【摘要】：目的:探討不同濃度PM2.5對人正常鼻粘膜上皮細胞緊密連接蛋白Occludin分布及表達的影響。方法:體外培養(yǎng)正常人鼻黏膜上皮細胞系(HNEpC),并用不同濃度PM2.5分別干預細胞24、48小時,采用CCK-8法檢測細胞活性,選取200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml三個濃度的PM2.5作為實驗組干預細胞;采用免疫熒光法、Western-Blot及實時熒光定量PCR分別檢測PM2.5干預后細胞緊密連接蛋白Occludin的蛋白分布、表達及相關mRNA水平變化。結果:與對照組相比,24h、48h不同濃度PM2.5干預鼻粘膜上皮細胞后細胞活性均降低(F_(24h)=36.25、F_(48h)=20.26,P0.001),且24h、48h細胞活性與PM2.5濃度呈負相關;免疫熒光法檢測發(fā)現(xiàn),對照組細胞為圓形,排列緊密,Occludin呈蜂窩狀,分布均勻,連接緊密;200μg/mlPM2.5組較對照組細胞形態(tài)稍變長,Occludin分布無明顯改變;400μg/mlPM2.5組,細胞數(shù)量較前略減少,細胞形態(tài)較前更為細長,細胞膜及細胞連接間出現(xiàn)少量空泡;500μg/mlPM2.5組,視野中細胞數(shù)量明顯減少,形態(tài)較前更為細長,呈長梭形,細胞膜出現(xiàn)大量空泡,且Occludin結構斷裂;Western-Blot、實時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,除24h-200μg/mlPM2.5組外,其余各組Occludin及相關mRNA相對表達量均下調,24h、48h Occludin表達量呈時間-效應關系。結論:PM2.5可降低正常人鼻黏膜上皮細胞HNEpC活性、同時可以使細胞緊連接Occludin分布、表達及相關mRNA表達降低,這可能是導致過敏性鼻炎的發(fā)生的一個機制。
【圖文】：

1 CCK-8 法檢測不同濃度 PM2.5 對細胞活性的影響細胞活性=(OD實驗組-OD空白組)/ (OD對照組-OD空白組)*100%，每組細胞設 3 個并計算吸光度平均值。與對照組相比（圖 2-1），24h、48h 各組 PM2.5 濃度后對細胞活性的影響較對照組降低，差異具有統(tǒng)計學意義（F24h=36.F48h=20.26，P<0.001）,采用 Spearman 相關分析判斷 24h、48h 各濃度 PM預與細胞活性的關系，結果顯示二者呈負相關關系（24h：r=-0.883，，P<0.001，r=-0.759，P<0.001），即干預濃度越高、細胞活性越低。根據細胞活性，并相關文獻[11]，后續(xù)實驗選擇 200μg/ml、400μg/ml、500μg/ml 三個濃度 PM為實驗組。圖 2-1 PM2.5 對鼻粘膜細胞活性的影響

山西醫(yī)科大學碩士學位論文2 免疫熒光檢測 Occludin 蛋白分布不同濃度 PM2.5 刺激細胞 24h 后，特異性抗體進行免疫熒光染色，共聚焦顯微鏡下觀察（圖 2-2），對照組細胞為圓形，排列緊密，Occludin 呈蜂窩狀，分布均勻，連接緊密；200μg/mlPM2.5 組較對照組細胞形態(tài)稍變長，Occludin 分布無明顯改變；400μg/ml 組，細胞數(shù)量較前略減少，細胞形態(tài)較前更為細長，細胞膜及細胞連接間出現(xiàn)少量空泡；500μg/ml 組，視野中細胞數(shù)量明顯減少，形態(tài)較前更為細長，呈長梭形，細胞膜出現(xiàn)大量空泡，且 Occludin 結構斷裂。圖 2-2 PM 2.5 對鼻粘膜細胞緊密連接 Occludin 形態(tài)的影響
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R765

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本文編號：2694181