發(fā)布時間：2021-12-02 15:51

　　目的·研究舌下含服免疫治療（sublingual immunotherapy,SLIT）對變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis,AR）炎癥反應(yīng)中效應(yīng)性T細(xì)胞（effector T cell,Teff）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell,Treg）功能的影響。方法·選擇復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院北院耳鼻咽喉頭頸外科招募的20例AR患者,分別在治療前及治療24個月和30個月時獲取其外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,檢測PBMC中Teff和Treg所占CD4⁺ T細(xì)胞百分比,并檢測PBMC中2種細(xì)胞鈣釋放激活鈣通道調(diào)節(jié)分子1（calcium release-activated calcium channel modulator 1,ORAI1）蛋白的濃度和Ca²⁺平均熒光強度（mean fluorescence intensity,MFI）。然后將治療30個月時的2種細(xì)胞進行體外培養(yǎng),檢測2種細(xì)胞中ORAI1蛋白的表達(dá)以及培養(yǎng)基中白細(xì)胞介素-4（interleuki... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2020,40(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

治療24個月和30個月時PBMC中Teff和Treg的流式細(xì)胞檢測及其占CD4+T細(xì)胞百分比的變化

ORAI1蛋白對T細(xì)胞的各種功能有著至關(guān)重要的作用[7],因此本研究分析SLIT是否能夠影響T細(xì)胞亞群Teff和Treg中ORAI1蛋白的表達(dá)。ELISA檢測結(jié)果顯示,治療24個月時Teff中ORAI1蛋白的表達(dá)顯著少于治療前(P=0.000),而治療30個月時Teff中的表達(dá)又顯著少于治療24個月時(P=0.003)(圖2A);但Treg中的變化情況相反,治療24個月時Treg中ORAI1蛋白的表達(dá)顯著多于治療前(P=0.000),而治療30個月時ORAI1蛋白的表達(dá)又顯著多于治療24個月時(P=0.007)(圖2B)。ORAI1蛋白的功能是促進細(xì)胞外Ca2+的內(nèi)流,從而影響細(xì)胞的各種活動[8],因此我們又對Teff和Treg中Ca2+ MFI的變化進行了分析。結(jié)果表明,Ca2+ MFI的變化與ORAI1蛋白的表達(dá)趨勢基本一致,治療24個月時Teff中Ca2+ MFI顯著少于治療前(P=0.000),而治療30個月時Teff中Ca2+ MFI又顯著少于治療24個月時(P=0.000)(圖2C);但Treg中的變化情況相反,治療24個月時Treg中Ca2+ MFI顯著多于治療前(P=0.000),而治療30個月時Ca2+ MFI又顯著多于治療24個月時(P=0.000)(圖2D)。

為了確定lenti-ORAI1是否可以轉(zhuǎn)染至Teff和Treg中,用激光掃描共聚焦顯微鏡進行觀察,發(fā)現(xiàn)SLIT 30個月時的2種細(xì)胞熒光均表現(xiàn)為綠色,Western blotting檢測顯示轉(zhuǎn)染后的蛋白表達(dá)條帶減弱,說明成功轉(zhuǎn)染了目的序列(圖4)。接著對Teff和Treg中游離Ca2+的濃度進行了檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn),lenti-ORAI1轉(zhuǎn)染后,Teff中Ca2+ MFI顯著下降(P=0.004)(圖5A),Treg中Ca2+ MFI也顯著下降(P=0.000)(圖5B)。此外,lenti-ORAI1轉(zhuǎn)染后,Teff細(xì)胞培養(yǎng)基中IL-4濃度減少(P=0.009)(圖5C),Treg細(xì)胞培養(yǎng)基中IL-10濃度也減少(P=0.000)(圖5D)。圖4 Lenti-ORAI1轉(zhuǎn)染效率驗證


本文編號：3528746