【摘要】：目的:探討不同濃度PM2.5對人正常鼻粘膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Occludin分布及表達(dá)的影響。方法:體外培養(yǎng)正常人鼻黏膜上皮細(xì)胞系(HNEpC),并用不同濃度PM2.5分別干預(yù)細(xì)胞24、48小時(shí),采用CCK-8法檢測細(xì)胞活性,選取200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml三個(gè)濃度的PM2.5作為實(shí)驗(yàn)組干預(yù)細(xì)胞;采用免疫熒光法、Western-Blot及實(shí)時(shí)熒光定量PCR分別檢測PM2.5干預(yù)后細(xì)胞緊密連接蛋白Occludin的蛋白分布、表達(dá)及相關(guān)mRNA水平變化。結(jié)果:與對照組相比,24h、48h不同濃度PM2.5干預(yù)鼻粘膜上皮細(xì)胞后細(xì)胞活性均降低(F_(24h)=36.25、F_(48h)=20.26,P0.001),且24h、48h細(xì)胞活性與PM2.5濃度呈負(fù)相關(guān);免疫熒光法檢測發(fā)現(xiàn),對照組細(xì)胞為圓形,排列緊密,Occludin呈蜂窩狀,分布均勻,連接緊密;200μg/mlPM2.5組較對照組細(xì)胞形態(tài)稍變長,Occludin分布無明顯改變;400μg/mlPM2.5組,細(xì)胞數(shù)量較前略減少,細(xì)胞形態(tài)較前更為細(xì)長,細(xì)胞膜及細(xì)胞連接間出現(xiàn)少量空泡;500μg/mlPM2.5組,視野中細(xì)胞數(shù)量明顯減少,形態(tài)較前更為細(xì)長,呈長梭形,細(xì)胞膜出現(xiàn)大量空泡,且Occludin結(jié)構(gòu)斷裂;Western-Blot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,除24h-200μg/mlPM2.5組外,其余各組Occludin及相關(guān)mRNA相對表達(dá)量均下調(diào),24h、48h Occludin表達(dá)量呈時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論:PM2.5可降低正常人鼻黏膜上皮細(xì)胞HNEpC活性、同時(shí)可以使細(xì)胞緊連接Occludin分布、表達(dá)及相關(guān)mRNA表達(dá)降低,這可能是導(dǎo)致過敏性鼻炎的發(fā)生的一個(gè)機(jī)制。
【圖文】：

1 CCK-8 法檢測不同濃度 PM2.5 對細(xì)胞活性的影響細(xì)胞活性=(OD實(shí)驗(yàn)組-OD空白組)/ (OD對照組-OD空白組)*100%，每組細(xì)胞設(shè) 3 個(gè)并計(jì)算吸光度平均值。與對照組相比（圖 2-1），24h、48h 各組 PM2.5 濃度后對細(xì)胞活性的影響較對照組降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F24h=36.F48h=20.26，P<0.001）,采用 Spearman 相關(guān)分析判斷 24h、48h 各濃度 PM預(yù)與細(xì)胞活性的關(guān)系，結(jié)果顯示二者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（24h：r=-0.883，，P<0.001，r=-0.759，P<0.001），即干預(yù)濃度越高、細(xì)胞活性越低。根據(jù)細(xì)胞活性，并相關(guān)文獻(xiàn)[11]，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇 200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml 三個(gè)濃度 PM為實(shí)驗(yàn)組。圖 2-1 PM2.5 對鼻粘膜細(xì)胞活性的影響

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2 免疫熒光檢測 Occludin 蛋白分布不同濃度 PM2.5 刺激細(xì)胞 24h 后，特異性抗體進(jìn)行免疫熒光染色，共聚焦顯微鏡下觀察（圖 2-2），對照組細(xì)胞為圓形，排列緊密，Occludin 呈蜂窩狀，分布均勻，連接緊密；200μg/mlPM2.5 組較對照組細(xì)胞形態(tài)稍變長，Occludin 分布無明顯改變；400μg/ml 組，細(xì)胞數(shù)量較前略減少，細(xì)胞形態(tài)較前更為細(xì)長，細(xì)胞膜及細(xì)胞連接間出現(xiàn)少量空泡；500μg/ml 組，視野中細(xì)胞數(shù)量明顯減少，形態(tài)較前更為細(xì)長，呈長梭形，細(xì)胞膜出現(xiàn)大量空泡，且 Occludin 結(jié)構(gòu)斷裂。圖 2-2 PM 2.5 對鼻粘膜細(xì)胞緊密連接 Occludin 形態(tài)的影響
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R765

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本文編號(hào)：2694181