【摘要】：目的探討DKK1通過Wnt/β-catenin信號通路對人晶狀體上皮細(xì)胞(LECs)增殖的影響及其可能的作用機(jī)制,為晶狀體后囊膜混濁(PCO)的臨床治療提供新的靶點(diǎn)。方法人LECs系SRA 01/04細(xì)胞為研究對象,實驗分為3組:Wnt3a過表達(dá)組,DKK1組和對照組。Wnt3a過表達(dá)組采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染技術(shù)將Wnt3a cDNA表達(dá)載體瞬時轉(zhuǎn)染入人LECs系SRA 01/04細(xì)胞中,構(gòu)建PCO的細(xì)胞模型。DKK1組在轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt3a cDNA表達(dá)載體48 h后加入100 ng/mL DKK1,對照組轉(zhuǎn)染pcDNA3-HA表達(dá)載體。采用Western blot技術(shù)驗證載體在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá);CCK-8實驗檢測DKK1對SRA 01/04細(xì)胞增殖能力的影響;應(yīng)用免疫熒光法檢測Wnt3a過表達(dá)后β-catenin表達(dá)的定位變化;采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測Wnt3a過表達(dá)后增生細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白表達(dá)的變化;Western blot法檢測Wnt3a過表達(dá)對Wnt/β-catenin下游信號分子Cyclin D1和C-myc蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果Western blot檢測證實,轉(zhuǎn)染pcDNA3-HA表達(dá)載體后,SRA 01/04細(xì)胞內(nèi)Wnt3a蛋白表達(dá)明顯升高。CCK-8實驗結(jié)果顯示,對照組、Wnt3a過表達(dá)組及DKK1組細(xì)胞的平均吸光度(A)值間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F_(分組)=10.91,P=0.003),不同時間點(diǎn)兩組細(xì)胞的平均吸光度(A)值差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義(F_(時間)=6.041,P=0.025)。DKK1組SRA 01/04細(xì)胞PCNA蛋白表達(dá)陽性率為(14.2%±2.3%),明顯低于Wnt3a過表達(dá)組的43.4%±5.4%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a過表達(dá)組細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中,而在對照組僅出現(xiàn)于細(xì)胞質(zhì)之中,DKK1組β-catenin蛋白主要分布于細(xì)胞質(zhì)中,少量分布于細(xì)胞核中。Western blot檢測DKK1組Wnt/β-catenin信號通路靶蛋白Cyclin D1和C-myc蛋白表達(dá)明顯低于Wnt3a過表達(dá)組。結(jié)論在SRA01/04細(xì)胞中,DKK1抑制Wnt3a過表達(dá)誘導(dǎo)的Wnt/β-catenin信號通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和C-myc表達(dá)下調(diào),抑制人LECs的增生。
【圖文】：

1：對照組；2：Wnt3a 過表達(dá)組圖 1 pcDNA3-HA/SRA01/04 及 Wnt3a/SRA01/04 細(xì)胞中 Wnt3a 蛋白的表達(dá)2 各組細(xì)胞增生值比較 CCK-8 實驗結(jié)果顯示，，對照組、Wnt3a 過表達(dá)組及 DK

1：對照組；2：Wnt3a 過表達(dá)組；3：DKK1 組圖 2 CCK-8 實驗檢測各組細(xì)胞在第 1,2,3,4,5 天的細(xì)胞增殖能力表 1 各組細(xì)胞不同時間的平均吸光度（A）值（_x±s）不同時間吸光度（A）值
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R77

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 熊煒;唐羅生;賈松柏;;人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡時細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶表達(dá)的變化[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2007年17期

2 辛?xí)匀?TGF-β及其對晶狀體上皮的影響[J];青海醫(yī)藥雜志;2003年05期

3 彭惠,李平華,羅莉霞,駱云鵬,湯為學(xué);堿性成纖維細(xì)胞生長因子對兔晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響[J];眼科新進(jìn)展;2001年03期

4 高福祿,王仲濤,吳淑蘭,王樹娥,李向印,李淑榮,趙玉珍,劉貴生,楊書立,趙亮;對人胎兒晶狀體上皮的超微結(jié)構(gòu)研究[J];眼科研究;1988年04期

5 吳俊輝;黃書偉;王映芬;;人體白內(nèi)障晶狀體掃描電鏡觀察[J];湛江醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1988年04期

6 武莉莉;晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2003年S1期

7 林瑤;黃秀榕;;晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年01期

8 羅文娟;王云霄;閻洪祿;王傳富;;維生素C抑制晶狀體上皮細(xì)胞凋亡(英文)[J];中國臨床康復(fù);2006年26期

9 孫倬;;晶狀體上皮源生長因子與小鼠真菌性角膜炎相關(guān)性的研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年14期

10 辛?xí)匀?黎衛(wèi)平;紫外線誘導(dǎo)晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的實驗研究[J];眼外傷職業(yè)眼病雜志.附眼科手術(shù);2003年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 玉玨;張勁松;;凝血酶對兔晶狀體上皮細(xì)胞增殖作用的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

2 黃秀榕;祁明信;李坤鵬;陳義;;新型生物活性物質(zhì)尾加壓素Ⅱ促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞增殖的實驗研究[A];第九屆中國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

3 吳紅;閻洪祿;;吲哚青綠對晶狀體上皮細(xì)胞增殖影響的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

4 葉盼盼;姚克;譚健;湯霞靖;;轉(zhuǎn)化生長因子β_2對晶狀體上皮細(xì)胞增殖和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的實驗研究[A];2006年浙江省眼科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

5 張莉;王寧利;張偉;常智杰;;氧化還原信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的調(diào)控作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

6 裴澄;李晶明;孫乃學(xué);;環(huán)孢霉素A納米粒對體外兔晶狀體上皮細(xì)胞增殖的抑制作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

7 祁明信;黃秀榕;李坤鵬;陳義;;尾加壓素Ⅱ促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞增殖的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[A];第九屆中國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

8 黃秀榕;祁明信;李坤鵬;陳義;;尾加壓素Ⅱ體外促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞增殖的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

9 劉紅玲;傅少穎;張曉梅;烏蘭;;雷帕霉素對兔晶狀體上皮細(xì)胞增殖、移行、分泌細(xì)胞外基質(zhì)的離體研究[A];第十屆全國中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)會議暨第五屆海峽眼科學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2011年

10 方艷文;盧奕;莫曉芬;田潔;;BAX基因轉(zhuǎn)染抑制人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 本報記者 張佳星;修復(fù)你的眼 干細(xì)胞有股巧勁兒[N];科技日報;2018年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 董媛;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控晶狀體上皮的生物學(xué)行為參與白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2019年

2 張瑞君;PKB及其調(diào)節(jié)因子FGF、PTEN在晶狀體上皮細(xì)胞增殖中的作用[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

3 張雪巖;HSP_（27）對氧化損傷的人晶狀體上皮細(xì)胞保護(hù)作用的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

4 譚健;轉(zhuǎn)化生長因子β_2誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡及侵襲過程中的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2007年

5 方艷文;BAX基因轉(zhuǎn)染抑制人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

6 韓梅;脂質(zhì)體介導(dǎo)的TGF-β1基因轉(zhuǎn)染抑制人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

7 葉盼盼;轉(zhuǎn)化生長因子β_2誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2008年

8 李桂榮;老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)因素的探討[D];吉林大學(xué);2008年

9 李元彬;miRNA調(diào)控晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2016年

10 黃珠;自噬在年齡相關(guān)性白內(nèi)障人晶狀體上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張利民;Dickkopf-1對人晶狀體上皮細(xì)胞增生的抑制作用及其機(jī)制的實驗研究[D];內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué);2019年

2 楊天恒;AKT蛋白激酶調(diào)控人類晶狀體上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的功能初探[D];湖南師范大學(xué);2017年

3 宋夢;miR-155抑制HG誘導(dǎo)的晶狀體上皮細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

4 陳曦;衰老標(biāo)記蛋白30對人晶狀體上皮細(xì)胞株SRA01/04增殖和凋亡的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

5 程雅蘭;Importinα3蛋白在晶狀體上皮細(xì)胞衰老及凋亡中的作用及其調(diào)控機(jī)制探索[D];浙江大學(xué);2018年

6 朱麗華;β-酪啡肽-7通過增強(qiáng)Foxo1表達(dá)及核易位對人晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[D];錦州醫(yī)科大學(xué);2018年

7 徐曼華;非瑟酮對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

8 任玉玲;雌激素對過氧化氫誘導(dǎo)大鼠晶狀體上皮細(xì)胞調(diào)亡的抑制作用的實驗研究[D];四川大學(xué);2005年

9 譚健;線粒體跨膜通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔調(diào)控兔晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的研究[D];浙江大學(xué);2004年

10 張嬌;PTEN在兔晶狀體上皮細(xì)胞增殖中的表達(dá)及意義[D];中國醫(yī)科大學(xué);2003年

本文編號：2693948