【摘要】：目的阻塞性睡眠呼吸暫停(OSAHS)與非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)有著密切的關(guān)系,但目前尚缺少關(guān)于老年人群中兩者關(guān)系的研究,同時,OSAHS特征性的慢性間歇低氧造成肝損傷的機制尚未明確,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在其中可能起到了一定的作用,此研究的目的在于:在臨床方面,探討老年人群中OSAHS與NAFLD的關(guān)系,并且通過細胞實驗探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在間歇低氧導(dǎo)致肝損傷中的作用及可能的作用機制。方法臨床研究中,根據(jù)納入和排除條件,我們在2017年1月至2018年12月期間連續(xù)招募65歲以上的懷疑存在睡眠呼吸紊亂并且接受了多導(dǎo)睡眠圖的患者,按呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)對患者進行分組,分析老年NAFLD患者中合并不同嚴(yán)重程度OSAHS綜合征患者之間的差異;按是否存在NAFLD對患者進行分組,分析老年OSAHS患者中非NAFLD與NAFLD患者之間的差異以,并通過logistic回歸分析評估老年OSAHS患者中NAFLD發(fā)生的可能的危險因素�；A(chǔ)研究中,L02細胞(正常人肝細胞)在常氧條件下或在間歇低氧的條件下培養(yǎng)4、8和12小時,部分間歇低氧處理的L02細胞在暴露于低氧前1小時應(yīng)用4-PBA處理,觀察4-PBA對間歇低氧導(dǎo)致的肝損傷、肝細胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和PERK-eIFa2-ATF4-CHOP凋亡途徑的影響。結(jié)果臨床研究結(jié)果顯示,老年NAFLD患者根據(jù)OSAHS嚴(yán)重程度(AHI)分組后,各組之間的肝酶(ALT、AST、GGT)水平并沒有顯著的差異;而根據(jù)老年OSAHS患者是否存在NAFLD分組后發(fā)現(xiàn),各組間的體重指數(shù)(BMI)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、血甘油三酯(TG)、肝酶(ALT、AST、GGT)水平、血氧飽和度低于90%的時間(TS90%)、氧減指數(shù)(ODI)和AHI存在著顯著的差異;其中,BMI、TS90%和ODI這三項指標(biāo)可能是老年OSAHS患者發(fā)生NAFLD的危險因素�；A(chǔ)研究結(jié)果顯示,1.間歇低氧可以引起肝細胞凋亡;2.間歇低氧可以引起肝細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS);3.間歇低氧可以引起肝損傷;4.4-PBA可以減輕間歇低氧誘導(dǎo)的肝細胞損傷;5.4-PBA可以通過抑制細胞凋亡減輕間歇低氧誘導(dǎo)的肝臟細胞損傷;6.4-PBA可以抑制ERS相關(guān)凋亡通路(PERK-eIF2a-ATF4-CHOP),但并不抑制間歇低氧誘導(dǎo)的未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)。結(jié)論1.老年NAFLD患者中,OSAHS特征性慢性間歇低氧可能不會導(dǎo)致肝酶的顯著升高;2.老年OSAHS患者中,BMI、TS90%和ODI可能是促進NAFLD發(fā)生和發(fā)展的危險因素,因此,控制體重和改善睡眠中的低氧血癥對于降低或預(yù)防老年OSAHS患者NAFLD的發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要,另外,BMI、TS90%和ODI這三項指標(biāo)也可能可以作為老年OSAHS患者是否存在NAFLD的預(yù)測指標(biāo);3.4-PBA是通過抑制ERS介導(dǎo)的細胞凋亡來減輕間歇低氧誘導(dǎo)肝細胞損傷的,而不是通過減少UPR來保護肝細胞的。
【圖文】：

2.1.1.4 L02 細胞的分組L02 細胞在含 10%(V/V)胎牛血清、100 單位/ml 青鏈霉素的 RPMI 1640 培養(yǎng)基中，37℃在 5% CO2條件下培養(yǎng)，每 3-5 天傳代。之后細胞被隨機分為常氧組、間歇低氧組以及間歇低氧+4-PBA 組：實驗前，常氧組的細胞在常氧條件下（NC組，21%O2）培養(yǎng) 12h；間歇低氧組（IH 組）在間歇低氧的條件下（使用定制設(shè)計的計算機控制的培養(yǎng)箱進行 IH 暴露，，1.5%O210 分鐘，隨后 21%O25 分鐘，反復(fù)循環(huán)）培養(yǎng) 4、8 或 12 小時；間歇低氧+4-PBA 組（IH+4PBA 組）的 L02細胞在低氧處理前 1 小時將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的抑制劑 4-苯基丁酸（4-phenylbutyricacid，4-PBA）加入到培養(yǎng)基中（10mm）。2.1.2 間歇低氧的實驗方法2.1.2.1 實驗儀器和實驗耗材電腦程控裝置、低氧艙、壓縮氧氣瓶、壓縮空氣瓶、氧氣表、氧濃度檢測儀、溫控板（圖 1）

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文歇低氧暴露時間的延長而有所變化，我們將常氧條件下培養(yǎng)了 12 小時的 L02 細胞作為對照組（NC 組，negative control），將間歇低氧處理的 L02 細胞分為四個組，分別進行不同時間的間歇低氧暴露（4、8 和 12 小時），分別為 4h、8h和 12h 組。用免疫蛋白印跡法檢測了活化的 caspase-3 和活化的 caspase-12 的表達水平。如圖 2A 和 B 所示，L02 細胞在間歇低氧處理 4、8 和 12 小時后，活化的 caspase-3 和活化的 caspase-12 的表達水平顯著升高（P＜0.05），并且其中 12h組活化的 caspase-3 和活化的 caspase-12 的表達水平顯著高于 4h 和 8h 組（P＜0.05）。 這一結(jié)果表明，間歇低氧可以引起肝細胞凋亡，并且會隨著間歇低氧暴露時間的延長而加重。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R766;R575

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本文編號：2641952