本文關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性肝功能衰竭大鼠療效的探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院》 2014年

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性肝功能衰竭大鼠療效的探索

金銀鵬  

【摘要】：目的分離培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(human adipose-derived stemcells,hADSCs)并探討脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)急性肝衰竭大鼠生存情況和肝功能重建的影響；觀察其在大鼠體內(nèi)各臟器中的分布、遷移及其對(duì)受體肝臟的再生的促進(jìn)作用；探索干細(xì)胞移植影響肝衰竭大鼠生存率的可能機(jī)制。方法采用膠原酶消化的方法，從人腹部皮下脂肪中分離出脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)貼壁篩選法純化細(xì)胞，，無(wú)血清培養(yǎng)基體外培養(yǎng)擴(kuò)增。以D-氨基半乳糖（D-gal）大鼠腹腔內(nèi)一次性注射構(gòu)建SD大鼠急性肝衰竭模型。30只肝衰竭SD大鼠隨機(jī)分為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療組和磷酸鹽緩沖液(PBS)對(duì)照組，治療組大鼠經(jīng)脾臟注射5×106個(gè)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，對(duì)照組向脾臟注射相同體積PBS，動(dòng)態(tài)檢測(cè)多項(xiàng)血生化指標(biāo)和肝臟組織學(xué)表現(xiàn)。20只肝衰竭SD大鼠隨機(jī)分為脾臟移植組和股靜脈移植組，分別經(jīng)脾臟和股靜脈途徑注入5×106個(gè)通過(guò)慢病毒感染表達(dá)ZsGreen的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，采用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)兩種移植途徑中脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠心、肝、脾、腎、肺等器官的分布和遷移情況；檢測(cè)肝、脾組織中Ki-67蛋白的表達(dá)情況，TUNNEL法檢測(cè)受體肝細(xì)胞凋亡情況。40只肝衰竭大鼠隨機(jī)分為DMEM-F12對(duì)照組、干細(xì)胞移植組、干細(xì)胞濃縮培養(yǎng)基移植組、干細(xì)胞裂解液移植組。經(jīng)股靜脈途徑分別注入100ul DMEM-F12、5×106個(gè)脂肪干細(xì)胞、濃縮培養(yǎng)基、干細(xì)胞裂解液。動(dòng)態(tài)檢測(cè)大鼠血中HGF、VEGF表達(dá)情況。結(jié)果1、通過(guò)體外分離人體脂肪組織，可獲得脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，該細(xì)胞表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)表面抗原并且能被誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞和軟骨細(xì)胞，證明我們成功分離出脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；2、脾臟移植脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝衰竭大鼠，大鼠總體病死率明顯低于PBS對(duì)照組，同時(shí)，我們觀察到治療組大鼠的肝功能得到明顯改善，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanine Transaminase,ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Aspartate Transaminase,AST)等血液生化指標(biāo)顯著低于PBS對(duì)照組，HE染色顯示肝臟組織形態(tài)明顯改善；3、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)脾臟、股靜脈移植后，大部分遷移至肝臟、脾臟及肺部，其中經(jīng)股靜脈移植組細(xì)胞向肝臟趨化的效率更高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；4、外源性脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植可促進(jìn)急性肝衰竭大鼠肝臟細(xì)胞的再生，并抑制其凋亡；5、干細(xì)胞濃縮培養(yǎng)基移植組和干細(xì)胞裂解液移植組大鼠的72小時(shí)生存率較DMEM-F12對(duì)照組明顯提高。干細(xì)胞移植組、干細(xì)胞濃縮培養(yǎng)基移植組和干細(xì)胞裂解液移植組大鼠血清HGF濃度明顯高于DMEM-F12對(duì)照組，而VEGF濃度無(wú)明顯變化。結(jié)論1、體外分離脂肪組織進(jìn)行貼壁培養(yǎng)可獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；2、一次性腹腔注射D-氨基半乳糖可成功構(gòu)建大鼠急性肝衰竭模型，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植可改善急性肝衰竭模型大鼠的肝功能情況，提高其存活率，有望用于肝衰竭的治療；3、經(jīng)脾臟和股靜脈途徑移植脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞均可用于肝衰竭治療，具有促進(jìn)內(nèi)源性肝臟細(xì)胞再生和抑制凋亡的作用；4、干細(xì)胞可能通過(guò)旁分泌途徑分泌某些細(xì)胞因子如HGF促進(jìn)細(xì)胞再生，改善肝衰竭大鼠生存率。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R575.3
【目錄】：

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【共引文獻(xiàn)】

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2 周新人;王方;;干細(xì)胞治療肝硬化進(jìn)展[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年05期

3 杜侃;欒佐;屈素清;楊輝;楊印翔;汪兆艷;金慧玉;劉衛(wèi)鵬;;干細(xì)胞肝內(nèi)移植治療高氨血癥Ⅱ型6例臨床療效觀察[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2013年11期

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8 袁茵;陳丹亮;陳璇;邵紅偉;黃樹(shù)林;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)激活Notch信號(hào)通路促進(jìn)白血病細(xì)胞株Jurkat的體外存活(英文)[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年04期

9 劉蘋(píng);史春夢(mèng);胡玲莉;張波;王正國(guó);;脂肪源性干細(xì)胞無(wú)酶分離培養(yǎng)方法的研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年10期

10 陳聰聰;程迅生;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞基因治療骨缺損的研究進(jìn)展[J];安徽醫(yī)學(xué);2014年04期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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6 關(guān)劍;胰腺癌間充質(zhì)干細(xì)胞樣腫瘤相關(guān)纖維母細(xì)胞功能研究及維甲酸對(duì)腫瘤相關(guān)纖維母細(xì)胞抑制性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

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9 王有為;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞臨床前安全性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 李陽(yáng);人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向雪旺細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及對(duì)外周面神經(jīng)損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

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1 劉明;預(yù)測(cè)慢加急性肝衰竭發(fā)生的預(yù)警指標(biāo)研究及預(yù)警模型建立[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

2 趙戈;不同干預(yù)條件對(duì)大鼠胚胎肝干細(xì)胞體外培養(yǎng)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

3 馮長(zhǎng)江;基于建立臨床用細(xì)胞庫(kù)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)生物學(xué)特性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

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5 曲戈;IL-24基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞向肺癌靶向遷移的體外研究[D];鄭州大學(xué);2013年

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7 楊穎珂;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)腦出血大鼠血腫周?chē)蛲黾癙75NTR、TrkA表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2013年

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9 馬云鵬;應(yīng)用大塊平鋪法對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離、傳代、凍存及復(fù)蘇的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

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10 孫念政;胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞及其對(duì)糖尿病鼠降糖作用的研究[D];山東大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王敏;羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞克隆的分離和生物學(xué)特性的研究[D];華東理工大學(xué);2010年

2 蘇曉華;牛胎肝間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2011年

3 鄧長(zhǎng)卿;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及功能研究[D];蘇州大學(xué);2011年

4 楊晨;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離鑒定[D];吉林大學(xué);2013年

5 馬云鵬;應(yīng)用大塊平鋪法對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離、傳代、凍存及復(fù)蘇的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

6 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)理[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

7 王黎明;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分泌蛋白表達(dá)譜研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

8 唐秋靈;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向男性生殖細(xì)胞分化的研究[D];汕頭大學(xué);2008年

9 徐小霞;人胎盤(pán)絨毛層間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的優(yōu)化及生物學(xué)特性的初步分析[D];蘇州大學(xué);2009年

10 王建軍;成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)及成骨潛能的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性肝功能衰竭大鼠療效的探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：197447