本文選題：水飛薊賓 + NLRP3炎癥小體　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種病因尚不完全清楚的慢性腸道非特異性炎癥性疾病,主要包括克羅恩病(Crohn`s disease,CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC),其具有治療困難、易復(fù)發(fā)及易癌變等特點(diǎn),給患者帶來長期反復(fù)的巨大痛苦。近年來其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)逐漸上升,并且盡管隨著治療及預(yù)防措施的不斷發(fā)展,仍有許多患者需要接受手術(shù)治療,給人類健康帶來巨大的威脅。近年來研究發(fā)現(xiàn),水飛薊賓(silibinin,SB)作為一種植物提取物,具有抗炎抗癌的作用,但其對(duì)結(jié)腸炎的作用及機(jī)制尚未完全闡明。NLRP3炎癥小體是一種由NLRP3、含有CARD結(jié)構(gòu)域的凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(apoptosis associated speck-like protein containing CARD,ASC)和caspase-1共同組成的分子量大于700k D的多蛋白復(fù)合物。NLRP3炎癥小體可被多種因素激活,如微生物核糖核酸(RNA)、ATP、顆粒物或細(xì)胞成孔毒素等,活化的NLRP3炎癥小體可使無活性的casepase-1前體活化,促使pro-白細(xì)胞介素-1β(pro-interleukin-1β,proIL-1β)、pro-IL-18等細(xì)胞因子前體成熟,從而促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放,在炎癥感染的固有免疫應(yīng)答中起重要作用。本研究以葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium salt,DSS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型為研究對(duì)象,旨在探討植物性藥物水飛薊賓對(duì)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的作用及其對(duì)NLRP3炎癥小體的調(diào)節(jié)作用,為發(fā)現(xiàn)IBD的預(yù)防及治療的新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法本研究選用48只SPF級(jí)8周齡的C57BL/6小鼠,隨機(jī)分為三組:空白對(duì)照組8只,DSS組20只,水飛薊賓治療組(DSS+SB組)20只。所有小鼠先給予正常飲食飲水7天,以便其適應(yīng)環(huán)境改變,隨后7天空白對(duì)照組仍給予正常飲食飲水;DSS組給予2%DSS飲水及0.2ml/只/天溶劑(蒸餾水+0.5%羧甲基纖維素)灌胃;DSS+SB組給予2%DSS飲水及750mg/Kg水飛薊賓灌胃,每天灌胃一次,實(shí)驗(yàn)時(shí)長共14天,第14天夜間禁食禁水,于第二天處死。從第7天開始,每天測量小鼠體重,觀察小鼠排便情況和糞便性狀,并留取糞便樣本,利用疾病活動(dòng)指數(shù)(Disease activity index,DAI)評(píng)分評(píng)價(jià)小鼠炎癥活動(dòng)變化。小鼠處死后,取出結(jié)腸組織并沖洗干凈,測量結(jié)腸長度。HE染色觀察結(jié)腸組織炎癥表現(xiàn)并用組織學(xué)損傷評(píng)分評(píng)價(jià)結(jié)腸炎癥損傷程度變化。利用Realtime-PCR技術(shù)檢測小鼠腸道IL-1β、IL-6等促炎因子的表達(dá)。應(yīng)用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖(fluoresceinisothiocyanate-conjuagted dextran,FITC-D)檢測小鼠腸道通透性,利用Realtime-PCR技術(shù)檢測小鼠腸道緊密連接蛋白(claudin-1等)、杯狀細(xì)胞分泌物粘蛋白MUC2等的基因表達(dá),以評(píng)價(jià)小鼠腸道黏膜屏障功能的變化。采用免疫熒光染色的方法檢測小鼠結(jié)腸組織總巨噬細(xì)胞表面分子F4/80的表達(dá),采用Realtime-PCR檢測炎癥小體組成部分NLRP3、ASC和caspase-1的基因表達(dá)情況,利用Western blot技術(shù)檢測炎癥小體組成部分NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表達(dá)情況,以評(píng)價(jià)水飛薊賓對(duì)NLRP3炎癥小體活動(dòng)的影響。結(jié)果1.DSS給藥期間,大多數(shù)小鼠耐受尚可,給藥結(jié)束時(shí)DSS組小鼠死亡5只,DSS+SB組小鼠死亡4只。兩組小鼠體重均逐漸下降,而DSS+SB組下降趨勢小于DSS組,并于第5天兩組差異出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(17.65±0.16g vs 18.36±0.26g,P0.05),隨后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.水飛薊賓有效緩解結(jié)腸炎引起的結(jié)腸長度的縮短[(4.78±0.14)vs(5.34±0.14)cm,P0.01],降低DAI評(píng)分,并于第5天[(8.74±0.45)vs(6.73±0.72),P0.05]、第6天[(9.39±0.32)vs(7.90±0.59),P0.05]、第7天[(10.44±0.34)vs(8.53±0.56),P0.01]時(shí),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HE染色及組織學(xué)損傷評(píng)分也顯示水飛薊賓可緩解DSS引起的炎癥反應(yīng),評(píng)分差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(11.40±0.31)vs(7.31±0.50),P0.001]。3.與DSS組相比,DSS+SB組小鼠血清中FITC-D的濃度明顯較低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(4.28±0.55)vs(2.26±0.22),P0.01],表明水飛薊賓可改善結(jié)腸炎時(shí)的腸道通透性。同時(shí),DSS+SB組小鼠結(jié)腸組織中claudin-1,occludin和MUC2表達(dá)均增多,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明水飛薊賓可改善結(jié)腸炎時(shí)的腸道屏障功能。4.與DSS組相比,DSS+SB組結(jié)腸組織中IL-1β和IL-6表達(dá)均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;免疫熒光染色顯示DSS+SB組總巨噬細(xì)胞表面分子F4/80較DSS組明顯減少,表明水飛薊賓能減少巨噬細(xì)胞浸潤,并有效緩解結(jié)腸炎癥反應(yīng)。5.Realtime-PCR顯示DSS+SB組炎癥小體組分NLRP3、ASC和caspase-1的表達(dá)較DSS組降低,且Western blot顯示DSS+SB組NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表達(dá)量也低于DSS組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論水飛薊賓可通過抑制NLRP3炎癥小體的活化降低炎癥因子產(chǎn)生及釋放,保護(hù)腸道黏膜屏障功能,從而對(duì)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎發(fā)揮保護(hù)作用。
[Abstract]:The inflammatory bowel disease ( IBD ) is a kind of chronic intestinal non - specific inflammatory disease , including Crohn ' s disease ( CD ) and ulcerative colitis ( UC ) . The expression of IL - 1尾 , ASC and caspase - 1 in colonic tissues of mice was assessed by immunofluorescence staining . In the DSS + SB group , the levels of IL - 1尾 and IL - 6 in DSS + SB group were significantly lower than those in DSS group .
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R574

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2096950