發(fā)布時(shí)間：2022-01-05 07:09

　　背景及研究目的:鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）是一種具有獨(dú)特生物學(xué)特性的惡性腫瘤。復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是鼻咽癌治療失敗和死亡的主要原因。腫瘤干細(xì)胞（Cancer stemcells,CSCs）是一小群具有自我更新及多向分化潛能的腫瘤細(xì)胞,被認(rèn)為是腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的“種子細(xì)胞”。CD47作為介導(dǎo)免疫逃逸的新型免疫檢查點(diǎn),其在多種惡性腫瘤表達(dá)上調(diào),尤其在腫瘤干細(xì)胞中�？笴D47單克隆抗體也被認(rèn)為是有潛力的新型抗腫瘤藥物。我們的前期研究表明CD47在鼻咽癌細(xì)胞和組織中均高表達(dá),使鼻咽癌的增殖遷移能力增強(qiáng),且與不良預(yù)后有關(guān)。在本研究中我們提出CD47是維持并增強(qiáng)鼻咽癌干性的重要原因,最終可能促進(jìn)鼻咽癌的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。材料與方法:選用鼻咽癌CNE1、CNE2、5-8F細(xì)胞株,通過無血清懸浮成球法及選取CD133為鼻咽癌干樣細(xì)胞表面標(biāo)志物的方法,富集鼻咽癌干樣細(xì)胞,同時(shí)檢測鼻咽癌干樣細(xì)胞中CD47的表達(dá)水平。然后采用流式細(xì)胞術(shù)分選出CD47+和CD47-的細(xì)胞群,通過細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測CD47的表達(dá)與自我更新、增殖的關(guān)系,裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)評估體內(nèi)成瘤能力,經(jīng)典克隆形成分析及彗星實(shí)... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１無血清懸浮成球?qū)嶒?yàn)??

?ｆ：?：？．公??Ａ．ＣＮＥ１?Ｂ．５－８Ｆ?Ｃ．ＣＮＥ２（１０〇ｘ）?Ｄ．ＣＮＥ２（２０〇ｘ）??圖１－１無血清懸浮成球?qū)嶒?yàn)??Ｆｉｇ．?１－１?Ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ?ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ?ｓｐｈｅｒｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ａｓｓａｙ??②流式細(xì)胞術(shù)檢測鼻咽癌ＣＮＥ２細(xì)胞中ＣＤ１３３的表達(dá)??我們通過流式細(xì)胞術(shù)檢測了?ＣＮＥ２細(xì)胞中ＣＤ１３３的表達(dá)，結(jié)果（圖１－２）顯??示其表達(dá)量恒定為１％－２％。??Ａ??Ｓｐｅｃｉｍｅｎ＿Ｑ０１－Ｔｕｂｅ＿００３?１?Ｂ??Ｓｐｅｃｉｍｅｎ?００１－Ｔｕｂｅ?００８???０．４％?０．５％?＊＾０．３％?０．５％??＾?１?：??［？?Ｑ１?０＾?Ｃ?？?Ｑ１?．Ｑ２??＊？＞?？，．）？？、?．?－ｉ－．！?？＇??—＾—ａｉｒ——??０．１％?＾９７＾＊＇?１．９％??Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩＩＩ?Ｉ?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?ＩＩＩＩ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?１１１１?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩ?ｌ｜?？?｜?｜?Ｉ?｜１?ＩＩ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩ?ＩＩ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩ?ＩＩ?Ｉ?ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ＩＩＩＩ?Ｉ??１〇?，〇?ＰＥ－Ａ?，〇?，〇?，〇２?，〇?ＰＥ－Ａ?１〇?，〇??Ａ．ＰＥ?Ｍｏｕｓｅ?ＩｇＧ２ｂ?同型對照?Ｂ．ＰＥ?ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ?ＣＤ?１３３??圖１－２流式細(xì)胞術(shù)檢測ＣＮＥ２細(xì)胞中ＣＤ１３３的表達(dá)水

?ｌｅｅｅｅｅｅｈｉｉｅ?ＩＴ）??圖１－５?ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測ＣＮＥ２和ＣＮＥ２Ｓ干性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（Ａ：擴(kuò)増曲線Ｂ：融解曲線）??Ｆｉｇ．?１－５?ＲＴ－ｑＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｓｔｅｍ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ＣＮＥ２?ａｎｄ?ＣＮＥ２Ｓ（?Ａ：?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｌｏｔ；??Ｂ：?ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅ）??同樣，由擴(kuò)增曲線和融解曲線（圖１－５）可知，樣品擴(kuò)增效率高且引物特異??性好，產(chǎn)物單一。采用２＿ＡＡａ法對ＲＴ－ｑＰＣＲ的結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示ＣＮＥ２Ｓ??中干性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子?ｃ－ＭＹＣ（ｔ＝－１．５７５，?Ｐ＝０．０３７）、ＯＣＴ－４（ｔ＝－４．３８９，?Ｐ＝０．０４８）、??ＢＶＨ－１?（ｔ＝－３．２０２，?Ｐ＝０＿０３３）、ＮＡＮＯＧ?（ｔ＝－１６．１５０，Ｐ＝０．００４）的表達(dá)在?ＣＮＥ２Ｓ??更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜〇．〇５）；而?ＳＯＸ－２?（ｔ＝１３．２６２，?Ｐ＝０．００６）、ＫＬＦ－４??１６??


本文編號：3569984