【摘要】：目的:耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)(spiral ganglion neurons,SGNs)能夠?qū)⒚?xì)胞接收到的聲音信號(hào)傳遞至聽(tīng)覺(jué)中樞并產(chǎn)生聽(tīng)力,其數(shù)量和功能對(duì)于維持正常聽(tīng)功能具有重要意義。受限于有限的再生能力,SGNs損傷后很難自發(fā)再生并恢復(fù)原有功能,各種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在此過(guò)程中發(fā)揮重要作用。神經(jīng)突起生長(zhǎng)因子Neuritin是一種與神經(jīng)可塑性密切相關(guān)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)其在促進(jìn)毛細(xì)胞轉(zhuǎn)分化再生方面具有重要作用,并可保護(hù)神經(jīng)纖維免于毛細(xì)胞缺失所致的繼發(fā)性損傷,說(shuō)明其在維持SGNs存活及功能方面具有潛在重要作用�；谏鲜鲅芯炕A(chǔ),本研究旨在利用長(zhǎng)爪沙鼠篩選并建立耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)特異性損傷所致的感音神經(jīng)性耳聾模型,探究其在保護(hù)受損耳蝸SGNs,修復(fù)受損聽(tīng)神經(jīng)功能中的作用,為SGNs缺失導(dǎo)致的感音神經(jīng)性耳聾的防治提供新的研究策略和科學(xué)依據(jù)。方法:1、取不同發(fā)育時(shí)期的耳蝸組織,用qPCR和WB方法,從分子水平檢測(cè)Neuritin的表達(dá)變化;冰凍切片后,用免疫熒光法,檢測(cè)Neuritin的表達(dá)定位,明確Neuritin在長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸發(fā)育各階段的表達(dá)變化。2、選擇3種耳毒性藥物(卡那霉素和呋塞米聯(lián)用、新霉素、哇巴因)造模,通過(guò)ABR檢測(cè)和組織形態(tài)學(xué)分析,篩選并鑒定出長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸SGNs特異性損傷的耳聾模型,并探究耳聾發(fā)生發(fā)展過(guò)程中Neuritin的表達(dá)變化,明確其表達(dá)與該耳聾模型的相關(guān)性。3、組織水平,建立乳鼠Corti組織的體外培養(yǎng)體系,使用哇巴因損傷SGNs的同時(shí)加入不同濃度的Neuritin蛋白,探究其對(duì)受損耳蝸SGNs的保護(hù)作用。動(dòng)物水平,利用方法2中確定的損傷模型,經(jīng)圓窗滴注不同劑量的Neuritin蛋白,通過(guò)ABR檢測(cè)和組織水平分析,綜合評(píng)價(jià)Neuritin對(duì)受損聽(tīng)功能的修復(fù)效果。結(jié)果:1、檢測(cè)發(fā)現(xiàn),Neuritin在長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸不同發(fā)育階段均有表達(dá),胚胎期第20天(E20)表達(dá)量較低,出生后1-56天(P1-56)表達(dá)持續(xù)升高;其表達(dá)主要分布于SGNs和Corti器區(qū)域。2、不同藥物建模結(jié)果顯示,僅低濃度哇巴因(1mM)可引起耳蝸SGNs特異性缺失,且伴聽(tīng)力閾值顯著上升,最終選定此條件進(jìn)行損傷模型的建立;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),損傷后耳蝸中Neuritin表達(dá)下調(diào),表明Neuritin的表達(dá)與該模型具有相關(guān)性,且呈負(fù)相關(guān)。3、體外研究顯示,Neuritin(16μg/mL)組和Neuritin(32μg/mL)組每100μm~2 SGNs的數(shù)量分別為13.2±1.2和16±2.6,顯著高于損傷組的7.3±2.2;每100μm神經(jīng)纖維的數(shù)量分別為8.2±1.1和11.6±1.5,也顯著高于損傷組的4.6±1.1,且排列更為整齊;各組毛細(xì)胞均不受影響。動(dòng)物水平結(jié)果顯示,在哇巴因損傷的同時(shí)經(jīng)圓窗滴注Neuritin蛋白可促進(jìn)部分聽(tīng)功能的恢復(fù),表現(xiàn)為Neuritin(16μg)組高頻區(qū)16kHz和32kHz聽(tīng)力閾值分別為32.5±8.9dB,61.3±3.5 dB,顯著低于損傷組的48.3±16.0 dB,85±5.5 dB;Neuritin(32μg)組高頻區(qū)8kHz、16kHz和32kHz聽(tīng)力閾值分別為25±10.7 dB,31.3±9.9 dB,55±5.3dB,均顯著低于損傷組。組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)顯示,Neuritin處理組中耳蝸中底回螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維的數(shù)量較損傷組顯著增多,與功能檢測(cè)的結(jié)果一致。結(jié)論:1、Neuritin在長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸發(fā)育過(guò)程中均有表達(dá),尤其在幼年至成年階段,且主要表達(dá)在耳蝸SGNs及Corti區(qū)域;2、低濃度哇巴因(1mM)誘導(dǎo)的長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸SGNs特異性缺失模型,為本研究選定的最佳動(dòng)物模型,在該模型中Neuritin的表達(dá)與SGNs的損傷呈負(fù)相關(guān)關(guān)系;3、體外和體內(nèi)研究表明,Neuritin劑量依賴性地維持了受損長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維的數(shù)量及排列,有效促進(jìn)了高頻損傷區(qū)域的聽(tīng)功能恢復(fù)。
【圖文】：

圖 1 耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)連接示意圖[6]1.2.3 SGNs 損傷途徑的研究關(guān)于神經(jīng)性耳聾的研究一直是熱點(diǎn)，其中 SGNs 的損傷是引起神經(jīng)性耳聾的主要原因。耳鍋 I 型 SGNs 是將毛細(xì)胞產(chǎn)生的生物電信號(hào)傳入中樞的第一級(jí)傳入神經(jīng)元[7]，其數(shù)量占耳鍋螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元總數(shù)的絕大部分，因此在 I 型 SGNs損傷的情況下，，可造成不同程度的不可逆的神經(jīng)性耳聾，這是導(dǎo)致神經(jīng)性耳聾的重要原因。闡明其損傷的途徑，是對(duì)其有效治療或保護(hù)的重要基礎(chǔ)。據(jù)目前研究表明，引起螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺失的途徑有很多，主要包括氧化應(yīng)激途徑、離子通道途徑、細(xì)胞凋亡途徑、繼發(fā)性損傷途徑等。主要損傷因素包括耳毒性藥物（卡鉆、順銷、膽紅素、氨基糖苷類抗生素、強(qiáng)心苷類等耳毒性藥物）、物理原因（缺血、缺氧、噪聲等）、遺傳因素、年齡以及感染炎癥等。在眾多致感音神經(jīng)性耳聾的因素中，耳毒性藥物較為普遍。其中氨基糖苷類

經(jīng)突起神經(jīng)生長(zhǎng)因子在不同發(fā)育階段長(zhǎng) 在長(zhǎng)爪沙鼠耳蝸不同發(fā)育階段中的表達(dá)uritin 與感音神經(jīng)性耳聾的相關(guān)性，本實(shí)驗(yàn)首先檢發(fā)育階段中的表達(dá)變化。取長(zhǎng)爪沙鼠不同發(fā)育階.4.4 的蛋白和 RNA 檢測(cè)方法操作，mRNA 水平沙鼠耳蝸發(fā)育的各階段均有不同程度的表達(dá)，且胎期（圖 3.1A）。蛋白水平檢測(cè)結(jié)果與 mRNA 示，Neuritin 在胚胎期 20 左右表達(dá)量較低，出生 P56 Neuritin 在耳蝸中的表達(dá)量持續(xù)升高，至出生極顯著差異，表明 Neuritin 可能在長(zhǎng)爪沙鼠幼年鍵作用（圖 3.1 B）。
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R764

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 侯寧;;氨基糖苷類抗菌藥物及其臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J];中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析;2014年08期

2 沈勵(lì);劉民;;聽(tīng)力殘疾的流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

3 丁大連;Richard Salvi;;氨基糖苷類抗生素耳毒性研究[J];中華耳科學(xué)雜志;2007年02期

本文編號(hào)：2687544