發(fā)布時間：2020-04-08 13:57

【摘要】：目的:觀察銀杏葉提取物(extract ginkgo biloba,EGB)通過Nrf2-ARE信號通路對慢性間歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)胰腺組織中的影響作用及干預機理。方法:54只野生型雄鼠隨機分為9組,分別為正常對照組1、2,間歇性低氧組1、2,和抗體阻斷組、Nrf2激活劑組、EGB低、中、高濃度組,每組6只。30只Nrf2基因敲除型雄鼠隨機分為5組,分別為正常對照組,間歇性低氧組,EGB低、中、高濃度組,每組6只。所有小鼠適應性飼養(yǎng)一周后開始造模,常氧對照組正常空氣中飼養(yǎng),常氧對照組1組:腹腔注射生理鹽水1 ml,每天1次,分別和抗體激活組、抗體阻斷組對照。常氧對照組2組:10ml/kg/d生理鹽水灌胃,和EGB干預組對照。間歇性低氧組放置低氧倉造模。建模成功后開始干預;間歇性低氧組1組:腹腔注射生理鹽水1 ml,每天1次,分別和抗體激活組、抗體阻斷組對照。間歇性低氧組2組:10 ml/kg/d生理鹽水灌胃,和EGB干預組對照。Nrf2抗體阻斷組:腹腔注射抗Nrf2抗體,每天1次;Nrf2激活劑組:腹腔注射萊菔硫烷5mg/Kg·d,Nrf2;EGB低、中、高濃度組:EGB灌胃,劑量分別為50mg/Kg·d、100mg/Kg·d、200mg/Kg·d。干預10周后用RT-PCR半定量和Western-Blot法分別檢測胰腺組織核因子E2相關因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(Gamma-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)、NAD(P)H:苯醌氧化還原酶1(NAD(P)H-quino oxidoreductase 1,NQO1)的mRNA和蛋白的表達水平。結果:野生型小鼠中,1.蛋白表達情況:與常氧對照組1比較,間歇性低氧組1 HO-1、NQO1表達水平下降,γ-GCS表達升高(p0.05);與間歇性低氧組1比較,Nrf2激活劑組HO-1、NQO1、γ-GCS表達水平均上升(p0.05);抗Nrf2抗體組HO-1、NQO1、γ-GCS表達水平均下降(p0.05);與常氧對照組2比較,間歇性低氧組2 HO-1、NQO1表達水平均下降,γ-GCS表達升高(p0.05);與間歇性低氧組2比較,EGB低濃度組γ-GCS表達水平上升(p0.05);HO-1、NQO1無顯著差異(p0.05),EGB中濃度組NQO1、γ-GCS表達水平上升(p0.05);HO-1無顯著差異(p0.05),EGB高濃度組HO-1、NQO1、γ-GCS表達水平均上升,且高濃度組比低濃度組變化更明顯(p0.05)。2.mRNA表達情況:與常氧對照組1比較,間歇性低氧組1 HO-1、NQO1、γ-GCS mRNA表達下降(p0.05);與間歇性低氧組1比較,抗Nrf2抗體組HO-1、NQO1、γ-GCS mRNA表達均下降(p0.05);Nrf2激活劑組NQO1、γ-GCS、HO-1 mRNA表達升高(p0.05);與常氧對照組2比較,間歇性低氧組1 HO-1、NQO1、γ-GCS mRNA表達下降(p0.05);與間歇性低氧組2比較,EGB低濃度組HO-1 mRNA表達下降,NQO1、γ-GCS mRNA表達升高(p0.05);EGB中濃度組HO-1mRNA表達下降,γ-GCS、NQO1 mRNA表達升高(p0.05);EGB高濃度組HO-1、γ-GCS、NQO1 mRNA表達升高(p0.05)�；蚯贸托∈笾�,1.蛋白表達情況:與常氧對照組比較,間歇性低氧組HO-1、NQO1、γ-GCS表達無顯著差異(p0.05);與間歇性低氧組比較,EGB低濃度組HO-1、NQO1、γ-GCS無顯著差異(p0.05),EGB中濃度組NQO1、γ-GCS表達水平均上升(p0.05);HO-1無顯著差異(p0.05),EGB高濃度組通路下游HO-1、NQO1、γ-GCS表達水平均上升,高濃度組比低濃度組變化更明顯(p0.05)。2.mRNA表達情況:與常氧對照組比較,間歇性低氧組NQO1、γ-GCS mRNA表達無明顯差異(p0.05),HO-1 mRNA表達升高(p0.05);與間歇性低氧組比較,EGB低濃度組NQO1 mRNA表達無明顯差異(p0.05),HO-1、γ-GCS mRNA表達升高(p0.05);EGB中濃度組NQO1、HO-1、γ-GCS mRNA表達升高(p0.05);EGB高濃度組NQO1 mRNA表達無明顯差異(p0.05),HO-1、γ-GCS mRNA表達升高(p0.05)。結論:1.間歇性低氧導致的氧化應激參與了OSAS的發(fā)生發(fā)展過程,可能是OSAS胰腺組織損害,胰島β細胞氧化損傷及凋亡的重要機制。2.Nrf2-ARE信號通路能調(diào)節(jié)間歇性低氧所致的氧化應激及炎癥因子水平,減輕胰腺組織損傷,對胰島β細胞起保護作用,改善胰島功能。3.EGB可減輕間歇性低氧后氧化應激損傷程度,對胰腺組織有保護作用,其機制可能與激活Nrf2-ARE信號通路有關。EGB在糖尿病合并OSAS患者的治療中具有潛在的臨床應用價值。
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R766;R587.1

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7 周q，

本文編號：2619430