本文關(guān)鍵詞：脂多糖對人正常肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞TLR4-NF-κB通路的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2015年

脂多糖對人正常肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞TLR4-NF-κB通路的影響

韓瓏  

【摘要】：目的探討不同濃度炎癥刺激物脂多糖(LPS)作用相同時(shí)間及同一濃度LPS作用不同時(shí)間對人正常肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞(Hi BEC)中TLR4-NF-кB通路中TLR4和NF-кB m RNA表達(dá)的影響。以期了解受感染的細(xì)胞向腫瘤方向轉(zhuǎn)變的可能機(jī)制。方法體外培養(yǎng)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞(HIBEC)至4-6代后,分成三組實(shí)驗(yàn):A組分成六小組,其中一組為正常對照組不加LPS,其余五組加入同一濃度LPS(4 ug/ml)但作用不同時(shí)間(分別為3,6,9,12,24h);B組分成六小組,其中一組為正常對照組不加LPS,其余五組分別加入不同濃度的LPS(依次為0.1,1,4,8,10ug/ml)但作用相同時(shí)間(6h)。分別收集各組細(xì)胞,使用Realtime RT-PCR分析兩組細(xì)胞中TLR4m RNA和NF-κB m RNA的表達(dá)水平。C組:分成兩小組,分別為正常對照組不加LPS,另一組為使用4ug/ml的LPS,作用6h,使用Western blot檢測各小組TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)水平。各組結(jié)果均使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以?x±s表示,多組間均數(shù)比較時(shí)采用方差分析(ANOVA),兩兩比較采用最小顯著差異法(LSD法),觀察兩組變量間線性關(guān)系的密切程度和相關(guān)方向使用線性相關(guān)(Pearson積矩相關(guān)系數(shù))。規(guī)定P0.05為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義。結(jié)果(1)LPS(4ug/ml)刺激Hi BEC后TLR4、NF-κB m RNA表達(dá)水平均顯著增加(P0.05),表明LPS激活Hi BEC中TLR4-NF-κB通路,從而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。與NC組相比,TLR4、NF-κB m RNA表達(dá)量在LPS刺激6h時(shí)達(dá)高峰,為效應(yīng)最強(qiáng)的刺激作用時(shí)間。TLR4 m RNA與NF-κB m RNA表達(dá)量之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有著顯著正相關(guān)(r=0.979,P0.05)。(2)在一定范圍內(nèi)(≤4ug/ml),隨著LPS濃度的增加,Hi BEC中TLR4和NF-κB m RNA的表達(dá)水平均逐漸增加,但高濃度的LPS(≥8ug/ml),其刺激效應(yīng)逐漸降低,TLR4、NF-κB m RNA的表達(dá)水平均減少,4ug/ml為效應(yīng)最強(qiáng)的刺激濃度。TLR4 m RNA與NF-κB m RNA表達(dá)量之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有著顯著正相關(guān)(r=0.975,P0.05)。(3)使用效應(yīng)最強(qiáng)的刺激濃度及刺激持續(xù)時(shí)間,即4ug/ml LPS刺激Hi BEC 6h后,從蛋白水平檢測TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)水平,與NC相比,LPS組TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)顯著增加(P0.05)。結(jié)論1.脂多糖可以激活正常人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞中的TLR4-NF-кB通路,且效應(yīng)最強(qiáng)的刺激濃度及刺激持續(xù)時(shí)間為4ug/ml LPS刺激Hi BEC 6h。2.不同濃度脂多糖刺激人正常肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞不同時(shí)間,表達(dá)TLR4 m RNA和NF-кB m RNA均有時(shí)效和量效依賴關(guān)系。3.人正常肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞在4-6代時(shí),細(xì)胞代謝旺盛,宜于做實(shí)驗(yàn)。六代以后,該細(xì)胞系逐漸走向衰老凋亡。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575
【目錄】：

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