【摘要】：目的:通過(guò)檢測(cè)二甲雙胍對(duì)鼻咽癌(NPC)細(xì)胞株CNE-1增殖及凋亡的影響,二甲雙胍對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-1R)表達(dá)水平的影響,胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1,胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體特異性激動(dòng)劑)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE-1增殖及IGF-1R表達(dá)水平的影響,從而探討二甲雙胍對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE-1的作用及IGF-1R在該過(guò)程中的作用。方法:1.采用CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞(0-80濃度梯度)的增殖活性,流式細(xì)胞儀技術(shù)Annexin-V/PI雙染法分析各組細(xì)胞(0-40濃度梯度)的凋亡情況,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)法檢測(cè)各組別(0-20濃度梯度)中凋亡相關(guān)基因Bax、bcl-2 mRNA的表達(dá)水平,從而檢測(cè)不同濃度二甲雙胍(0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L、80mmol/L)作用24h后對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE-1的增殖及凋亡影響。2.采用qPCR法檢測(cè)IGF-1R mRNA的表達(dá)水平,免疫蛋白印跡法(WB)檢測(cè)IGF-1R蛋白的表達(dá)水平,從而檢測(cè)不同濃度二甲雙胍(0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L)作用24h后對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE-1中IGF-1R表達(dá)的影響。3.為說(shuō)明IGF-1R的表達(dá)變化與鼻咽癌細(xì)胞CNE-1增殖的關(guān)系,以及為進(jìn)一步說(shuō)明IGF-1R在二甲雙胍抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用,我們將細(xì)胞分為對(duì)照組,IGF-1(100ng/ml)組和二甲雙胍(20mmol/L)聯(lián)合IGF-1(100ng/ml)組,均在作用24h后,采用CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖活性,免疫蛋白印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞中IGF-1R蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.不同濃度組二甲雙胍處理細(xì)胞24h后,CCK8法結(jié)果示二甲雙胍組細(xì)胞增殖活性均比對(duì)照組低(除5mM濃度組外P均0.05);流式細(xì)胞儀結(jié)果示二甲雙胍組凋亡率均比對(duì)照組高(除5mM濃度組外P均0.05);qPCR結(jié)果提示二甲雙胍組的促凋亡基因bax mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組上調(diào)(各組P值均0.05),而抑制凋亡基因bcl-2 mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組下調(diào)(各組P值均0.05)。2.不同濃度組二甲雙胍處理細(xì)胞24h后,qPCR法及免疫蛋白印跡法結(jié)果均示IGF-1R表達(dá)水平比對(duì)照組低(各組P值均0.05)。3.CCK8法結(jié)果顯示經(jīng)IGF-1處理的CNE-1細(xì)胞增殖活性高于對(duì)照組(P0.05),而二甲雙胍聯(lián)合IGF-1處理組的細(xì)胞增殖活性明顯低于IGF-1組(P0.05);免疫蛋白印跡法結(jié)果顯示經(jīng)IGF-1處理后的CNE-1細(xì)胞中的IGF-1R蛋白水平較對(duì)照組高(P0.05),而二甲雙胍聯(lián)合IGF-1處理組與單純IGF-1處理組相比,IGF-1R蛋白表達(dá)水平下調(diào)(P0.05)。說(shuō)明二甲雙胍能逆轉(zhuǎn)IGF-1的促細(xì)胞作用。結(jié)論:二甲雙胍有抑制鼻咽癌細(xì)胞CNE-1增殖并誘導(dǎo)其凋亡的作用,其機(jī)制與IGF-1R表達(dá)下調(diào)有關(guān)。
【圖文】：

組二甲雙胍處理細(xì)胞 24h 后，CCK8 法檢測(cè)各組 及圖 3.1 可知，與對(duì)照組相比，除 5mM 組 P=0.0組均 P=0.0001＜0.05，提示二甲雙胍能抑制細(xì)胞制作用呈增強(qiáng)趨勢(shì)。 不同濃度二甲雙胍對(duì) CNE-1 細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制mmol/L） OD450 值 抑制率 1.36±0.06 0 1.14±0.08ns13.69±0 0.98±0.09** 28.14±0 0.77±0.12** 36.72±0 0.55±0.17** 59.59±0 0.33±0.07** 75.78±甲雙胍處理細(xì)胞 24h 后，用 CCK8 法測(cè)細(xì)胞增殖活性，采mmol/L 組）相比，ns 為 P＞0.05，** P＜0.01，n=3(三

第 3 章 結(jié)果3.2 二甲雙胍對(duì) CNE-1 細(xì)胞凋亡的影響二甲雙胍處理細(xì)胞 24h 后，流式細(xì)胞儀凋亡分析結(jié)果顯示，每組總凋亡率為：對(duì)照組（6.17±0.74）%，5mmol/L 二甲雙胍組（8.11±1.29）%，10mmol/L 二甲雙胍組（11.97±3.82）%，，20mmol/L 二甲雙胍組（13.94±2.98）%，40mmol/L 二甲雙胍組（24.2±2.79）%，可見(jiàn)二甲雙胍能促進(jìn) CNE-1細(xì)胞凋亡，與對(duì)照組相比，5mmol/L 濃度組 P=0.3＞0.05，10mmol/L 濃度組P=0.01＜0.05，20mmol/L 濃度組 P=0.003＜0.01，40mmol/L 濃度組 P=0.0001＜0.01，凋亡率大致隨著藥物的濃度升高而逐漸上升，見(jiàn)圖 3.2A 及圖 3.2B。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2634330