【摘要】：背景耳聾是僅次于肢體殘疾的第二大殘疾疾病,全球約有4.66億人患有致殘性聽力喪失,其中,由于耳蝸毛細(xì)胞受損或缺陷造成的感音神經(jīng)性聾占90%。哺乳動物的聽覺感覺器官是Corti器,它由一組特殊的毛細(xì)胞和支持細(xì)胞組成,內(nèi)耳毛細(xì)胞對聽覺的產(chǎn)生至關(guān)重要,而且大部分聽力障礙都是因毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的缺失引起,由于毛細(xì)胞無法再生,所以毛細(xì)胞的損傷會導(dǎo)致永久性聽力損傷。Tmem30a是大部分P4-ATPase的β亞基,P4-ATPase對于維持質(zhì)膜磷脂的不對稱分布、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性、囊泡蛋白轉(zhuǎn)運、建立細(xì)胞極性、細(xì)胞分化、調(diào)節(jié)膜蛋白功能等方面具有重要作用。既往研究表明P4-ATPase對于視覺的形成以及神經(jīng)系統(tǒng)的功能維持具有重要作用,而且已有報道Atp8a2和Atp8b1基因敲除會導(dǎo)致小鼠聽閾升高,但它們對聽覺系統(tǒng)造成的損傷和損傷機(jī)制尚缺乏研究,而作為與其相互作用、共同發(fā)揮P4-ATPase功能的β亞基——Tmem30a在聽覺系統(tǒng)功能也尚不清楚。目的本研究希望通過內(nèi)耳特異性敲除Tmem30a,探究其對聽覺系統(tǒng)的影響及對聽覺系統(tǒng)的損傷機(jī)制。方法將Gfi~(Cre/-)小鼠與Tmem30a~(loxp/loxp)小鼠進(jìn)行雜交后,再將雜交得到的子代進(jìn)行配種,就可得到Tmem30a~(loxp/loxp)Gfi ~(Cre/-)的內(nèi)耳特異性Tmem30a敲除小鼠。通過Genotyping和qPCR的方法對敲除小鼠進(jìn)行篩選和敲除效率的確定;通過ABR聽覺電生理實驗對小鼠聽力進(jìn)行檢測;用免疫組織化學(xué)進(jìn)行染色對Tmem30a在內(nèi)耳進(jìn)行定位;用耳蝸毛細(xì)胞鋪片的方法對毛細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行觀察;用掃描電鏡的方法對毛細(xì)胞上纖毛的形態(tài)、排列情況進(jìn)行觀察;最后通過免疫組織化學(xué)的方法對毛細(xì)胞缺失的機(jī)制進(jìn)行探討。結(jié)果本研究發(fā)現(xiàn)Tmem30a分布在內(nèi)耳毛細(xì)胞上,ABR聽覺電生理結(jié)果表明,內(nèi)耳特異性敲除Tmem30a基因會導(dǎo)致小鼠聽力的喪失。毛細(xì)胞鋪片結(jié)果顯示,正常小鼠毛細(xì)胞排列整齊,基因敲除小鼠毛細(xì)胞排列紊亂并且出現(xiàn)了大面積缺失。掃描電鏡結(jié)果顯示,與正常小鼠相比,基因敲除小鼠毛細(xì)胞上的纖毛排列紊亂并且出現(xiàn)了大量絮狀連接。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,敲除小鼠的毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Chop染色呈陽性,而正常小鼠沒有發(fā)現(xiàn)陽性染色。結(jié)論Tmem30a基因敲除會導(dǎo)致小鼠聽力的喪失、毛細(xì)胞和纖毛的排列紊亂甚至缺失,這種缺失是通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑發(fā)生的。說明Tmem30a對于聽力的產(chǎn)生、聽覺系統(tǒng)的發(fā)育、毛細(xì)胞及纖毛的發(fā)育和形態(tài)維持等方面具有重要作用。
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R764
【圖文】：

聽覺系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)

P4-ATPase的結(jié)構(gòu)示意圖

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王繼;張鐵松;;遺傳性耳聾的基因研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 賀祖宏;FoxG1在小鼠耳蝸毛細(xì)胞發(fā)育及存活中的機(jī)制研究[D];東南大學(xué);2016年

本文編號：2730179