【摘要】：目的:本研究目的在于檢測(cè)阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣病人血漿外泌體中mi RNA-33b-3p表達(dá)情況,探究外泌體mi RNA-33b-3p/AXL在其影響肺腺癌細(xì)胞增殖以及遷移能力中的作用。方法:(1)收集OSA病人以及健康體檢者外周血,從中分離外泌體,以Western blot檢測(cè)其特殊外泌體蛋白Hsp70、CD63、CD9的表達(dá),再通過(guò)Nanosight納米顆粒分析技術(shù)和透射電鏡鑒定其形態(tài),同時(shí)進(jìn)一步使用q PCR檢測(cè)兩組外泌體mi RNA-33b-3p的表達(dá)差異。(2)通過(guò)PKH26標(biāo)記外泌體與肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞系共同孵育鑒定外泌體可被A549細(xì)胞攝入發(fā)揮功能。同時(shí)用熒光標(biāo)記mi RNA-33b-3p轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,取其包含特殊mi RNA的外泌體與普通A549細(xì)胞共同孵育。(3)將OSA病人組與健康人組外泌體分別孵育A549細(xì)胞,對(duì)比檢測(cè)其對(duì)應(yīng)的mi RNA-33b-3p水平與細(xì)胞增殖、遷移能力。(4)為驗(yàn)證mi RNA-33b-3p在影響A549細(xì)胞惡性進(jìn)展的作用,以mi RNA-33b-3p模擬物轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,對(duì)比對(duì)照組檢測(cè)其增殖、遷移能力。(5)為驗(yàn)證AXL為mi RNA-33b-3p作用蛋白并在mi RNA-33b-3p引起A549細(xì)胞惡性增加中的作用,行熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。同時(shí)在A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染mi RNA-33b-3p抑制劑減弱其調(diào)節(jié)功能的同時(shí),干擾AXL蛋白的表達(dá),探究不同情況下靶細(xì)胞增殖和遷移能力以此進(jìn)一步驗(yàn)證AXL在mi RNA-33b-3p影響A549細(xì)胞惡性進(jìn)展通路中的作用。結(jié)果:(1)從OSA病人及健康體檢者外周血漿分離外泌體,可見(jiàn)其直徑集中在130nm左右,WB檢測(cè)兩組均可見(jiàn)CD63、CD9、Hsp70表達(dá)。q PCR檢測(cè)OSA病人表達(dá)mi RNA-33b-3p較健康體檢組少。(2)外泌體mi RNA可隨外泌體一起被A549細(xì)胞攝入。(3)OSA病人外周血外泌體較健康體檢者可促進(jìn)其共同孵育靶細(xì)胞的增殖能力及遷移能力。(4)mi RNA-33b-3p可減弱A549細(xì)胞的增殖和遷移能力。(5)AXL蛋白是miRNA-33b-3p減弱A549細(xì)胞惡性進(jìn)展的直接作用蛋白。結(jié)論:OSA病人外周血外泌體mi RNA-33b-3p相對(duì)于健康人表達(dá)減少,外泌體-mi RNA-33b-3p/AXL通路是OSA病人促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞增殖以及遷移增加的機(jī)制之一。
【圖文】：

圖 1 A：外泌體電鏡下形態(tài)；B：OSA 病人與健康體顆粒跟蹤分析結(jié)果；C：OSA 組與正常組外泌體蛋白D：正常組與 OSA 組外泌體 miRNA-33b-3p 表達(dá)差3.2 外泌體及其內(nèi)容 miRNA-33b-3p 可以由外泌體可在細(xì)胞分泌后隨血液流遍全身各處，為攝取，研究中將 PKH26 與外泌體共同孵育，并將此育，共聚焦顯微鏡下可見(jiàn) A549 細(xì)胞含有特殊紅色熒胞攝入了較多外泌體。miRNA 是一種容易被環(huán)境降泌體中，可以對(duì)其有一定的保護(hù)作用。為進(jìn)一步驗(yàn)證泌體一起進(jìn)入靶細(xì)胞，我們將熒光標(biāo)記的 miR-33b 轉(zhuǎn)生的外泌體，再與普通 A549 細(xì)胞共同孵育，在共A549 細(xì)胞，可見(jiàn)其內(nèi)有紅色熒光（圖 2B），，表明 m

圖 2 A:與特殊外泌體共同孵育后共聚焦圖像；B：A549 與含紅色熒光標(biāo)記miR-33b 外泌體共聚焦顯微鏡圖像3.3 OSA 病人外周血外泌體可促進(jìn) A549 細(xì)胞的增殖能力及遷移能力將 OSA 病人外周血外泌體與 A549 細(xì)胞共同孵育，然后通過(guò) CCK8 實(shí)驗(yàn)Transwell 實(shí)驗(yàn)可知，相對(duì)于健康對(duì)照組外泌體，其可顯著促進(jìn) A549 細(xì)胞的增殖能力和遷移能力。而且可見(jiàn)其中 OSA 外泌體孵育組細(xì)胞中 miRNA-33b 表達(dá)量小于健康對(duì)照組。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R766;R734.2

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本文編號(hào)：2707173