本文關(guān)鍵詞：HBV相關(guān)疾病遺傳易感性研究及功能驗證，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》 2012年

HBV相關(guān)疾病遺傳易感性研究及功能驗證

忻振慧  

【摘要】：研究背景 在世界范圍內(nèi)超過3.5億人是慢性乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)攜帶者。部分慢性乙肝患者(chronic hepatitis B patients, CHB)會進(jìn)一步發(fā)展成終末期肝病,包括肝硬化和肝癌。肝硬化(liver cirrhosis, LC)是慢性肝病在發(fā)展過程中持續(xù)性的肝損傷-愈合反應(yīng)導(dǎo)致而成的。肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一。研究表明,病毒因素、環(huán)境因素以及宿主的遺傳因素相互作用,影響HBV感染的結(jié)局。其中,宿主細(xì)胞內(nèi)一些重要信號通路的異常已成為疾病發(fā)生機(jī)制的研究熱點。 轉(zhuǎn)換生長因子β(transforming growth factor beta, TGF-B)信號通路可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生物學(xué)過程,如細(xì)胞增殖、分化、凋亡、纖維化、腫瘤發(fā)生、血管生成以及免疫應(yīng)答等。TGF-β1及其三個受體,即轉(zhuǎn)化生長因子β受體I(TβRI),受體Ⅱ(TBRII),受體Ⅲ(TBRIII)在慢性乙肝發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮著重要的作用。此外,血管內(nèi)皮生長因子A(vascular endothelial growth factor A, VEGFA)可在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生,并且可以增加血管通透性,因此它在腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移過程中扮演著至關(guān)重要的角色。本研究采用病例-對照的研究方法,以TGF-β信號通路上的4個核心家族成員,即TGF-β1、TfiRⅠ、TβRIⅡ、TβRⅢ為候選基因,以探討HBV相關(guān)疾病遺傳易感性。并通過對本實驗室已篩出的肝癌易感基因VEGFA,進(jìn)行進(jìn)一步的功能驗證,將有助于尋找更為合適而有效的治療靶點。 研究方法 以347例肝癌患者、243例肝硬化患者、708例慢肝患者和881例未感染過HBV且乙肝五項全陰的人群為研究對象,采用病例-對照的研究方法,利用PCR-RFLP/TaqMan的檢測方法分析TGF-β1及其三個受體基因潛在功能區(qū)域上的16個單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)位點(TGF-β1基因上的rs2317130,rs4803457, rs56719111, rs1800469和□rs1800470; TβRI基因上的rs334348,rs334349,rs3739798和rs1590；TβRⅡ基因上的rs2228048；TβRⅢ基因上的rs1805109,rs1805110,rs2810904,rs1805112,rs284878和rs1804506)與HBV相關(guān)疾病遺傳易感性的關(guān)聯(lián)性。并通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒�、凝膠遷移率實驗(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)以及實時熒光定量PCR實驗對肝癌易感基因VEGFA啟動子區(qū)SNPs影響基因轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行進(jìn)一步的功能驗證。 研究結(jié)果 1.分別進(jìn)行三組病例-對照研究,分析TGF-β1及其3個受體基因多態(tài)性與HBV相關(guān)疾病的關(guān)聯(lián)性。 1)以CHB為病例,未感染過HBV且乙肝五項全陰的人群為對照進(jìn)行研究 單位點分析未發(fā)現(xiàn)與CHB易感性相關(guān)聯(lián)的SNPs。 2)以LC為病例,未感染過HBV且乙肝五項全陰的人群為對照進(jìn)行研究 單位點分析未發(fā)現(xiàn)與LC易感性相關(guān)聯(lián)的SNPs。 3)以HCC為病例,未感染過HBV且乙肝五項全陰的人群為對照進(jìn)行研究 單位點分析結(jié)果顯示,TβRⅢ基因上的rs1805110的T等位基因頻率在病例組中顯著高于對照組,二者呈現(xiàn)顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.034)。 性別分層后分析結(jié)果顯示,在男性中,rs1805110位點的T等位基因頻率在病例組與對照組的統(tǒng)計學(xué)差異更為顯著(P=0.005),但這種統(tǒng)計學(xué)差異在女性中不存在。進(jìn)一步進(jìn)行單倍型分析結(jié)果顯示,TβRⅢ基因的5個SNPs位點組成的單倍型C-C-G-C-A在病例組中的分布頻率顯著低于對照組(P=0.001),而單倍型T-C-G-C-A的分布頻率在病例組中顯著高于對照組(P=0.036)。 2.HCC發(fā)生的易感基因VEGFA的功能驗證 1) VEGFA基因啟動子區(qū)多態(tài)性位點對啟動子活性的影響 已成功構(gòu)建的4個表達(dá)質(zhì)粒pGL3-VEGFA-啟動子區(qū)域(-1661～+279bp),在瞬時轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后,雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測結(jié)果顯示,rs833061C-rsl570360A質(zhì)粒的表達(dá)活性是rs833061T-rs1570360G表達(dá)活性的2.59倍,二者呈現(xiàn)顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.00005)。 2) VEGFA基因18bp插入等位基因與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點 EMSA實驗結(jié)果表明,18bp插入等位基因產(chǎn)生一個與Spl轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的位點。 3) VEGFA的mRNA表達(dá)水平 實時熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示,HCC患者VEGFA的mRNA表達(dá)水平是CHB患者的5.16倍,是乙肝病毒表面抗原(HBsAg)為陰性的健康人群的6.95倍,在三者間呈現(xiàn)顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=1.15e-10)。 研究結(jié)論 1.HBV相關(guān)疾病遺傳易感性的研究結(jié)果提示,在男性中,位于TβRⅢ基因上的rs1805110-T等位基因是HBV相關(guān)肝癌發(fā)生的危險因素。 2.對肝癌易感基因VEGFA功能驗證結(jié)果提示,EGFA啟動子區(qū)的SNPs可能會通過改變啟動子的活性來促進(jìn)肝癌的發(fā)生。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R735.7;R512.62
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻(xiàn)

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【共引文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉銘;中國北方人群前列腺癌風(fēng)險位點識別和GPRC6A基因功能的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田筱青;房靜遠(yuǎn);;乙型肝炎病毒感染與DNA甲基化[J];國際消化病雜志;2006年03期

2 趙紅勝;HBV、HCV感染與肝癌形成相關(guān)性探討[J];河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2000年02期

3 陸東東,張錫然;啟東肝癌高發(fā)區(qū)肝癌患者血清中p53突變研究(英文)[J];陜西腫瘤醫(yī)學(xué);2003年01期

4 薛常鎬,針文玲,陳鐵暉,孫昌盛,鄭英杰,康天嘗,鄭君玉,洪作藝,陳曉鷺;肝癌高發(fā)區(qū)HBV感染與肝癌關(guān)系的流行病學(xué)研究[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1998年03期

5 張學(xué)軍;;HapMap計劃掀起人類研究復(fù)雜疾病易感基因的浪潮[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年03期

6 馬麗芳;周琦;徐建業(yè);李少林;;mdr1C3435T基因多態(tài)性與卵巢癌遺傳易感性關(guān)系研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年12期

7 肖衛(wèi)國,何娟,張麗君,李莉,陳洋,姜奕;B1細(xì)胞異常增殖易感基因染色體定位的研究[J];中華內(nèi)科雜志;2003年01期

8 李學(xué)信,陸召軍;乙型肝炎危險因素多因素分析[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1991年03期

9 吳秀淦,宋光放,劉紹春,張韻鳳,陳永樂,高衛(wèi)華,馬為民,張永東,王火生;慢性重型肝炎的病理變化和病因發(fā)病機(jī)制研究[J];臨床肝膽病雜志;1996年02期

10 張利寧,孫汶生,曹英林,宋靜;用地高辛標(biāo)記的HBV DNA探針檢測肝炎和肝細(xì)胞癌組織中的HBV存在狀態(tài)[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息;1996年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周鋼橋;;HBV相關(guān)肝病易感基因的鑒定及其應(yīng)用研究[A];2012年中國青年遺傳學(xué)家論壇會議文集[C];2012年

2 曹瑋;李太生;;慢性乙型肝炎病毒感染者中HBV核心蛋白特異性CD8+T淋巴細(xì)胞應(yīng)答[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

3 過建春;施軍平;荀運(yùn)浩;劉長靈;石偉珍;;中醫(yī)體質(zhì)和HBV感染結(jié)局相關(guān)[A];全國第3屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議暨中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會傳染病專業(yè)委員會第2屆委員會議論文匯編[C];2010年

4 蘇立穩(wěn);劉宇;;恩替卡韋聯(lián)合中藥復(fù)方治療HBV復(fù)制的失代償期肝硬化臨床研究[A];全國第3屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議暨中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會傳染病專業(yè)委員會第2屆委員會議論文匯編[C];2010年

5 楊麗莎;羅偉生;覃理靈;何武;周勁剛;王釗;吳淋玲;黃亞琴;;HBV感染不同免疫狀態(tài)患者血清中可溶性細(xì)胞間粘附分子-1水平的變化[A];第四屆中醫(yī)藥繼續(xù)教育高峰論壇暨中華中醫(yī)藥學(xué)會繼續(xù)教育分會換屆選舉會議論文集[C];2011年

6 楊帆;朱煥玲;李建軍;何川;季杰;黃杰;崔旭;向兵;;非霍奇金淋巴瘤化療相關(guān)性HBV再激活所致肝損害防治的回顧性分析[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

7 李桂秋;路娟;;HBV變異株全基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

8 劉壽榮;武靜;翁慧斌;劉雁;曾艷梅;張素英;陳蓉;張忠東;孟婭妮;;HBV陽性孕婦DC-SIGN/DC-SIGNR基因多態(tài)性與宮內(nèi)感染的關(guān)系研究[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會感染科醫(yī)師大會暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

9 朱桂婷;施軍平;荀運(yùn)浩;黃謙;向晶;;飲酒在HBV相關(guān)性肝細(xì)胞癌的作用[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會感染科醫(yī)師大會暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

10 劉文蘭;張炎;車念聰;唐佐青;油紅捷;;HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的舌色研究[A];全國第十二次中醫(yī)診斷學(xué)術(shù)年會論文集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 解放軍302醫(yī)院 劉士敬;[N];健康時報;2010年

2 通訊員 肖鑫　記者 陳青;[N];文匯報;2011年

3 戴欣　李伯安 記者 唐先武;[N];科技日報;2011年

4 張鵬　記者 唐先武;[N];科技日報;2011年

5 中國科學(xué)院院士、上海東方肝膽外科醫(yī)院教授 吳孟超;[N];健康報;2011年

6 吳志軍　郝成濤;[N];中國醫(yī)藥報;2010年

7 記者 張晶;[N];科技日報;2011年

8 指導(dǎo)專家 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院感染病科教授 張大志 記者 蘇云麗;[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2009年

9 記者 徐琪忠　通訊員 肖鑫;[N];中國醫(yī)藥報;2011年

10 新欣;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王鳳梅;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在HBV感染的肝癌中的免疫抑制作用初探[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

2 張洪新;肝癌生物標(biāo)本庫的建立及應(yīng)用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 李園;李佩文教授治療肝癌的臨床經(jīng)驗整理研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2012年

4 朱政;肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)志物的鑒定與特性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

5 瞿利帥;乙型肝炎病毒感染預(yù)后的危險因素研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

6 任傳路;轉(zhuǎn)錄因子GATA4在小鼠肝臟發(fā)育和肝癌發(fā)生中的作用及相關(guān)機(jī)制探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 趙瑩珺;乙酰膽堿酯酶在肝癌中的功能及其分子作用機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

8 宋志;抑癌基因Tg737在肝癌發(fā)病機(jī)制中作用的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 李長煜;肝癌化療栓塞術(shù)前后血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 唐喆;索拉菲尼聯(lián)合射頻消融治療肝癌的臨床和實驗研究[D];浙江大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何平;廣西肝癌高發(fā)區(qū)人群HBV復(fù)制水平、基因型及亞型與肝癌家族聚集性關(guān)系的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

2 黃文鋒;HJURP基因多態(tài)性與HBV相關(guān)性肝癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 忻振慧;HBV相關(guān)疾病遺傳易感性研究及功能驗證[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

4 韓敏輝;NF-κB，Gadd45γ蛋白在肝癌中的差異表達(dá)及其意義[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 蔡覓;胰島素樣生長因子通路基因與HBV相關(guān)肝癌的遺傳關(guān)聯(lián)研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2012年

6 姚家久;養(yǎng)陰抗毒法防治肝癌射頻治療術(shù)后反應(yīng)的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 姚家久;養(yǎng)陰抗毒法防治肝癌射頻治療術(shù)后反應(yīng)的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 劉忠山;咖啡因提高了同位移植LM3肝癌的放療敏感性[D];吉林大學(xué);2010年

9 吳二斌;TKTL1、TUM2-PK、PFKFB3在肝癌中的表達(dá)及臨床意義[D];蘇州大學(xué);2010年

10 楊芬;肝癌HepG2細(xì)胞IER5基因高表達(dá)細(xì)胞系的建立及其輻射效應(yīng)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：HBV相關(guān)疾病遺傳易感性研究及功能驗證，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：210123