【摘要】：2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)作為全球性的公共衛(wèi)生疾病,發(fā)病率呈逐年上升趨勢,其所帶來的微血管及大血管并發(fā)癥,是導(dǎo)致患者致殘、致死的主要原因,對人類的健康及生活質(zhì)量造成嚴重的威脅。因此,研究2型糖尿病的發(fā)病機制及其并發(fā)癥的危險因素顯得尤為重要。胰島素抵抗(Insulin Resistance,IR)是2型糖尿病的重要病理生理機制。肝臟胰島素抵抗在全身胰島素抵抗中起著非常重要的作用。既往研究已闡明HGF/c-Met信號通路通過調(diào)控糖代謝關(guān)鍵基因如PEPCK和G6PASE,抑制糖異生降低血糖水平改善胰島素抵抗。在前期研究中,我們利用胰島素抵抗模型小鼠,給予外源性肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)后,觀察到HGF可以顯著降低小鼠空腹血糖及空腹胰島素水平,又可減輕肝臟脂質(zhì)含量及改善肝功能,提示HGF/c-Met信號通路參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝,然而HGF是通過何種機制參與脂代謝需進一步明確。因此,本研究中我們進行了后續(xù)的分子機制方面研究,在基因和蛋白水平上證實HGF/c-Met信號通路可通過調(diào)控脂代謝相關(guān)基因FXR-SHP/SREBP-1c及FXR/PPARα改善脂代謝,從而緩解肝臟胰島素抵抗。在糖尿病并發(fā)癥方面,我們發(fā)現(xiàn)在男性2型糖尿病患者中,糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)除了與糖尿病的病程(diabetes duration)、血壓(blood pressure,BP)、空腹血糖(fasting glucose)、糖化血紅蛋白(Hb A1c)、體重指數(shù)(Body Mass Index,BMI)、尿微量白蛋白與肌酐的比值(ACR)有關(guān)以外,還與性激素相關(guān),尤其是黃體生成素(LH)。我們首次發(fā)現(xiàn)LH是糖尿病視網(wǎng)膜病變的獨立危險因素。在分層分析中我們發(fā)現(xiàn)隨著LH的升高DR發(fā)病率呈上升趨勢。因此,在本研究中我們明確了HGF/c-Met信號通路調(diào)節(jié)脂代謝的相關(guān)機制和糖尿病視網(wǎng)膜病變的危險因素。HGF/c-Met信號通路通過調(diào)控脂代謝相關(guān)基因FXR-SHP/SREBP-1c及FXR/PPARα來抑制脂質(zhì)的生成,促進脂肪酸的分解,降低血脂改善肝功能,從而緩解肝臟胰島素抵抗。在糖尿病視網(wǎng)膜并發(fā)癥方面,我們觀察到在男性糖尿病患者中隨著血清LH的升高,糖尿病視網(wǎng)膜患病率呈上升趨勢�；貧w分析發(fā)現(xiàn)LH是男性糖尿病視網(wǎng)膜病變的獨立危險因素,其可能成為糖尿病視網(wǎng)膜病變的預(yù)測因素及新的治療靶點。目的2型糖尿病常伴有脂肪肝。肝臟內(nèi)的脂質(zhì)累積被認為是胰島素抵抗的風險因素之一。肝細胞生長因子(HGF)被常用于治療肝功能障礙,既往研究已闡明HGF/c-Met信號通路通過調(diào)控糖代謝關(guān)鍵基因如PEPCK和G6PASE抑制糖異生降低血糖水平改善胰島素抵抗。然而,HGF對肝臟脂質(zhì)代謝的作用和機制尚不完全清楚。方法在我們前期的研究基礎(chǔ)上,采用C57BL/6小鼠及Hep G2細胞,分別誘導(dǎo)成胰島素抵抗模型小鼠及建立Hep G2細胞胰島素抵抗模型,通過QPCR及Western Blot兩種實驗方法,對比HGF治療前后小鼠肝臟中SREBP1-c及其靶基因FAS、PPAR-α的m RNA及蛋白表達情況,為進一步明確調(diào)控SREBP1-c/FAS及PPAR-α的上游核受體,我們選取了SREBP1-c/FAS及PPAR-α的上游FXR核受體(farnesoid X receptor),對比FXR及其靶基因SHP的m RNA及蛋白水平在HGF治療前后的變化,以明確HGF參與肝臟脂質(zhì)代謝的可能機制。結(jié)果HGF治療后小鼠肝臟中SREBP1-c及其靶基因FAS的m RNA表達量明顯低于未治療組。Western Blot同樣證實SREBP1-c及其靶基因FAS的蛋白水平有同樣的趨勢,結(jié)果均有統(tǒng)計學意義。HGF治療后小鼠肝臟中PPAR-α的m RNA表達量明顯高于未治療組,在蛋白水平也觀察到類似的結(jié)果,均有統(tǒng)計學差異。另外,我們的研究還發(fā)現(xiàn),HGF可明顯升高肝臟中FXR及SHP的m RNA及蛋白的表達,可能通過調(diào)控肝臟中FXR-SHP/SREBP-1c-FAS及FXR/PPARα來抑制脂質(zhì)的生成、促進脂肪酸的分解,從而調(diào)節(jié)高脂血癥、改善肝功能、緩解胰島素抵抗。結(jié)論HGF治療可通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝改善肝臟胰島素抵抗和脂肪變性。目的糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病的常見微血管并發(fā)癥,它是中年和老年人視力喪失的主要原因。既往研究已經(jīng)證實多種危險因素與糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生相關(guān),黃體生成素(LH)被發(fā)現(xiàn)存在于人眼中,且它的受體(LHR)在全身多種臟器包括視網(wǎng)膜中均有表達。因此,本研究在于探討血液中的黃體生成素與男性糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)系。方法收集2016年01月至2018年01月住院的男性2型糖尿病患者724例,對其臨床資料進行回顧性分析。采用國際上通用的《糖尿病視網(wǎng)膜病變的國際臨床分級標準》,通過免散瞳眼底照相檢查,將724例患者分為伴糖尿病視網(wǎng)膜病變組(DR組)與不伴糖尿病視網(wǎng)膜病變組(非DR組),分層分析中進一步將DR組分為輕度非增殖型糖尿病視網(wǎng)膜病變(Mild NPDR)、中度非增殖型糖尿病視網(wǎng)膜病變(Moderate NPDR)及重度非增殖型糖尿病視網(wǎng)膜病變(VTDR),同時對LH水平采用三分位法進行比較,分為低三分位組(Tertile1,T1)、中三分位組(Tertile2,T2)及高三分位組(Tertile3,T3),通過比較臨床資料來觀察各組LH與DR的關(guān)系。結(jié)果本研究共納入724名男性2型糖尿病患者,根據(jù)免散瞳眼底照相將受試者分為DR組與非DR組,DR組平均年齡54.3±10.3歲,非DR組平均年齡51.3±11.7歲。與非DR組相比,DR組LH水平更高(P0.05)。在分層分析中我們發(fā)現(xiàn)黃體生成素在Moderate NPDR組及VTDR組出現(xiàn)不同程度的下降,但并未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學差異。在三分位法比較中發(fā)現(xiàn)隨著黃體生成素水平的升高,三組DR患病率都呈現(xiàn)出上升的趨勢。進一步二元logistic回歸分析顯示,黃體生成素也是糖尿病視網(wǎng)膜病變的獨立危險因素。結(jié)論本研究證實血清中的LH水平的升高與男性2糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展及嚴重程度顯著相關(guān),為男性糖尿病視網(wǎng)膜病變患者提供新的治療靶點。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R587.2;R774.1
【圖文】：

圖 1 HGF 的基本生理功能過與 c-Met 受體結(jié)合介導(dǎo)其潛在的生物活性（如增殖/存活et 原癌基因編碼[33]。c-Met 受體是由α鏈（50kDa）和β鏈（，它們通過二硫鍵連接在一起。α鏈高度糖基化并暴露在細跨膜蛋白，含有激酶結(jié)構(gòu)域，包括酪氨酸自身磷酸化位點]。與受體酪氨酸激酶（RTK）的任何其他成員相比，c-M體結(jié)構(gòu)和激酶結(jié)構(gòu)域的序列方面與 INSR 的關(guān)系更密切[6，c-Met 活化和隨后的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)依賴于三磷酸腺苷（ATP）和促進催化結(jié)構(gòu)域的受體二聚化和反式磷酸化。此外，HGF細胞內(nèi)部分信號磷酸化，例如：PI3K（p85 亞基）、Gap、Ras酸激酶、Grb-2、Gab-1、IRS-1、IRS-2[52，63]。例如，F(xiàn)中的 c-Met 活化后可誘導(dǎo) c-Met-INSR 復(fù)合物的形成，其刺

圖 2 肝細胞中 c-Met/INSR 的交互作用中調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的作用明 HGF 對葡萄糖轉(zhuǎn)運和代謝具有調(diào)節(jié)作用。在小 GLUT-2 和葡萄糖激酶的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細胞中葡萄糖，在成年鼠β細胞中消除 HGF/c-Met 信號傳導(dǎo)可導(dǎo)致降低和葡萄糖刺激的胰島素分泌受損[33]。HGF 還糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白和 GLUT-5 的功能[34]。此外，胞膜，并通過 3T3-L1 脂肪細胞中 PI3K 的活化增加HGF 能刺激肝葡萄糖攝取并抑制肝葡萄糖合成[3GF 治療后可明顯降低高脂喂養(yǎng)小鼠的空腹血糖、空同時可以升高胰島素敏感性指數(shù)。我們進一步的機-SHP 信號通路參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)生成，促進脂質(zhì)

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本文編號：2730156