目的探討miR-9-5P對脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞增殖、凋亡及遷移、侵襲的調(diào)控作用,并探尋其發(fā)揮作用的靶基因CDH1,CTNNA1和ITGA6。方法體外給予脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞轉(zhuǎn)染陰性對照（NC）和miR-9-5p mimics。采用RTCA實時增殖實驗檢測細胞的增殖情況;EDU實驗進一步檢測細胞的增殖變化;流式細胞技術(shù)檢測細胞的凋亡變化;Transwell實驗觀察細胞遷移和侵襲能力的變化情況;Targetscan生物信息學(xué)網(wǎng)站分析預(yù)測miR-9-5P的靶基因,并通過GO分類和KEGG富集分析找到與遷移和侵襲相關(guān)靶基因;Western blotting檢測CDH1蛋白表達情況。結(jié)果 RTCA實時增殖實驗結(jié)果顯示,miR-9-5p能夠抑制脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞MUM-2B （t=6.925,P <0.05）及MUM-2C （t=4.762,P <0.05）的增殖;EDU實驗結(jié)果顯示,miR-9-5p能夠抑制脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞MUM-2B （t=4.779,P <0.05）和MUM-2C （t=4.514,P <0.05）的增殖;流式細胞檢測結(jié)果表明,miR-9-5p能夠促進脈... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,49(10)北大核心CSCD

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【圖文】：

mi R-9-5p對脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞增殖的影響

采用流式細胞儀檢測各組脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞的凋亡變化情況。如圖2所示，與NC組相比，MUM-2B (t=7.385）和MUM-2C (t=4.893）細胞轉(zhuǎn)染mi R-9-5p mimics后凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001），見圖2A、2B。脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞的凋亡水平與mi R-9-5p的表達量呈正相關(guān)，表明mi R-9-5p能夠促進脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞的凋亡。2.3 mi R-9-5p能夠參與調(diào)控脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞的遷移和侵襲

mi R-9-5p在多種腫瘤中發(fā)揮著促進因子或抑制因子的作用[16-19]，但它在脈絡(luò)膜黑色素瘤中的作用機制目前尚不明確。因此，本研究通過在脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞中過表達mi R-9-5p，發(fā)現(xiàn)mi R-9-5p表達上調(diào)能夠抑制脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，并促進脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞的凋亡。為了更加深入地研究mi R-9-5p在脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞中的作用機制及途徑，本研究利用生物信息學(xué)網(wǎng)站Targetscan Human7.2分析預(yù)測了mi R-9-5p的全部可能靶基因。隨后利用GO分類富集分析及KEGG通路分析上述預(yù)測靶基因，篩選得到了3個與細胞遷移和侵襲相關(guān)的基因CDH1,CTNNA1和ITGA6。最后以Western blotting初步驗證了CDH1是mi R-9-5p的靶基因之一。CDH1和CTNNA1屬于鈣黏著蛋白家族，介導(dǎo)細胞與細胞間的黏附，與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化引起的侵襲性增加有關(guān)[20-21]。ITGA6能促進腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移[22]。因此，推測mi R-9-5p可能通過調(diào)節(jié)上述基因的表達影響脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞的發(fā)生與發(fā)展。圖4 Western blotting檢測CDH1蛋白表達情況


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