【摘要】：研究目的1.探討HPV感染及其亞型與NSIP發(fā)生、發(fā)展及惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)系;2.探討PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的激活在HPV感染鼻咽部細(xì)胞中的作用。研究背景鼻及鼻竇內(nèi)翻乳頭狀瘤(Nasal and sinonasal inverted papilloma,NSIP)是耳鼻喉科常見的良性腫瘤,具有局部侵襲性,其特點(diǎn)為鼻腔、鼻竇粘膜表層上皮細(xì)胞向間質(zhì)內(nèi)呈管狀或指狀深入并突破基底層。NSIP的病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚,但研究報(bào)道人乳頭狀瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)感染是其主要的危險(xiǎn)因素。HPV是一類具有種族特異性的雙鏈閉環(huán)DNA病毒,具有多種亞型,大量研究證明了HPV與多種腫瘤的形成、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。自1987年Syrjanen等首次在NSIP病例中鑒定出HPV,HPV感染在NSIP中的作用被廣泛研究。文獻(xiàn)報(bào)道了NSIP患者組織中HPV 陽(yáng)性率顯著高于正常組織,然而HPV病毒感染及其亞型與NSIP發(fā)生發(fā)展及惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)系鮮有報(bào)道。研究報(bào)道,HPV感染能通過(guò)多種信號(hào)途徑作用于宿主細(xì)胞,促進(jìn)細(xì)胞增殖及腫瘤發(fā)生。然而,HPV感染誘導(dǎo)NSIP的發(fā)生及惡性轉(zhuǎn)化的機(jī)制尚不清楚。大量證據(jù)顯示,HPV原癌基因E6/E7能有效激活磷脂釀肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB,Akt)/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)信號(hào)通路,通過(guò)誘導(dǎo)其靶基因表達(dá)的改變,激活MAPK信號(hào)通路,介導(dǎo)多種細(xì)胞及分子功能,對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后起著關(guān)鍵作用。其中,PI3K的激活能促進(jìn)EGFR的表達(dá),并導(dǎo)致MAPK/ERK信號(hào)的激活,Akt磷酸化及激活在HPV感染引起癌癥中起著重要的作用,mTOR在細(xì)胞多種生物信號(hào)途徑如生長(zhǎng)因子感應(yīng)、能量供應(yīng)及營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)中起著重要的調(diào)節(jié)作用。然而,PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在HPV感染誘導(dǎo)的NSIP中的作用尚不清楚。研究方法1.NSIP與HPV感染及其亞型的關(guān)系研究收集山東淄博市中心醫(yī)院病理科2005年8月-2017年6月正常(n=40)及NSIP患者(n=80)石蠟包埋組織樣本;Logistic回歸分析NSIP的危險(xiǎn)因素;采用特異性PCR檢測(cè)組織HPV E6/E7 DNA陽(yáng)性率,通過(guò)HybirMax法采用基因分型導(dǎo)流雜交對(duì)HPV進(jìn)行分型;HE染色觀察組織病理;免疫組化檢測(cè)組織pS6及pAkt蛋白的表達(dá)情況。2.PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在HPV感染細(xì)胞中的作用及機(jī)制研究選取人正常鼻咽部上皮細(xì)胞系NP69-SV40T及人鼻咽癌細(xì)胞系CNE1用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn);構(gòu)建HPVI11E6/E7質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染至NP69-SV40T及CNE1細(xì)胞;CCK-8法測(cè)定質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后或(和)加入mTOR抑制劑雷帕霉素后1-5 d細(xì)胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI雙染流式測(cè)定細(xì)胞凋亡;qRT-PCR檢測(cè)HPV11 E6/E7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48 h后,TRIzol法提取細(xì)胞總RNA NP69-SV40T及CNE1 細(xì)胞PI3K、mTOR、Akt、S6、Caspase-3、cyclin D1、p53、p21 mRNA表達(dá)水平;提取細(xì)胞總蛋白,Western Blot分析質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞PI3K、mTOR、Akt、S6、Caspase-3、cyclin Dl、p53、p21 蛋白及其磷酸化表達(dá)水平。研究結(jié)果1.NSIP與HPV感染及其亞型的關(guān)系研究80例NSIP患者平均年齡(50.9±14.3)歲(男性%=63.7%),40例對(duì)照者平均年齡(51.3±13.2)歲(男性%=60.0%);NSIP組HPV陽(yáng)性率(47/80,58.8%)顯著高于對(duì)照組(3/40,7.5%)(P0.001);HPV感染是NSIP發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素(OR=33.138,P0.001);中到重度不典型增生NSIP患者HPV 陽(yáng)性率(78.3%)顯著高于單純NSIP或低度不典型增生患者(49.1%,6/53)(P0.05);Krouse Ⅲ期(75.0%)及Krouse IV期(85.7%)患者HPV陽(yáng)性率顯著高于Krouse Ⅰ期患者(37.5%,P0.05);47例HPV感染陽(yáng)性樣本共檢出12個(gè)亞型,HPV11是檢出最多的基因型(37.7%);NSIP合并SCC及中到重度NSIP患者高危型(33.3%及50.0%)及混合型(22.2%及66.7%)HPV感染率顯著高于單純NSIP或低度不典型增生組患者(36.0%及0.0%)(P0.05);Krouse Ⅲ期及Ⅳ期患者混合型(22.2%及50.0%)及高危型(55.6%及33.3%)HPV感染率顯著高于KrouseⅠ期患者(0.0%及16.7%)(P0.05);HPV+ NSIP患者組織pAkt及pS6陽(yáng)性率(分別為74.5%及80.9%)顯著高于HPV-NSIP患者(分別為51.6%及58.1%)及對(duì)照組(分別為26.3%及21.1%)(P0.05)。2.PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在HPV感染細(xì)胞中的作用及機(jī)制研究HPV11 E6/E7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的NP69-SV40T及CNE1細(xì)胞的增殖活性顯著高于對(duì)照組細(xì)胞,且呈現(xiàn)明顯的時(shí)間依賴性(提高1.25-1.62倍,P0.01),mTOR抑制劑雷帕霉素能有效逆轉(zhuǎn)HPVl1 E6/E7誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖活性的升高;HPV11 E6/E7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染顯著抑制細(xì)胞凋亡,且呈現(xiàn)時(shí)間依賴性(約降低17%-25.1%,P0.05);HPV E6/E7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)PI3K、Akt、mTOR、S6、MAPK及p21轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯影響(P0.05);但能顯著促進(jìn)p-PI3K(1.47/1.54倍)、pAkt(1.3/2.42倍)、pmTOR(1.6/2.2倍)、pS6(1.6/1.7倍)及pMAPK(2.47/2.53倍)蛋白的表達(dá);此外,HPV11 E6/E7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染顯著抑制p53(37.9%/59.3%)及Caspase-3(54.3%/61.2%)轉(zhuǎn)錄及蛋白的表達(dá),而上調(diào)Cyclin D1的表達(dá)(1.85/2.28倍)。主要結(jié)論1.NSIP患者HPV感染率58.8%,11型是HPV感染相關(guān)的NSIP最主要的病毒亞型,高危型HPV感染的NSIP發(fā)生不典型增生、惡性轉(zhuǎn)化及臨床分期較高,HPV感染及其亞型與NSIP發(fā)生、發(fā)展及惡性轉(zhuǎn)化型密切相關(guān)。2.HPV11 E6/E7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染鼻咽部上皮細(xì)胞及鼻咽癌細(xì)胞能激活PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路,促進(jìn)MAPK信號(hào)的激活,進(jìn)而抑制p53及Caspase-3的表達(dá),促進(jìn)Cyclin D1表達(dá)上調(diào),從而抑制細(xì)胞凋亡并促進(jìn)細(xì)胞增殖。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.62
【圖文】：

注：３與Ｋｒｏｕｓｅ邋ＩＩ期患者比較；１５與Ｋｒｏｕｓｅ邋ＩＩＩ期患者比較；ｅ與Ｋｒｏｕｓｅ邋ＩＶ期患者比較。逡逑２．２．５邋ＨＰＶ亞型分析逡逑采用導(dǎo)流雜交對(duì)４７例ＨＰＶ感染陽(yáng)性樣本進(jìn)行基因分型，結(jié)果顯示（圖１），共逡逑檢出１２型ＨＰＶ病毒，包括６例多重感染。其基因分布為：ＨＰＶ６邋（５／５３，邋９．４％）、逡逑ＨＰＶ１１邋（２０／５３，邋３７．７％）、ＨＰＶ１６邋（７／５３，邋１３．２％）、ＨＰＶ１８邋（４／５３，７．５％）、ＨＰＶ３３邋（２／５３，逡逑３．８％）、ＨＰＶ４４邋（２／５３，邋３．８％）、ＨＰＶ５２邋（５／５３，邋９．４％）、ＨＰＶ５３邋（１／５３，邋１．９％）、ＨＰＶ５６逡逑（１／５３，１．９％）、ＨＰＶ５７邋（２／５３，邋３．８％）、ＨＰＶ５８邋（３／５３，邋５．７％）、ＨＰＶ６８邋（１／５３，邋１．９％）。逡逑ＨＰＶ１１是檢出最多的基因型（３７．７％），其次為ＨＰＶ１６（１３．２）。其中低危型ＨＰＶ（６、逡逑１１、４４）共邋２７邋例（５０．９％），高危型邋ＨＰＶ邋（１６、１８、３３、５２、５６、５７、５８、６８）共逡逑２５例（４７．２％）。６例多重感染均為二重感染，其中高低危混合型感染５例（１６／１１、逡逑１６／１１、１６／６、１８／１１、５８／１１）

數(shù)染色細(xì)胞進(jìn)行定性及半定量分析。逡逑（１）邋ｐＡｋｔ在ＮＳＩＰ組織中的表達(dá)情況逡逑各組患者代表性鼻腔、鼻竇粘膜表層上皮組織病理及免疫組化染色見圖２，與逡逑對(duì)照組比較，ＮＳＩＰ患者表皮組織呈現(xiàn)高度增生，并深入至皮下間質(zhì)，伴隨不同程度逡逑的組織分化，細(xì)胞出現(xiàn)異質(zhì)性。免疫組化染色顯示，ｐＡｋｔ表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞的胞漿及胞逡逑膜通過(guò)抗原抗體反應(yīng)而呈現(xiàn)棕色，ＮＳＩＰ患者組織ｐＡｋｔ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著高于對(duì)照組，逡逑ＨＰＶ＋邋ＮＳＩＰ患者ｐＡｋｔ染色強(qiáng)度顯著高于ＨＰＶ＿邋ＮＳＩＰ及對(duì)照組。逡逑ｉｋ邋１１逡逑＇■＾ｂ－邐．１：＇震；ｉ邋？？、私－今逡逑■邋Ｖ邐Ｖ逡逑｜逡逑＜逡逑0■逡逑？邋．邋＇逡逑－；ｒ邋￣邐＇邐．．．邐＇邋ｉ，邐■邋ｕ邋＇ｎ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邐ＨＰＶ－邋ＮＳＩＰ邐ＨＰＶ＋邋ＮＳＩＰ逡逑圖２邋Ｈ＆Ｅ染色及免疫組化分析ｐＡｋｔ在對(duì)照組、ＨＰＶ－邋ＮＳＩＰ及ＨＰＶ＋邋ＮＳＩＰ組患者鼻腔鼻竇上皮逡逑組織中的表達(dá)情況。逡逑表８統(tǒng)計(jì)了各組患者鼻腔、鼻竇上皮組織ｐＡｋｔ陽(yáng)性率，ＮＳＩＰ患者鼻腔、鼻竇逡逑上皮組織中ｐＡｋｔ表達(dá)陽(yáng)性率（ＨＰＶ－及ＨＰＶ＋ＮＳＩＰ分別為１６／３１，邋５１．６％及３５／４７，邋７４．５％邋）逡逑均顯著高于對(duì)照組（１０／３８，２６．３％）邋（Ｐ＜０．０５），提示ｐＡｋｔ在ＮＳＩＰ組織中表達(dá)上調(diào)。逡逑此外

逡逑（２）邋ｐＳ６在ＮＳＩＰ組織中的表達(dá)情況逡逑圖３顯示了各組患者鼻腔鼻竇上皮組織病理及ｐＳ６表達(dá)情況，ｐＳ６表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞逡逑通過(guò)抗原抗體反應(yīng)而呈現(xiàn)棕黃色，ＨＰＶ＋ＮＳＥＰ患者ＰＳ６染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著逡逑２６逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 裴宇文;楊光明;曾春光;劉享波;;多層螺旋CT多平面重建在鼻腔內(nèi)翻乳頭狀瘤診斷中的價(jià)值[J];現(xiàn)代醫(yī)用影像學(xué);2018年07期

2 郭欣;馬艷麗;陳付華;;鼻內(nèi)鏡治療鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤68例臨床分析[J];四川醫(yī)學(xué);2013年10期

3 陳鷗,李桂芝,呂淑華;鼻息肉、鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤與癌三者關(guān)系的探討[J];吉林醫(yī)學(xué);1997年01期

4 張福泉,周覺初,彭培宏;內(nèi)翻乳頭狀瘤的放射治療[J];中華放射腫瘤學(xué)雜志;1995年03期

5 張秋香;;鼻內(nèi)鏡下手術(shù)配合葛根湯治療上頜竇鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤臨床觀察[J];實(shí)用中醫(yī)藥雜志;2017年08期

6 楊鑫;;鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤運(yùn)用鼻內(nèi)鏡治療的臨床效果[J];大家健康(學(xué)術(shù)版);2014年17期

7 王杰,董釧,蔡艷,付啟紅;兩種術(shù)式治療鼻腔鼻竇內(nèi)翻乳頭狀瘤療效的觀察[J];四川醫(yī)學(xué);2005年02期

8 宋偉;鼻內(nèi)鏡外科治療鼻竇內(nèi)翻乳頭狀瘤[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè));2003年02期

9 武衛(wèi),李書學(xué),王志強(qiáng);膀胱內(nèi)翻乳頭狀瘤7例報(bào)告[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;1997年04期

10 趙德明;鼻腔與鼻旁竇內(nèi)翻乳頭狀瘤的處理:放療的重要性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(臨床放射學(xué)分冊(cè));1994年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 韋笑一;;25例改良面中部翻揭手術(shù)患者前后觀察及護(hù)理[A];全國(guó)五官科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2007年

2 胡正平;;鼻腔、鼻竇內(nèi)翻乳頭狀瘤冷凍手術(shù)與單純手術(shù)療效對(duì)比分析[A];江蘇省制冷學(xué)會(huì)第四屆年會(huì)論文集[C];2000年

3 楊寧;閻艾慧;山田奏子;村田英之;友田幸一;姜學(xué)鈞;;施行雙側(cè)Killian手術(shù)的內(nèi)翻乳頭狀瘤報(bào)告[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2007年

4 張速勤;李兆基;劉鋒;;鼻腔鼻竇輪廊化在鼻部腫瘤手術(shù)中的應(yīng)用[A];第四屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C];2003年

5 張維天;殷善開;于棟楨;蘇開明;郭金寶;;經(jīng)鼻內(nèi)鏡擴(kuò)大入路顱底手術(shù)的體會(huì)[A];2010全國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

6 王小路;高建華;龍順波;單希征;;淚囊乳頭狀瘤并發(fā)慢性鼻竇炎[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 劉永亮;人乳頭狀瘤病毒感染在鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤中的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 周寧;鱗癌抗原在鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤組織中的表達(dá)及臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

2 包永新;人乳頭狀瘤病毒和p53蛋白在鼻腔鼻竇腫瘤組織中的表達(dá)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2002年

本文編號(hào)：2802775