【摘要】：目的1、探討SLIM1基因是否通過糖酵解途徑進(jìn)而對脈絡(luò)膜黑色瘤生長產(chǎn)生影響。2、探討SLIM1基因抑制脈絡(luò)膜黑色素瘤的生長是否與c-Myc介導(dǎo)調(diào)控的糖酵解有關(guān)。方法1、將處于指數(shù)生長期的MUM-2B細(xì)胞用胰酶消化后隨機(jī)分為四組,均勻鋪至4個(gè)6 cm培養(yǎng)皿中,分為ABCD四組:A組轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒;B組轉(zhuǎn)染SLIM1質(zhì)粒;C組轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒,然后加2-DG試劑;D組轉(zhuǎn)染SLIM1質(zhì)粒,然后加2-DG試劑。采用CCK-8實(shí)驗(yàn)方法檢測細(xì)胞的增殖情況;采用克隆形成實(shí)驗(yàn)方法檢測細(xì)胞的克隆形成狀況,進(jìn)而探討SLIM1基因?qū)γ}絡(luò)膜黑色瘤生長功能的影響是否與糖酵解有關(guān)。2、將處于指數(shù)生長期的MUM-2B細(xì)胞用胰酶消化后隨機(jī)分為四組,均勻鋪至4個(gè)6 cm培養(yǎng)皿中,分為ABCD四組:A組轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒;B組轉(zhuǎn)染SLIM1質(zhì)粒;C組轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒+c-Myc SiRNA;D組轉(zhuǎn)染SLIM1+c-Myc SiRNA。采用Western Blot實(shí)驗(yàn)方法檢測c-Myc蛋白的表達(dá)情況;采用CCK-8實(shí)驗(yàn)方法檢測細(xì)胞的增殖情況;采用克隆形成實(shí)驗(yàn)方法檢測細(xì)胞的克隆形成狀況;采用乳酸實(shí)驗(yàn)方法、ATP實(shí)驗(yàn)方法和葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)方法檢測各組細(xì)胞產(chǎn)生乳酸、ATP和葡萄糖攝取的能力;采用細(xì)胞外酸化率、氧消耗率實(shí)驗(yàn)方法檢測各組細(xì)胞的細(xì)胞外酸化率、氧消耗率,進(jìn)而探討SLIM1基因抑制脈絡(luò)膜黑色素瘤的生長是否與c-Myc介導(dǎo)調(diào)控的糖酵解有關(guān)。結(jié)果1、CCK-8生長曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的MUM-2B細(xì)胞相比,過表達(dá)SLIM1的MUM-2B細(xì)胞增殖能力降低;與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的MUM-2B細(xì)胞相比,加入2-DG試劑后細(xì)胞增殖能力降低;與只轉(zhuǎn)染SLIM1和空載質(zhì)粒的兩組細(xì)胞增殖能力的差異相比,加入2-DG試劑后差異變小,意味著2-DG試劑使SLIM1質(zhì)粒對MUM-2B細(xì)胞增殖的抑制能力減弱;克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的MUM-2B細(xì)胞相比,過表達(dá)SLIM1的MUM-2B細(xì)胞克隆形成能力降低;與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的MUM-2B細(xì)胞相比,加入2-DG試劑后細(xì)胞克隆形成能力降低,表現(xiàn)為克隆直徑小、克隆數(shù)量少;與只轉(zhuǎn)染SLIM1和空載質(zhì)粒的兩組細(xì)胞克隆形成能力的差異相比,加入2-DG試劑后差異變小,意味著2-DG試劑使SLIM1質(zhì)粒對脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞克隆形成的抑制能力減弱。2、Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,敲低c-Myc的兩組MUM-2B細(xì)胞內(nèi)c-Myc蛋白表達(dá)水平下降。3、CCK-8及克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,和轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的MUM-2B細(xì)胞相比,過表達(dá)SLIM1質(zhì)粒后MUM-2B細(xì)胞的增殖和克隆形成能力降低;與只轉(zhuǎn)染SLIM1和空載質(zhì)粒的兩組細(xì)胞增殖及克隆形成能力的差異相比,敲低c-Myc后兩組細(xì)胞的差異變小,表明敲低c-Myc后SLIM1質(zhì)粒抑制MUM-2B細(xì)胞的增殖及克隆形成能力減弱。4、乳酸檢測、ATP檢測和葡萄糖攝取、細(xì)胞外酸化率、氧消耗率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒組相比,過表達(dá)SLIM1質(zhì)粒后MUM-2B細(xì)胞的乳酸、ATP產(chǎn)生、葡萄糖攝取、細(xì)胞外酸化率降低,過表達(dá)SLIM1質(zhì)粒后MUM-2B細(xì)胞氧消耗率升高;與只轉(zhuǎn)染SLIM1質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒細(xì)胞的抑制乳酸、ATP產(chǎn)生和葡萄糖攝取、促進(jìn)MUM-2B細(xì)胞氧消耗率的差異相比,敲低c-Myc后兩組細(xì)胞的差異變小。結(jié)論1、SLIM1基因通過糖酵解途徑抑制脈絡(luò)膜黑色瘤生長功能。2、SLIM1基因通過糖酵解途徑抑制脈絡(luò)膜黑色素瘤的生長功能與c-Myc有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.7
【圖文】：

圖 1 SLIM1 通過糖酵解抑制 MUM-2B 細(xì)胞的增殖能力：（1）轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒；（2）轉(zhuǎn)染 SLIM1 質(zhì)粒；（3）轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒加 2-DG 試劑1 質(zhì)粒加 2-DG 試劑示與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。

SLIM1 通過糖酵解抑制 MUM-2B 細(xì)胞的克載質(zhì)粒；（2）轉(zhuǎn)染 SLIM1 質(zhì)粒；（3）轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒DG 試劑載質(zhì)粒組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。 MUM-2B 細(xì)胞的克隆形成能力的比較（ N，分組 N 細(xì)胞克隆數(shù)EVSLIM1+2-DGM1+2-DG6666586.104±3361.293±28215.494±16180.510±41F 值 92.693P 值 0.000染空載質(zhì)粒組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05討 論

圖 3 Western Blot 檢測 c-Myc 蛋白的表達(dá)水平轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒；（2）轉(zhuǎn)染 SLIM1 質(zhì)粒；（3）轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒，敲低粒，敲低 c-Myc-8 生長曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 楊秀梅;王雨生;屈小杰;段春光;徐建鋒;;內(nèi)皮祖細(xì)胞參與大鼠脈絡(luò)膜新生血管生成的可能機(jī)制[J];中華眼科雜志;2012年07期

2 王風(fēng)華;脈絡(luò)膜黑色素瘤的臨床、組織病理學(xué)特點(diǎn)及研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊;2001年06期

本文編號：2772924