模型組（P0.01）。Foxp3蛋白表達(dá)在Tim-1抗體未處理組和預(yù)處理組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 (2)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是在Tim-1抗體未處理組還是預(yù)處理組中，對(duì)照組Foxp3陽(yáng)性炎細(xì)胞數(shù)顯著高于模型組（P0.01）。Tim-1抗體預(yù)處理的各模型組Foxp3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均低于未處理小鼠，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 4.小鼠結(jié)腸組織中SIGIRR的表達(dá) (1)免疫印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在Tim-1抗體未處理組中，對(duì)照組SIGIRR蛋白表達(dá)高于模型組（P0.01，0.05），DSS組高于TNBS組（P0.05）。在Tim-1抗體預(yù)處理組中，對(duì)照組顯著高于DSS組（P0.01）。SIGIRR蛋白的表達(dá)在Tim-1抗體未處理組和預(yù)處理組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 (2)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是在Tim-1抗體未處理組還是預(yù)處理組中，對(duì)照組SIGIRR蛋白的表達(dá)顯著高于模型組（P0.01）。SIGIRR蛋白的表達(dá)在Tim-1抗體未處理組和預(yù)處理組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 5.小鼠結(jié)腸組織中Myd88的表達(dá) (1)免疫印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是在Tim-1抗體未處理組還是預(yù)處理組中，對(duì)照組Myd88蛋白的表達(dá)顯著低于模型組（P0.01），DSS顯著組高于TNBS組（P0.01）。Myd88蛋白的表達(dá)在Tim-1抗體未處理組和預(yù)處理組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 (2)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是在Tim-1抗體未處理組還是預(yù)處理組中，對(duì)照組Myd88蛋白的表達(dá)顯著低于模型組（P0.01），在Tim-1抗體預(yù)處理組中，DSS組還顯著高于TNBS組（P0.01）。同時(shí)Tim-1抗體預(yù)處理的各模型組MyD88的表達(dá)高于未處理組，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 6.小鼠結(jié)腸組織中Tim-1的表達(dá) 免疫印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在Tim-1抗體未處理組中，對(duì)照組Tim-1蛋白的表達(dá)顯著高于模型組（P0.01）；在Tim-1抗體預(yù)處理組中，對(duì)照組Tim-1蛋白表達(dá)均高于模型組，對(duì)照組和TNBS組之間有顯著差異（P0.01），但對(duì)照組和DSS組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），DSS組顯著高于TNBS組（P0.05）。在對(duì)照組和DSS組中，Tim-1抗體未處理組的Tim-1蛋白表達(dá)均顯著低于預(yù)處理組（P0.01）。 7.小鼠結(jié)腸組織中NF-κB p65的表達(dá) 免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是在Tim-1抗體未處理組還是預(yù)處理組中，對(duì)照組NF-κB p65蛋白表達(dá)顯著低于兩個(gè)模型組（P0.01）；在Tim-1抗體預(yù)處理組中，DSS組的表達(dá)還顯著高于TNBS組（P0.05）。Tim-1抗體預(yù)處理的各模型組NF-κB p65表達(dá)均高于未處理組，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。結(jié)論： 1.本研究成功的建立了DSS及TNBS誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎小鼠模型，并且Tim-1抗體預(yù)處理可加劇小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的腸黏膜病變，提示了Tim-1信號(hào)通路參與了小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的發(fā)病。 2. Tim-1抗體預(yù)處理后小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎腸黏膜中Foxp3蛋白表達(dá)降低，提示Tim-1抗體可能通過(guò)調(diào)控Treg細(xì)胞反應(yīng)來(lái)影響小鼠結(jié)腸炎的發(fā)生。 3. Tim-1抗體預(yù)處理后小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎腸黏膜中NF-κB p65、MyD88蛋白表達(dá)上升，提示Tim-1抗體可能通過(guò)激活TLRs/NF-κB信號(hào)通路來(lái)影響小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的發(fā)生。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R574.62
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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3 蔣青偉;錢家鳴;李月;朱峰;;黏膜保護(hù)劑對(duì)葡聚糖硫酸酯鈉誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎腸道黏膜的保護(hù)作用及其機(jī)制初探[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

4 唐志鵬;張亞利;;清腸栓對(duì)三硝基苯磺酸誘導(dǎo)結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜地址素細(xì)胞黏附分子-1表達(dá)的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合第十九次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議暨國(guó)家級(jí)中西醫(yī)結(jié)合消化疾病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

5 劉輝;潘衛(wèi)三;聶淑芳;楊星鋼;顏廷旭;;布地奈德結(jié)腸定位片的結(jié)腸炎大鼠藥效學(xué)評(píng)價(jià)[A];2009年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國(guó)藥師周論文集[C];2009年

6 陳建章;王小平;范伯曾;劉良福;;錫類散結(jié)腸溶膠囊對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎治療作用研究[A];第二十三屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨消化疾病診治進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

7 陳建章;王小平;范伯曾;劉良福;;錫類散結(jié)腸溶膠囊對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎治療作用研究[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合發(fā)展戰(zhàn)略研討會(huì)暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)成立三十周年紀(jì)念會(huì)論文匯編[C];2011年

8 王旭丹;袁學(xué)勤;周勇;徐秋萍;邱澤計(jì);;香連方對(duì)TNBS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的影響[A];全國(guó)中醫(yī)藥創(chuàng)新與發(fā)展研討會(huì)專輯[C];2005年

9 王旭丹;袁學(xué)勤;周勇;邱澤計(jì);;四神方對(duì)TNBS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的作用及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制[A];第三屆全國(guó)中醫(yī)藥免疫學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

10 劉輝;潘衛(wèi)三;聶淑芳;楊星鋼;顏廷旭;;布地奈德結(jié)腸定位片的結(jié)腸炎大鼠藥效學(xué)評(píng)價(jià)[A];2010年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國(guó)藥師周論文集[C];2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 葉月芳;腸粘膜淋巴細(xì)胞對(duì)葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的作用研究[D];浙江大學(xué);2010年

2 郝曉健;羧胺三唑?qū)π∈髮?shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的療效評(píng)價(jià)與作用機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

3 唐岸柳;非可控性結(jié)腸炎癌變過(guò)程的轉(zhuǎn)錄組動(dòng)態(tài)變化及其分子機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

4 陳焰;大鼠化學(xué)誘導(dǎo)性結(jié)腸炎模型的建立及云母干預(yù)治療機(jī)制探討[D];浙江大學(xué);2008年

5 袁學(xué)勤;腸泰、四神及香連方防治小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的效用機(jī)理研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2005年

6 袁婷鈺;羧胺三唑?qū)π∈髮?shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎預(yù)防作用的評(píng)價(jià)及對(duì)非特異性免疫反應(yīng)影響的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

7 胡仁偉;Th細(xì)胞、B7分子在DSS小鼠結(jié)腸炎發(fā)病中的作用研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

8 陳曦;Toll樣受體4與β防御素2在結(jié)腸炎上皮表達(dá)及調(diào)控的研究[D];四川大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 姚安龍;小檗堿對(duì)結(jié)腸炎小鼠模型的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響的機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2011年

2 盛夢(mèng)娟;健脾化食口服液治療幼年大鼠脾虛型便秘性結(jié)腸炎的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2007年

3 紀(jì)桂賢;鹽酸小檗堿對(duì)DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的療效觀察及機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

4 楊建美;Tfh細(xì)胞調(diào)節(jié)自身抗體形成在免疫復(fù)合物誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎發(fā)病中的作用[D];華中科技大學(xué);2013年

5 舒德忠;鹽酸小檗堿對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠結(jié)腸炎的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

6 顧秋平;經(jīng)IL-10基因轉(zhuǎn)化的大腸桿菌治療小鼠結(jié)腸炎的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2011年

7 王顯飛;低分子量肝素對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠結(jié)腸炎的治療作用及機(jī)理初探[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

8 許欣;潰克靈及其改方對(duì)結(jié)腸炎模型大鼠腸道運(yùn)動(dòng)和胃腸激素的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

9 曹霞;中藥潰克靈對(duì)TNBS結(jié)腸炎模型大鼠TGF-β1表達(dá)的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

10 王萍;Tim-1信號(hào)通路在小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的作用[D];南昌大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：Tim-1信號(hào)通路在小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：211651