研究背景和研究目的:鼻咽癌是起源于鼻咽上皮細(xì)胞的惡性腫瘤,好發(fā)于中國(guó)南方及東南亞各國(guó)。在初診的鼻咽癌患者中,約有70%已經(jīng)發(fā)展為晚期。盡管鼻咽癌對(duì)放療敏感,但是鼻咽癌患者的預(yù)后仍然不良,五年生存率僅為34%~52%。導(dǎo)致預(yù)后不良的主要原因是,鼻咽癌患者治療后的復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。治療誘導(dǎo)的衰老是由于原癌基因的異常激活,氧化應(yīng)激反應(yīng),不依賴于端粒酶異常的DNA損傷導(dǎo)致的。有研究結(jié)果表明,腫瘤細(xì)胞在經(jīng)過(guò)抗癌藥物(如阿霉素、鉑類、紫杉醇等)處理后會(huì)發(fā)生衰老,提示衰老可能是抗癌藥物起效的重要細(xì)胞反應(yīng)。環(huán)氧合酶(cyclooxygenase,COX)是前列腺素合成反應(yīng)的限速酶。包含有環(huán)氧合酶1和環(huán)氧合酶2(COX-2)。其中,環(huán)氧合酶1在各種組織中穩(wěn)定表達(dá),在組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。而COX-2是誘導(dǎo)型酶,在炎癥及損傷時(shí)參與前列腺素的生產(chǎn)。COX-2也在多種腫瘤中高表達(dá),包括乳腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌及鼻咽癌等。迄今為止,放化療抵抗的機(jī)制依然是鼻咽癌治療最關(guān)鍵的臨床問(wèn)題。我們的研究目的是研究COX-2在鼻咽癌患者初診和復(fù)發(fā)時(shí)的表達(dá)情況,以及COX-2在鼻咽癌中促進(jìn)治療抵抗的作用和機(jī)制。研究方法:1.我們利用免疫組織化學(xué)染色研究,COX-2高表達(dá)與鼻咽癌患者的復(fù)發(fā),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和生存期的關(guān)系。利用同一患者初診和復(fù)發(fā)時(shí)的石蠟切片,研究COX-2在復(fù)發(fā)與初診時(shí)的表達(dá)情況。2.運(yùn)用蛋白印跡法檢測(cè)了正常鼻咽上皮細(xì)胞系和鼻咽癌細(xì)胞系COX-2表達(dá)水平,建立穩(wěn)定敲減及過(guò)表達(dá)COX-2的鼻咽癌細(xì)胞系。采用CCK8、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)、衰老染色實(shí)驗(yàn)研究COX-2在腫瘤細(xì)胞增殖、衰老、耐藥方面的作用。3.從COX-2敲除小鼠及野生型同窩小鼠中獲取肺和皮膚成纖維細(xì)胞,進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng),用于檢測(cè)順鉑處理后,成纖維細(xì)胞的衰老情況,探究COX-2在衰老方面的作用。4.借助裸鼠實(shí)驗(yàn),研究鼻咽癌細(xì)胞系COX-2表達(dá)水平對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響,以及腫瘤組織中,衰老通路相關(guān)的p53表達(dá)情況。5.通過(guò)蛋白質(zhì)免疫共沉淀方法檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞系中,COX-2與p53蛋白的結(jié)合情況。利用p53抑制劑,探究p53在治療誘導(dǎo)的衰老方面的作用。研究結(jié)果:1.研究顯示,COX-2高表達(dá)影響鼻咽癌患者的復(fù)發(fā),轉(zhuǎn)移和生存期(P0.05)。為進(jìn)一步探究其與復(fù)發(fā)的關(guān)系,我們獲取同一患者,初診和復(fù)發(fā)時(shí)的石蠟切片,發(fā)現(xiàn)COX-2在復(fù)發(fā)時(shí)表達(dá)強(qiáng)于初診(P0.01)。2.敲減COX-2細(xì)胞增殖能力減弱(P0.01),過(guò)表達(dá)COX-2細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)(P0.01)。敲減COX-2后,對(duì)順鉑、紫杉醇耐藥性減弱(P0.05),過(guò)表達(dá)COX-2后,對(duì)順鉑、紫杉醇耐藥性增強(qiáng)(P0.05),過(guò)表達(dá)COX-2后,鼻咽癌細(xì)胞對(duì)放療的抵抗性增強(qiáng)(P0.01)。敲減COX-2后,順鉑處理后衰老細(xì)胞百分比增多(P0.01),過(guò)表達(dá)COX-2后,順鉑處理后衰老細(xì)胞百分比減少(P0.01)。3.COX-2缺失可以促進(jìn)小鼠成纖維細(xì)胞的衰老(P0.01),COX-2缺失可能通過(guò)p53影響小鼠成纖維細(xì)胞的衰老。4.在敲減COX-2的鼻咽癌細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)腫瘤形成能力有所減弱(P0.05),免疫組化發(fā)現(xiàn)Ki-67表達(dá)較弱,p53表達(dá)較強(qiáng)。5.通過(guò)蛋白質(zhì)免疫共沉淀方法驗(yàn)證,在鼻咽癌細(xì)胞系中COX-2可以與p53進(jìn)行蛋白與蛋白的結(jié)合。應(yīng)用p53抑制劑PFT-α,抵消敲減COX-2導(dǎo)致的順鉑處理后衰老細(xì)胞百分比增多的作用。研究結(jié)論:1.COX-2高表達(dá)與鼻咽癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及不良預(yù)后有關(guān),COX-2在復(fù)發(fā)時(shí)表達(dá)強(qiáng)于初診;2.COX-2通過(guò)與p53相結(jié)合抑制p53,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,影響化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老,并導(dǎo)致鼻咽癌細(xì)胞系耐藥。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.63
【部分圖文】：

腫瘤細(xì)胞中表達(dá)較強(qiáng)。11 例慢性鼻咽炎上皮標(biāo)本中僅 4 例有 COX陽(yáng)性表達(dá)（+），陽(yáng)性率為 36%（4/11）； 43 例腫瘤標(biāo)本中有 34 例 COX陽(yáng)性表達(dá)（+），陽(yáng)性率為 79%（34/43）。慢性鼻咽炎上皮中的 COX-2 陽(yáng)率和腫瘤相比，均有顯著性意義（P<0.01），見圖 2.1 及 2.2。以上結(jié)果提示咽癌患者組織中 COX-2 表達(dá)顯著增高。進(jìn)一步按腫瘤細(xì)胞中 COX-2 表達(dá)將腫瘤患者分為 COX-2 高表達(dá)組（3~6 分）16 例和 COX-2 低表達(dá)組（027 例。結(jié)果顯示，COX-2 高表達(dá)組與低表達(dá)組在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（P<0.05復(fù)發(fā)（P<0.05）及患者生存狀態(tài)均有顯著性意義（P<0.05），見表 2.2。并且 COX-2 表達(dá)高低分為兩組，運(yùn)用 Kaplan-Meier 分析方法得出，COX-2 高鼻咽癌患者的生存期更短（P<0.05），見圖 2.3。

結(jié)果顯示，COX-2 高表達(dá)組與低表達(dá)組在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（P<0.05）及患者生存狀態(tài)均有顯著性意義（P<0.05），見表-2 表達(dá)高低分為兩組，運(yùn)用 Kaplan-Meier 分析方法得出，C癌患者的生存期更短（P<0.05），見圖 2.3。A B圖 2.1 免疫組織化學(xué)慢性鼻咽炎與鼻咽癌 COX-2 蛋白Figure 2.1 COX-2 expression in chronic nasopharyngitinasopharyngeal carcinoma by IHCA : 鼻咽上皮 B : 鼻咽癌組織

表 2.2 鼻咽癌中 COX-2 表達(dá)與患者臨床相關(guān)性Table 2.2 Association between COX-2 expression and clinicacharacteristics of patients with NPC
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