本文關(guān)鍵詞：小劑量辣椒素對(duì)大鼠內(nèi)臟機(jī)械及化學(xué)刺激敏感性的影響及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《四川醫(yī)科大學(xué)》 2015年

小劑量辣椒素對(duì)大鼠內(nèi)臟機(jī)械及化學(xué)刺激敏感性的影響及機(jī)制研究

胡容  

【摘要】：目的:通過(guò)檢測(cè)大鼠在不同時(shí)期攝食小劑量辣椒素(capsaicin,CAP),對(duì)內(nèi)臟機(jī)械和化學(xué)刺激的敏感性,胃十二指腸組織內(nèi)辣椒素受體(transient receptor potential vanilloid,TRPV1)的表達(dá),胃、十二指腸粘膜屏障的變化,探討大鼠攝食小劑量辣椒素對(duì)內(nèi)臟機(jī)械及化學(xué)刺激敏感性的影響及機(jī)制。方法:(1)CAP飼料的配制:50%CAP 2mg,加入到普通飼料粉100g,混勻,即得到CAP濃度為10mg/Kg的CAP飼料。(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:SD大鼠160只,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(A組)與對(duì)照組(B組),每組80只,雌雄各半。A組攝食CAP飼料,CAP 1mg/kg/d,B組攝食普通飼料。為了探索CAP在不同時(shí)期對(duì)大鼠內(nèi)臟機(jī)械和化學(xué)刺激的影響,實(shí)驗(yàn)分為5期,按相應(yīng)時(shí)期,A組與B組各分為5個(gè)小組,每組16只,雌雄各半。具體分期及時(shí)間:Ⅰ期:1天,實(shí)驗(yàn)組(A1組):攝食CAP飼料,完成后給予普通飼料,自由進(jìn)水;對(duì)照組(B1組):自由攝食進(jìn)水;Ⅱ期:3天,實(shí)驗(yàn)組(A2組):攝食CAP飼料,完成后給予普通飼料,自由進(jìn)水;對(duì)照組(B2組):自由攝食進(jìn)水;Ⅲ期,1周:實(shí)驗(yàn)組(A3組):攝食CAP飼料,完成后給予普通飼料自由進(jìn)水;對(duì)照組(B3組):自由攝食進(jìn)水;Ⅳ期:2周,實(shí)驗(yàn)組(A4組):攝食CAP飼料,完成后給予普通飼料,自由進(jìn)水;對(duì)照組(B4組):自由攝食進(jìn)水。Ⅴ期:4周,實(shí)驗(yàn)組(A5組):攝食CAP飼料,完成后給予普通飼料,自由進(jìn)水;對(duì)照組(B5組):自由攝食進(jìn)水。(3)內(nèi)臟機(jī)械刺激敏感性測(cè)定:采用直腸擴(kuò)張?jiān)囼?yàn)(rectal distention test,RDT):誘導(dǎo)大鼠排盡直腸內(nèi)糞便,石蠟油涂抹肛周,10FR導(dǎo)尿管氣囊端緩慢置入大鼠直腸,膠布固定于尾部,用5ml空針緩慢向氣囊內(nèi)勻速注氣,邊注氣邊觀察大鼠腹部撤離反射(abdominal withdrawal reflex,AWR),直到大鼠行為達(dá)到AWR評(píng)分的4分,結(jié)束注氣。(4)內(nèi)臟化學(xué)刺激敏感性測(cè)定:采用腹腔注射新斯的明的方法:用1ml注射器向腹腔內(nèi)注射濃度為60ug/ml新斯的明注射液,劑量為120ug/Kg,觀察大鼠AWR行為,記錄大鼠出現(xiàn)AWR評(píng)分3-4分的行為的開始時(shí)間及持續(xù)時(shí)間。(5)檢測(cè)指標(biāo)及方法:①實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大鼠一般情況。②機(jī)械刺激的氣囊擴(kuò)張?bào)w積,各組大鼠行RDT,直到大鼠行為達(dá)到AWR評(píng)分的4分。③腹腔注射新斯的明大鼠出現(xiàn)AWR評(píng)分3-4分行為的開始時(shí)間及持續(xù)時(shí)間。④胃、十二指腸組織內(nèi)TRPV1的表達(dá)情況:用免疫組化方法進(jìn)行TRPV1的檢測(cè)。⑤胃、十二指腸粘膜屏障的檢測(cè):各組大鼠脫臼處死,沿胃大彎剪開胃及十二指腸后用生理鹽水將胃內(nèi)容物沖洗干凈,肉眼觀察粘膜形態(tài),采用Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評(píng)分評(píng)定胃、十二指腸粘膜損傷情況;并取距幽門約1cm處胃大彎側(cè)組織3塊,十二指腸組織3塊,送病理組織學(xué)檢查,光鏡下對(duì)HE染色后胃、十二指腸組織進(jìn)行觀察。結(jié)果:(1)大鼠一般情況:實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠均精神狀態(tài)良好,行動(dòng)靈活,食欲佳,皮毛光滑,大小便正常,體重增加。(2)機(jī)械刺激的氣囊擴(kuò)張?bào)w積(ml):Ⅰ期、Ⅱ期實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間均無(wú)顯著差異(P0.05);但A2組中雄性大鼠的氣囊擴(kuò)張?bào)w積(2.24±0.13)顯著小于B2組中雄性大鼠(2.56±0.21)(P0.05)。Ⅲ期實(shí)驗(yàn)組氣囊擴(kuò)張?bào)w積(1.91±0.33)顯著小于對(duì)照組(2.30±0.30)(P0.05),且實(shí)驗(yàn)組中雌性氣囊擴(kuò)張?bào)w積顯著小于雄性(1.68±0.10 vs 2.15±0.30,P0.05)。Ⅳ期實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Ⅴ期實(shí)驗(yàn)組氣囊擴(kuò)張?bào)w積(2.85±0.33)顯著大于對(duì)照組(2.40±0.53)(P0.05)。(3)腹腔注射新斯的明大鼠出現(xiàn)AWR評(píng)分3-4分行為的開始時(shí)間及持續(xù)時(shí)間:①開始時(shí)間(min):Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間均無(wú)顯著差異(P0.05);Ⅴ期實(shí)驗(yàn)組AWR評(píng)分達(dá)到3-4分的開始時(shí)間較對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(5.91±1.74 vs 4.49±1.53P0.05)。②持續(xù)時(shí)間(min):Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅳ期、Ⅴ期實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間無(wú)顯著差異(P0.05);Ⅲ期實(shí)驗(yàn)組AWR評(píng)分達(dá)到3-4分的持續(xù)時(shí)間較對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(6.30±3.16 vs 3.13±1.16 P0.05)。(4)胃、十二指腸TRPV1的表達(dá)結(jié)果:①胃黏膜TRPV1光密度(PI)值:Ⅰ期實(shí)驗(yàn)組大鼠TRPV1的PI值(1.97±0.46)顯著高于對(duì)照組(1.60±0.25)(P0.05),Ⅱ期實(shí)驗(yàn)組大鼠TRPV1的PI值(2.14±0.54)顯著高于對(duì)照組(1.63±0.51)(P0.05),Ⅲ期實(shí)驗(yàn)組大鼠TRPV1的PI值(2.16±0.44)顯著高于對(duì)照組(1.65±0.43)(P0.05);Ⅳ期、Ⅴ期實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。②十二指腸黏膜TRPV1光密度(PI)值:Ⅰ期實(shí)驗(yàn)組大鼠TRPV1的PI值(1.87±0.38)顯著高于對(duì)照組(1.60±0.25)(P0.05)、Ⅱ期實(shí)驗(yàn)組大鼠TRPV1的PI值(1.80±0.44)顯著高于對(duì)照組(1.61±0.31)(P0.05),Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)胃、十二指腸粘膜屏障的檢測(cè):肉眼觀察:所有實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠胃、十二指腸粘膜光滑,無(wú)明顯異常。病理學(xué)觀察:所有標(biāo)本粘膜完整無(wú)損,絨毛排列整齊,組織結(jié)構(gòu)完整,無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論:1.大鼠攝入小劑量CAP連續(xù)1周對(duì)內(nèi)臟機(jī)械刺激的敏感性顯著增加,連續(xù)2周敏感性逐漸恢復(fù)至正常,連續(xù)4周敏感性顯著降低。2.大鼠攝入小劑量CAP連續(xù)1周對(duì)內(nèi)臟化學(xué)刺激的敏感性顯著增加,連續(xù)4周,敏感性顯著降低。3.雌性大鼠對(duì)內(nèi)臟機(jī)械刺激較雄性大鼠更為敏感。4.攝入小劑量CAP(1mg/kg/d)從1天到4周,大鼠胃、十二指腸粘膜屏障均無(wú)明顯影響。5.大鼠攝入小劑量CAP可以調(diào)節(jié)胃、十二指腸組織TRPV1的表達(dá),可能與大鼠機(jī)械和化學(xué)刺激敏感性的變化有相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R57
【目錄】：

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