【摘要】：目的探討DKK1通過Wnt/β-catenin信號通路對人晶狀體上皮細(xì)胞(LECs)增殖的影響及其可能的作用機(jī)制,為晶狀體后囊膜混濁(PCO)的臨床治療提供新的靶點(diǎn)。方法人LECs系SRA 01/04細(xì)胞為研究對象,實(shí)驗(yàn)分為3組:Wnt3a過表達(dá)組,DKK1組和對照組。Wnt3a過表達(dá)組采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染技術(shù)將Wnt3a cDNA表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入人LECs系SRA 01/04細(xì)胞中,構(gòu)建PCO的細(xì)胞模型。DKK1組在轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt3a cDNA表達(dá)載體48 h后加入100 ng/mL DKK1,對照組轉(zhuǎn)染pcDNA3-HA表達(dá)載體。采用Western blot技術(shù)驗(yàn)證載體在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá);CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測DKK1對SRA 01/04細(xì)胞增殖能力的影響;應(yīng)用免疫熒光法檢測Wnt3a過表達(dá)后β-catenin表達(dá)的定位變化;采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測Wnt3a過表達(dá)后增生細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白表達(dá)的變化;Western blot法檢測Wnt3a過表達(dá)對Wnt/β-catenin下游信號分子Cyclin D1和C-myc蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果Western blot檢測證實(shí),轉(zhuǎn)染pcDNA3-HA表達(dá)載體后,SRA 01/04細(xì)胞內(nèi)Wnt3a蛋白表達(dá)明顯升高。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,對照組、Wnt3a過表達(dá)組及DKK1組細(xì)胞的平均吸光度(A)值間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F_(分組)=10.91,P=0.003),不同時(shí)間點(diǎn)兩組細(xì)胞的平均吸光度(A)值差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F_(時(shí)間)=6.041,P=0.025)。DKK1組SRA 01/04細(xì)胞PCNA蛋白表達(dá)陽性率為(14.2%±2.3%),明顯低于Wnt3a過表達(dá)組的43.4%±5.4%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a過表達(dá)組細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中,而在對照組僅出現(xiàn)于細(xì)胞質(zhì)之中,DKK1組β-catenin蛋白主要分布于細(xì)胞質(zhì)中,少量分布于細(xì)胞核中。Western blot檢測DKK1組Wnt/β-catenin信號通路靶蛋白Cyclin D1和C-myc蛋白表達(dá)明顯低于Wnt3a過表達(dá)組。結(jié)論在SRA01/04細(xì)胞中,DKK1抑制Wnt3a過表達(dá)誘導(dǎo)的Wnt/β-catenin信號通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和C-myc表達(dá)下調(diào),抑制人LECs的增生。
【圖文】：

1：對照組；2：Wnt3a 過表達(dá)組圖 1 pcDNA3-HA/SRA01/04 及 Wnt3a/SRA01/04 細(xì)胞中 Wnt3a 蛋白的表達(dá)2 各組細(xì)胞增生值比較 CCK-8 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，，對照組、Wnt3a 過表達(dá)組及 DK

1：對照組；2：Wnt3a 過表達(dá)組；3：DKK1 組圖 2 CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞在第 1,2,3,4,5 天的細(xì)胞增殖能力表 1 各組細(xì)胞不同時(shí)間的平均吸光度（A）值（_x±s）不同時(shí)間吸光度（A）值
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R77

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