【摘要】：目的1、探討SLIM1基因是否通過糖酵解途徑進而對脈絡膜黑色瘤生長產生影響。2、探討SLIM1基因抑制脈絡膜黑色素瘤的生長是否與c-Myc介導調控的糖酵解有關。方法1、將處于指數(shù)生長期的MUM-2B細胞用胰酶消化后隨機分為四組,均勻鋪至4個6 cm培養(yǎng)皿中,分為ABCD四組:A組轉染空載質粒;B組轉染SLIM1質粒;C組轉染空載質粒,然后加2-DG試劑;D組轉染SLIM1質粒,然后加2-DG試劑。采用CCK-8實驗方法檢測細胞的增殖情況;采用克隆形成實驗方法檢測細胞的克隆形成狀況,進而探討SLIM1基因對脈絡膜黑色瘤生長功能的影響是否與糖酵解有關。2、將處于指數(shù)生長期的MUM-2B細胞用胰酶消化后隨機分為四組,均勻鋪至4個6 cm培養(yǎng)皿中,分為ABCD四組:A組轉染空載質粒;B組轉染SLIM1質粒;C組轉染空載質粒+c-Myc SiRNA;D組轉染SLIM1+c-Myc SiRNA。采用Western Blot實驗方法檢測c-Myc蛋白的表達情況;采用CCK-8實驗方法檢測細胞的增殖情況;采用克隆形成實驗方法檢測細胞的克隆形成狀況;采用乳酸實驗方法、ATP實驗方法和葡萄糖攝取實驗方法檢測各組細胞產生乳酸、ATP和葡萄糖攝取的能力;采用細胞外酸化率、氧消耗率實驗方法檢測各組細胞的細胞外酸化率、氧消耗率,進而探討SLIM1基因抑制脈絡膜黑色素瘤的生長是否與c-Myc介導調控的糖酵解有關。結果1、CCK-8生長曲線實驗結果表明,與轉染空載質粒的MUM-2B細胞相比,過表達SLIM1的MUM-2B細胞增殖能力降低;與轉染空載質粒的MUM-2B細胞相比,加入2-DG試劑后細胞增殖能力降低;與只轉染SLIM1和空載質粒的兩組細胞增殖能力的差異相比,加入2-DG試劑后差異變小,意味著2-DG試劑使SLIM1質粒對MUM-2B細胞增殖的抑制能力減弱;克隆形成實驗結果表明,與轉染空載質粒的MUM-2B細胞相比,過表達SLIM1的MUM-2B細胞克隆形成能力降低;與轉染空載質粒的MUM-2B細胞相比,加入2-DG試劑后細胞克隆形成能力降低,表現(xiàn)為克隆直徑小、克隆數(shù)量少;與只轉染SLIM1和空載質粒的兩組細胞克隆形成能力的差異相比,加入2-DG試劑后差異變小,意味著2-DG試劑使SLIM1質粒對脈絡膜黑色素瘤細胞克隆形成的抑制能力減弱。2、Western Blot實驗結果表明,敲低c-Myc的兩組MUM-2B細胞內c-Myc蛋白表達水平下降。3、CCK-8及克隆形成實驗結果表明,和轉染空載質粒的MUM-2B細胞相比,過表達SLIM1質粒后MUM-2B細胞的增殖和克隆形成能力降低;與只轉染SLIM1和空載質粒的兩組細胞增殖及克隆形成能力的差異相比,敲低c-Myc后兩組細胞的差異變小,表明敲低c-Myc后SLIM1質粒抑制MUM-2B細胞的增殖及克隆形成能力減弱。4、乳酸檢測、ATP檢測和葡萄糖攝取、細胞外酸化率、氧消耗率實驗結果表明,與轉染空載質粒組相比,過表達SLIM1質粒后MUM-2B細胞的乳酸、ATP產生、葡萄糖攝取、細胞外酸化率降低,過表達SLIM1質粒后MUM-2B細胞氧消耗率升高;與只轉染SLIM1質粒和轉染空載質粒細胞的抑制乳酸、ATP產生和葡萄糖攝取、促進MUM-2B細胞氧消耗率的差異相比,敲低c-Myc后兩組細胞的差異變小。結論1、SLIM1基因通過糖酵解途徑抑制脈絡膜黑色瘤生長功能。2、SLIM1基因通過糖酵解途徑抑制脈絡膜黑色素瘤的生長功能與c-Myc有關。
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.7
【圖文】：

圖 1 SLIM1 通過糖酵解抑制 MUM-2B 細胞的增殖能力：（1）轉染空載質粒；（2）轉染 SLIM1 質粒；（3）轉染空載質粒加 2-DG 試劑1 質粒加 2-DG 試劑示與轉染空載質粒組相比，差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。

SLIM1 通過糖酵解抑制 MUM-2B 細胞的克載質粒；（2）轉染 SLIM1 質粒；（3）轉染空載質粒DG 試劑載質粒組相比，差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。 MUM-2B 細胞的克隆形成能力的比較（ N，分組 N 細胞克隆數(shù)EVSLIM1+2-DGM1+2-DG6666586.104±3361.293±28215.494±16180.510±41F 值 92.693P 值 0.000染空載質粒組相比，差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05討 論

圖 3 Western Blot 檢測 c-Myc 蛋白的表達水平轉染空載質粒；（2）轉染 SLIM1 質粒；（3）轉染空載質粒，敲低粒，敲低 c-Myc-8 生長曲線實驗結果

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 楊秀梅;王雨生;屈小杰;段春光;徐建鋒;;內皮祖細胞參與大鼠脈絡膜新生血管生成的可能機制[J];中華眼科雜志;2012年07期

2 王風華;脈絡膜黑色素瘤的臨床、組織病理學特點及研究進展[J];國外醫(yī)學.眼科學分冊;2001年06期

本文編號：2772924