【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)旨在探討MACC1過(guò)表達(dá)對(duì)于鼻咽癌CNE-2細(xì)胞放療敏感性的影響及其機(jī)制。方法:(1)本實(shí)驗(yàn)采用Western blot技術(shù)檢測(cè)鼻咽癌5-8F、HNE-1、CNE-1、CNE-2細(xì)胞株中MACC1的蛋白表達(dá)水平。(2)通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)建立過(guò)表達(dá)MACC1的CNE-2細(xì)胞株,篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。(3)采用QPCR及WB實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MACC1 mRNA及MACC1蛋白的表達(dá),證實(shí)上調(diào)效率穩(wěn)定有效后,進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。(3)實(shí)驗(yàn)分為3個(gè)組別:實(shí)驗(yàn)組(CNE-2 MACC1過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株組);陰性對(duì)照組(CNE-2陰性穩(wěn)定株組);空白對(duì)照組(CNE-2空細(xì)胞組)。用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MACC1過(guò)表達(dá)后CNE-2細(xì)胞的放射敏感性變化。(4)流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)MACC1過(guò)表達(dá)對(duì)CNE-2細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡的影響。結(jié)果:(1)CNE-2細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效率約為80-90%。倒置熒光顯微鏡顯示各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞發(fā)出GFP熒光。(2)在MACC1基因的慢病毒轉(zhuǎn)染CNE-2細(xì)胞48h后,經(jīng)QPCR檢測(cè),通過(guò)2-ΔΔCt分析法分析得出實(shí)驗(yàn)組MACC1 Ct值為為17.1,提示MACC1mRNA過(guò)表達(dá);Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞條帶明顯,提示MACC1蛋白的過(guò)表達(dá),MACC1過(guò)表達(dá)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞株構(gòu)建成功。(3)克隆形成實(shí)驗(yàn)表明:在0、2、4、6Gy照射劑量下,實(shí)驗(yàn)組較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組存活分?jǐn)?shù)(SF)均增高(P0.05)�？瞻讓�(duì)照組較陰性對(duì)照組存活分?jǐn)?shù)(SF)無(wú)明顯變化(P0.05)。構(gòu)建單擊多靶模型擬合細(xì)胞存活曲線,實(shí)驗(yàn)組、空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組D_0、D_q、N分別為(3.48,1.61,1.59)、(2.37,1.26,1.70)、(2.68,1.20,1.57)。實(shí)驗(yàn)組對(duì)于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組的放射增敏比(SER)分別為為0.68及0.77。(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明:與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期G_0-G_1期分布減少,S期分布增加,凋亡率減少(P0.05)。結(jié)論:MACC1過(guò)表達(dá)可降低鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的放療敏感性,其機(jī)制可能與MACC1過(guò)表達(dá)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞G_0-G_1期分布減少,S期分布增加以及細(xì)胞凋亡減少相關(guān)。
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果第 3 章 結(jié)果.1 Western blot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)鼻咽癌 5-8F、HNE-1、CNE-1、CNE-2 MACC1 蛋白的表達(dá)采用 Western blot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)鼻咽癌 CNE-2、HNE-1、CNE-1、5-8F 細(xì)胞ACC1 的表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 1 所示，HNE-1 條帶明顯，有 MACC1 的達(dá)，CNE-1 可見(jiàn)表達(dá)，但表達(dá)水平不高，CNE-2 和 5-8F 細(xì)胞株未見(jiàn)條帶，無(wú) MACC1 蛋白的表達(dá)或表達(dá)量很低。

圖 2 在 MOI 約為 60 左右時(shí)，感染效率比較高，細(xì)胞狀態(tài)也比較好 （72H， 200×3.3 Q-PCR 檢測(cè) 慢病毒轉(zhuǎn)染 CNE-2 細(xì)胞后 MACC1 表達(dá)的況Macc1 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 CNE-2 細(xì)胞，，結(jié)果顯示 Macc1 基因有顯的過(guò)表達(dá)效果,過(guò)表達(dá) CNE-2 細(xì)胞構(gòu)建成功。（圖 3、圖 4 及表 1
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：2680359