目的:近年來,國內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用“上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelia-mesenchymal transition,EMT）”學(xué)說闡明腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制,認(rèn)為腫瘤細(xì)胞在不同信號(hào)途徑調(diào)控下發(fā)生EMT表型轉(zhuǎn)化進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。而在這一過程中,作為轉(zhuǎn)錄因子的Snail起到了關(guān)鍵性作用,Snail通過抑制E-cadherin來誘導(dǎo)EMT已經(jīng)被廣大實(shí)驗(yàn)所證實(shí),但Snail家族所特有的通過對(duì)VDR基因的調(diào)控來啟動(dòng)EMT這一非經(jīng)典通路的研究尚不夠深入,在喉癌中研究更是鮮有報(bào)道。本研究探討Snail/VDR信號(hào)通路參與喉鱗狀細(xì)胞癌EMT的分子機(jī)制,并探討其對(duì)喉癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。方法:第一部分:通過Western blot及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)14例喉鱗狀細(xì)胞癌樣本癌（T）與癌旁組織（N）中Snail基因的表達(dá)情況。構(gòu)建shRNA Snail干擾片段Snail sh-RNA-1.sh-RNA-2.sh-RNA-3三種,分別轉(zhuǎn)染至喉癌Hep-2細(xì)胞中,選擇沉默Snail基因效果最佳者,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。通過Western blot和RT-PCT檢測(cè)pRNA-H1.1-Snail小分子干擾片段... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

1.1Snail在14例喉癌組織細(xì)胞中表達(dá)明顯高于癌旁組織（**p<0.01.）

Snail 在 14 例喉癌組織細(xì)胞中表達(dá)明顯高于癌旁組織（ *p < 0.2 Snail was highly expressed in larynx tissues of patients with lar cell carcinoma (LSCC). The content of Snail in LSCC tissues anding adjacent normal laryngeal tissues was evaluated by real-time P normal tissue.Data are shown as mean±SD. *p < 0.05, **p < 0.01.過 western blot 和 RT-PCR 檢測(cè)喉癌組織及癌旁組織中 Snail 蛋 Snail 基因 mRNA的表達(dá)情況，證實(shí) Snail 在喉癌組組中表達(dá)上調(diào) pRNA-H1.1-Snail 載體，對(duì)目的基因靶向沉默。建 shRNA Snail干擾片段的方法，我們構(gòu)建了 Snail sh-RNA-1.sh-3,三種 sh-RNA的具體載體、酶切位點(diǎn)、靶點(diǎn)及測(cè)序結(jié)果如表 4. 1.3.2.1 構(gòu)建了 Snail sh-RNA-1.sh-RNA-2. sh-RNA-3 具體內(nèi)容體 酶切位點(diǎn)靶點(diǎn)（target）靶點(diǎn)正向 反靶向點(diǎn)NA1.1BamHI/HindIIGCTCTTTCCTCGTCAGGATCCCCGCTGCCAACAAGCAGACTATTAGCTAAAATTTCCTCG

部分 Snail/VDR 信號(hào)途徑參與喉鱗狀細(xì)胞癌 EMT 分子機(jī)ail sh-RNA的干擾功能進(jìn)行鑒定。將Snail shh-RNA-nc轉(zhuǎn)染至喉癌Hep-2細(xì)胞中，以未轉(zhuǎn) blot檢測(cè)Snail蛋白的表達(dá)情況，推斷Snail基基因最強(qiáng)的重組Snail sh-RNA。結(jié)果證實(shí)Sn佳，具有最為顯著的基因沉默效應(yīng)，可使目實(shí)驗(yàn)需求，因此Snail sh-RNA-3被用作后續(xù).1-Snail載體.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：2926250