目的探討木犀草素對碘酸鈉誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮細胞及視網(wǎng)膜損傷的保護作用。方法體外實驗選擇ARPE-19細胞,先將細胞分為對照組、單純木犀草素濃度梯度組及對照組、碘酸鈉模型組、木犀草素濃度梯度治療組,MTT分別檢測各組細胞活力。隨后將細胞分為對照組,碘酸鈉模型組,木犀草素治療組(50μmol·L~(-1)),Hoechst33342染色和流式細胞儀檢測細胞凋亡,Western blotting檢測Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3及HMGB1、TLR4、NF-κB相對表達量的變化。體內(nèi)實驗:將30只C57BL/6J雄性小鼠隨機分為對照組、碘酸鈉模型組和木犀草素治療組,木犀草素治療組給予木犀草素預(yù)處理1周后,模型組與治療組鼠尾靜脈給予碘酸鈉造模,木犀草素治療組繼續(xù)如前給藥4周,OCT測量測視網(wǎng)膜厚度,HE染色觀察形態(tài)學(xué)變化并統(tǒng)計玻璃膜疣數(shù)量,ERG檢測a波、b波振幅及其潛伏期。結(jié)果體外實驗:MTT顯示,與對照組相比,單純木犀草素濃度(10-100)μmol·L~(-1)吸光度值無明顯變化(P0.05),而單純木犀草素濃度為200μmol·L~(-1)時吸光度值低于對照組(P0.05);碘酸鈉模型組吸光度值低于對照組(P0.05),木犀草素濃度梯度治療組吸光度值均高于碘酸鈉模型組(P0.05)。Hoechst33342染色顯示,碘酸鈉模型組細胞凋亡率高于對照組(P0.05),木犀草素治療組細胞凋亡率低于碘酸鈉模型組(P0.05)。流式細胞計數(shù)顯示,與對照組相比碘酸鈉模型組細胞凋亡率更高(P0.05),而木犀草素治療組細胞凋亡率較碘酸鈉模型組低(P0.05)。Western blotting檢測顯示,碘酸鈉模型組Bcl-2相對表達量低于對照組(P0.05),木犀草素治療組Bcl-2相對表達量高于碘酸鈉模型組(P0.05),碘酸鈉模型組Bax,cleaved caspase-3以及HMGB1、TLR4、NF-κB相對表達量均高于對照組(P0.05),木犀草素治療組Bax,cleaved caspase-3以及HMGB1、TLR4、NF-κB相對表達量均低于碘酸鈉模型組(P0.05)。體內(nèi)實驗:OCT顯示,對照組各層結(jié)構(gòu)排列均一整齊,與碘酸鈉模型組相比,木犀草素治療組RPE層高反射點減少,內(nèi)核層和外核層相對厚度增加(P0.05),全層視網(wǎng)膜相對厚度增加(P0.05)。HE染色顯示,與碘酸鈉模型組比,木犀草素治療組內(nèi)核層、外核層外核層細胞密度更高(P0.05),RPE層連續(xù)性增加,玻璃膜疣數(shù)量減少(P0.05),ERG顯示,碘酸鈉模型組a波、b波振幅及其潛伏期均低于對照組(P0.05),木犀草素治療組a波、b波振幅及其潛伏期均高于碘酸鈉模型組(P0.05)。結(jié)論木犀草素通過減輕HMGB1/TLR4/NF-κB介導(dǎo)的炎癥抑制碘酸鈉誘導(dǎo)的RPE細胞凋亡并減少視網(wǎng)膜損傷。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R774.1
【部分圖文】：

結(jié)果一、 木犀草素對碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細胞活力影響MTT 測定結(jié)果顯示（圖 1A），木犀草素濃度為（10-100）μmol·L-1時與對照組相比吸光度值無明顯變化，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；木犀草素濃度為200μmol·L-1時與對照組相比吸光度值明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明對 ARPE-19 細胞而言，木犀草素安全濃度為（10-100）μmol·L-1。隨后為了評估安全濃度范圍內(nèi)木犀草素對碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細胞活力影響，我們發(fā)現(xiàn)（圖 1B），碘酸鈉模型組吸光度值低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），木犀草素濃度梯度治療組各組吸光度值均高于碘酸鈉模型組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。木犀草素濃度在 50μmol·L-1時吸光度值最高，后續(xù)體外實驗均以 50μmol·L-1作為木犀草素治療組濃度。

結(jié)果一、 木犀草素對碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細胞活力影響MTT 測定結(jié)果顯示（圖 1A），木犀草素濃度為（10-100）μmol·L-1時與對照組相比吸光度值無明顯變化，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；木犀草素濃度為200μmol·L-1時與對照組相比吸光度值明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明對 ARPE-19 細胞而言，木犀草素安全濃度為（10-100）μmol·L-1。隨后為了評估安全濃度范圍內(nèi)木犀草素對碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細胞活力影響，我們發(fā)現(xiàn)（圖 1B），碘酸鈉模型組吸光度值低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），木犀草素濃度梯度治療組各組吸光度值均高于碘酸鈉模型組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。木犀草素濃度在 50μmol·L-1時吸光度值最高，后續(xù)體外實驗均以 50μmol·L-1作為木犀草素治療組濃度。

圖 2 Hoechst 33342 染色和流式檢測結(jié)果注：圖 2A 和 B：a：對照組；b：碘酸鈉模型組；c：木犀草素治療組。圖 2C 和 D：分別為 Hoechst 33342 染色和流式檢測的 ARPE-19 細胞凋亡率統(tǒng)計圖，與對照組相比，*P＜0.05，與碘酸鈉模型組相比，**P＜0.05。三、 木犀草素對碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE-19 細胞中 Bcl-2、Bax、

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本文編號：2813199