本文關(guān)鍵詞：間歇低氧損傷后海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬的表達(dá)及其作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS),是一種發(fā)病率較高的睡眠呼吸障礙性疾病,同時也是神經(jīng)系統(tǒng)認(rèn)知功能障礙發(fā)生發(fā)展的重要危險因素。間歇低氧(IH)作為OSAHS主要的病理生理學(xué)特征,其反復(fù)發(fā)生的低氧/復(fù)氧過程可以誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷。認(rèn)知功能障礙作為老年OSAHS患者常見并發(fā)癥,其發(fā)生機(jī)制可能與間歇低氧所致海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷有關(guān)。自噬是維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的重要生理機(jī)制,近年來有研究發(fā)現(xiàn)自噬在缺血/缺氧所致系統(tǒng)性損傷中發(fā)揮重要作用。然而在間歇低氧條件下,自噬激活的具體機(jī)制以及自噬對神經(jīng)系統(tǒng)損傷的影響目前尚未清楚闡明。因此,本研究通過模擬人OSAHS建立間歇低氧模型,從體外實(shí)驗(yàn)角度觀察間歇低氧損傷后海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬的表達(dá),并進(jìn)一步通過藥物干預(yù)檢測間歇低氧所致海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬流量的變化,擬探討自噬的激活在間歇低氧所致海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷中的作用。方法:取新生SD乳鼠(24小時內(nèi))海馬組織進(jìn)行原代神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng),至第7天,采用免疫熒光對海馬神經(jīng)元進(jìn)行鑒定。①建立不同時間段的間歇低氧細(xì)胞模型,設(shè)正常對照組(NC)、間歇低氧組(IH)4h、間歇低氧組8h和間歇低氧組12h。間歇低氧組分別循環(huán)給予氧濃度為1.5%的低氧5min和21%的常氧10min處理4h、8h和12h,正常對照組持續(xù)給予氧濃度為21%的常氧。采用免疫熒光和免疫印跡檢測間歇低氧不同時間段內(nèi)自噬特異性微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)、Beclin1和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白的表達(dá),TUNEL法檢測不同時間段內(nèi)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化。②給予自噬激活劑雷帕霉素和抑制劑氯喹預(yù)處理后再建立間歇低氧細(xì)胞模型,設(shè)正常對照組、間歇低氧組(12h)、藥物預(yù)處理組、單獨(dú)給藥組和饑餓組。間歇低氧組于間歇低氧艙內(nèi)處理12h;藥物預(yù)處理組分別給予雷帕霉素和氯喹稀釋液預(yù)處理12h后,再置于間歇低氧艙內(nèi)暴露12h;單獨(dú)給藥組分別給予雷帕霉素和氯喹處理12h;饑餓組即間歇低氧陽性對照組給予EBSS無糖培養(yǎng)液培養(yǎng)12h。采用免疫印跡檢測各實(shí)驗(yàn)組自噬相關(guān)蛋白LC3-I向LC3-II的轉(zhuǎn)化,即LC3-II/LC3-I和P62蛋白的表達(dá)。③實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒓皩?shí)驗(yàn)分組同步驟②。采用免疫印跡檢測各實(shí)驗(yàn)組自噬相關(guān)蛋白LC3-II和cleaved caspase-3的表達(dá),免疫熒光檢測各實(shí)驗(yàn)組LC3蛋白表達(dá),TUNEL檢測各實(shí)驗(yàn)組海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化。結(jié)果:①間歇低氧對新生鼠原代海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響:間歇低氧組自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin1表達(dá)明顯增多,且隨著間歇低氧時間的延長LC3和Beclin1表達(dá)也逐漸增多。間歇低氧12h表達(dá)最多,與正常對照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05)。②間歇低氧對新生鼠原代海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬流量的影響:與正常對照組相比,間歇低氧組LC3-II/LC3-I表達(dá)顯著增多,而P62蛋白表達(dá)則明顯降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05);與雷帕霉素單獨(dú)給藥組相比,雷帕霉素+間歇低氧組LC3-II/LC3-I表達(dá)顯著增高,而P62蛋白表達(dá)則明顯降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05);與氯喹單獨(dú)給藥組相比,氯喹+間歇低氧組LC3-II/LC3-I表達(dá)顯著增高,P62蛋白表達(dá)則明顯降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(***P0.05);與正常對照組和DMSO組相比,雷帕霉素單獨(dú)給藥組LC3-II/LC3-I表達(dá)顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*P0.05,**P0.05),而DMSO組與正常對照組相比LC3-II/LC3-I表達(dá)無顯著差異;與正常組相比,EBSS組LC3-II/LC3-I表達(dá)顯著增高,而P62蛋白表達(dá)則顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*P0.05),但與間歇低氧組相比,LC3-II/LC3-I和P62表達(dá)均無明顯差異。③干預(yù)自噬流量對間歇低氧所致海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響:間歇低氧組凋亡陽性細(xì)胞數(shù)和cleaved caspase-3表達(dá)明顯增高,且隨著IH時間的延長,二者表達(dá)也逐漸增多。間歇低氧12h表達(dá)最多,與正常對照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05);雷帕霉素+間歇低氧組cleaved caspase-3表達(dá)和凋亡陽性細(xì)胞表達(dá)顯著高于間歇低氧組。而氯喹+間歇低氧組cleaved caspase-3表達(dá)和凋亡陽性細(xì)胞數(shù)目較間歇低氧組明顯減少,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05,***P0.05);雷帕霉素單獨(dú)給藥組cleaved caspase-3蛋白表達(dá)和凋亡陽性細(xì)胞數(shù)目顯著高于正常對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*P0.05),但DMSO組與正常對照組相比cleaved caspase-3表達(dá)無顯著差異。結(jié)論:本研究證實(shí):1.間歇低氧誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬的表達(dá)增多。2.間歇低氧誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬的激活。3.自噬的激活加重了間歇低氧所致海馬神經(jīng)細(xì)胞的損傷。
【關(guān)鍵詞】：阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征 間歇低氧 海馬神經(jīng)細(xì)胞 自噬 凋亡 雷帕霉素 氯喹
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R766
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 對象和方法15-26
• 結(jié)果26-39
• 討論39-45
• 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明52-54
• 綜述 低氧誘導(dǎo)自噬的信號通路及作用機(jī)制54-62
• 綜述參考文獻(xiàn)59-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉輝國;張志鋒;張珍祥;高永平;牛汝楫;;間歇缺氧大鼠海馬神經(jīng)元凋亡及其機(jī)制[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2007年05期

  本文關(guān)鍵詞：間歇低氧損傷后海馬神經(jīng)細(xì)胞自噬的表達(dá)及其作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：377050